吳梓春　何兆錦（廣東省佛山市第一人民醫(yī)院（中山大學(xué)附屬佛山醫(yī)院）藥學(xué)部　佛山　528000）

不同產(chǎn)地白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯I和II的含量測(cè)定

吳梓春何兆錦（廣東省佛山市第一人民醫(yī)院（中山大學(xué)附屬佛山醫(yī)院）藥學(xué)部佛山528000）

目的：探討不同產(chǎn)地白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯I和白術(shù)內(nèi)酯II的高效液相測(cè)定方法。方法：選擇浙江、安徽、甘肅、江西四個(gè)產(chǎn)地的白術(shù)藥材，色譜柱采用Hypersil 0DS（4.6mm×250mm，2.5μm），流動(dòng)相為乙腈∶水=55∶45，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)223nm。結(jié)果：白術(shù)內(nèi)酯I的線性關(guān)系方程為：Y=3.546×104+0.524×104（r=0.9998），在0.5～500μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；白術(shù)內(nèi)酯II的線性關(guān)系方程為：Y=4.746×104+0.949×104（r=0.9997），在0.5～500μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。白術(shù)內(nèi)酯I的平均加樣回收率為99.74%，RSD1.32%，白術(shù)內(nèi)酯II平均加樣回收率為99.68%，RSD為2.01%。浙江產(chǎn)白術(shù)藥材中兩種有效成分含量最高，江西產(chǎn)白術(shù)藥材的兩種有效成分含量較低。結(jié)論：高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地白術(shù)中的有效成分，方法簡(jiǎn)單易操作，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，重復(fù)性強(qiáng)，可以作為白術(shù)質(zhì)量控制的定量指標(biāo)。

白術(shù)內(nèi)酯I白術(shù)內(nèi)酯II高效液相色譜 不同產(chǎn)地

中藥白術(shù)為菊科（Composetae）蒼術(shù)屬（Atractylodes）植物白術(shù)（Atractylodes macrocephala Koidz）的干燥根莖［1］，多數(shù)分布于我國(guó)的浙江、安徽、甘肅、湖南以及江西等產(chǎn)地［2］。白術(shù)味苦、甘，性溫，主要?dú)w脾胃經(jīng)，功能健脾益氣，燥濕利水，為補(bǔ)益類的補(bǔ)氣中藥材［3］。由于我國(guó)白術(shù)的產(chǎn)地較多，藥材的質(zhì)量也有一定的差異，我國(guó)各個(gè)地域的生態(tài)環(huán)境、氣候等不同，導(dǎo)致了不同產(chǎn)地白術(shù)藥材有效成分的含量存在差異。為了加強(qiáng)白術(shù)藥材的質(zhì)量控制，本研究以白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯II的含量作為觀察指標(biāo)，采用高效液相色譜法觀察不同產(chǎn)地白術(shù)中上述兩種有效成分的含量。

1　儀器與試藥

1.1實(shí)驗(yàn)儀器：日本島津LC-10AT型單泵高效液相色譜儀，SPD-10AVP型紫外檢測(cè)器，島津CBM色譜工作站。手提式高速萬能粉碎機(jī)DFD-100、4號(hào)篩，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，KQ-500E型超聲波清洗儀，美國(guó)梅特勒電子分析天平（精密度為0.0001g），PL-80離心沉淀機(jī)。

1.2實(shí)驗(yàn)試藥：白術(shù)藥材采自浙江、安徽、甘肅、江西四個(gè)產(chǎn)地，藥材均經(jīng)專家鑒定分別為菊科（Compositae）植物白術(shù)（Atractylodes macrocephala koidz）的干燥根莖和菊科植物Atractylades macrocephalacv.Yuzhu的干燥根莖。乙腈為色譜純，水為三蒸水，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件的選擇：色譜柱采用Hypersil 0DS（4.6mm×250mm，2.5μm），流動(dòng)相為乙腈∶水=55∶45，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)223nm，進(jìn)樣量為20μL。以白術(shù)內(nèi)酯I作為參考，色譜柱的理論塔板數(shù)＞5000。

2.2對(duì)照品溶液的制備：精密稱定白術(shù)內(nèi)酯I對(duì)照品0.4mg，置于5ml容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度后搖勻，靜置；取白術(shù)內(nèi)酯II對(duì)照品0.45mg精密稱定后置于5ml容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度后搖勻，靜置。兩種對(duì)照品溶液置于-20℃冰箱中保存，備用。

2.3供試品溶液的制備：取白術(shù)藥材2.0g置于粉碎機(jī)中粉碎后過4號(hào)篩，精密稱定后置于加塞錐形瓶中，加入甲醇溶液50ml后稱定重量，超聲處理40min。放冷后再次稱定重量，甲醇溶液將減少的重量補(bǔ)足后以塞蓋住錐形瓶，搖勻，過0.45μm微孔濾膜后，置于3000轉(zhuǎn)/min的離心機(jī)中離心10min，取上清液即得供試品溶液。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將分別溶解于甲醇溶液中的白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯II對(duì)照品溶液稀釋成0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0μg/ml的白術(shù)內(nèi)酯I、II標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，分別進(jìn)樣20μL，以白術(shù)內(nèi)酯I、II色譜峰面積作為縱坐標(biāo)，白術(shù)內(nèi)酯I、II對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程以及相關(guān)系數(shù)。白術(shù)內(nèi)酯I的線性關(guān)系方程為：Y= 3.546×104+0.524×104（r=0.9998），在0.5～500μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；白術(shù)內(nèi)酯II的線性關(guān)系方程為：Y=4.746×104+0.949×104（r=0.9997），在0.5～500μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5穩(wěn)定性考察：取同一批次的樣品藥材，按照“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行操作，制備供試品溶液后精密吸取同一供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，分別在配制溶液后0、1、4、6、8、12、24h吸取20μL進(jìn)樣分析，按照線性關(guān)系方程計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯II在供試品溶液中的穩(wěn)定性，結(jié)果表明白術(shù)內(nèi)酯I的RSD值為2.14%，白術(shù)內(nèi)酯II的RSD值為2.01%，表明溶液在24h內(nèi)較為穩(wěn)定。

2.6精密度考察：將：2.5：項(xiàng)下配制的同一批次供試品溶液，吸取20μL，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算峰面積值，結(jié)果表明其RSD值為1.36%，表明該儀器的精密度良好。

2.7重現(xiàn)性考察：取同一白術(shù)樣品粉末，精密稱取5份，每份為1.245g，按照“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液的制備方式進(jìn)行配制，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣后得到白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯II的RSD分別為1.84%、1.76%，表明該色譜條件下測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取已知白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯II含量的白術(shù)粉末，精密稱定5份，精密加入白術(shù)內(nèi)酯I、II對(duì)照品適量，按照“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方式進(jìn)行供試品溶液的配制，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行色譜圖的分析，計(jì)算平均加樣回收率，結(jié)果見表1、表2。

表1　白術(shù)內(nèi)酯I加樣回收率測(cè)定結(jié)果（n=5）

表2　白術(shù)內(nèi)酯II 加樣回收率測(cè)定結(jié)果（n=5）

2.9不同產(chǎn)地白術(shù)含量測(cè)定結(jié)果：取浙江、安徽、甘肅、江西白術(shù)樣品約1.0g，精密稱定后按照“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液制備溶液并進(jìn)行處理測(cè)定，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算不同產(chǎn)地白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯I、II的含量并進(jìn)行比較，結(jié)果見表3。

表3　不同產(chǎn)地白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯I、II含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

3.1流動(dòng)相的選擇：本研究中采用了乙腈：水，甲醇：水等按照不同比例流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果顯示在乙腈∶水=55∶45時(shí)色譜系統(tǒng)可以獲得較好的峰形，同時(shí)色譜峰分離較好。因此實(shí)驗(yàn)中選擇乙腈：水作為流動(dòng)相。

3.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：采用Agilent 1100DAD三維圖譜進(jìn)行分析得到白術(shù)內(nèi)酯類化合物在223nm處有最大的吸收峰，為了在同一條件下進(jìn)行檢測(cè)，選擇同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)波長(zhǎng)的信號(hào)［4］。

不同產(chǎn)地的白術(shù)內(nèi)酯含量具有一定的差異［5］，在相同的測(cè)定條件下，分離得到的白術(shù)內(nèi)酯I、II含量，浙江產(chǎn)地的白術(shù)藥材中最多，江西產(chǎn)地的藥材則偏少，因此如果要獲得較多含量的白術(shù)內(nèi)酯可以選擇浙江產(chǎn)的白術(shù)中藥材。

［1］趙桂芝，洪學(xué)智.白術(shù)內(nèi)酯的藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥房，2012，20（3）：230-231.

［2］曾志，周育妹.3個(gè)不同產(chǎn)地白術(shù)的揮發(fā)性化學(xué)成分比較［J］.華南師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，47（5）：78-83.

［3］趙紅紅.三產(chǎn)地白術(shù)揮發(fā)油氧化分解后化學(xué)成分的變化［J］.山西大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，38（3）：516-521.

［4］田穎.不同產(chǎn)地白術(shù)藥材中白術(shù)內(nèi)酯II和III的含量測(cè)定［J］.海峽藥學(xué)，2012，24（8）：65-67.

［5］姜東京，徐志偉.浙江道地藥材於術(shù)與白術(shù)的質(zhì)量對(duì)比研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2014，32（12）：2864-2866.

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1672-8351（2016）09-0010-02