劉超祥，丁銳

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)

王珊

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800;安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230000)

丁連峰

(安徽濟(jì)人藥業(yè)有限責(zé)任公司，安徽 亳州 236800)

劉耀武

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)

?

亳州疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分及抗氧化與抑菌活性研究

劉超祥，丁銳

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)

王珊

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800;安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230000)

丁連峰

(安徽濟(jì)人藥業(yè)有限責(zé)任公司，安徽 亳州 236800)

劉耀武

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)

疏毛羅勒(OcimumbasilicumL)；揮發(fā)油(;抗氧化性;抑菌活性

疏毛羅勒(OcimumbasilicumL)為唇形科羅勒屬一年生全草植物，別名蘭香、九層塔等。其味辛甘、性溫，有疏風(fēng)解表、行氣活血、解毒消腫之功效。主治感冒頭痛、發(fā)熱咳嗽、食積不化、中暑等癥[1,2]，還可用于蛇蟲咬傷和濕疹騷癢，且無毒副作用。近年來，羅勒的化學(xué)成分及生物活性研究引起國內(nèi)外科研工作者關(guān)注，疏毛羅勒藥理學(xué)研究主要集中在降低血糖活性、抗應(yīng)激活性、驅(qū)蟲活性、治療腹瀉、抗真菌活性和抗輻射引起的染色體損傷等領(lǐng)域[3,4]。

對亳州疏毛羅勒(羅勒變種，俗稱香花子)的實(shí)地調(diào)研和臨床觀察，發(fā)現(xiàn)亳州疏毛羅勒揮發(fā)油成分對蚊蟲叮咬引起的痛癢和炎癥具有特殊療效[5]。基于此，本研究對亳州地區(qū)疏毛羅勒揮發(fā)油的化學(xué)成分分析、抗氧化及抑菌活性進(jìn)行了研究，試圖找到疏毛羅勒揮發(fā)油成分對蚊蟲叮咬引起的痛癢與抑菌活性、抗氧化活性之間的聯(lián)系，為亳州地區(qū)疏毛羅勒的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

樣品：采自安徽省亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥用植物園，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)方成武教授鑒定。

主要儀器：RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(亞榮生化儀器廠產(chǎn)品)，F(xiàn)A2004N電子天平(菁海儀器有限公司產(chǎn)品)，752紫外可見分光光度計(jì)(菁華科技儀器有限公司產(chǎn)品)，SHZ-(Ⅲ)循環(huán)水式多用真空泵(河南省予華儀器有限公司產(chǎn)品)，HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋(晶波實(shí)驗(yàn)儀器廠產(chǎn)品)，456-GC型氣相色譜(Bruker公司生產(chǎn)),SCION單四級桿質(zhì)譜儀(Bruker公司生產(chǎn))，SPX-150B生化培養(yǎng)箱、MJX-160B霉菌培養(yǎng)箱、HPX -9082MBE電熱恒溫培養(yǎng)箱(均為上海博迅實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品)，AR5120電子分析天平(美國奧豪斯國際貿(mào)易有限公司產(chǎn)品)。

試劑：羥甲基氨基甲烷、DPPH·、抗壞血酸(Vc)、鄰苯三酚、0.9%無菌氯化鈉溶液、丙酮等，所用試劑均為分析純。

菌株及培養(yǎng)基：大腸埃希菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁(瓊脂)培養(yǎng)基、氯化鈉蛋白胨緩沖液(pH 7.0)均由安徽濟(jì)人藥業(yè)有限責(zé)任公司檢測中心提供。

1.2方法

1.2.1揮發(fā)油的提取

取疏毛羅勒200g，剪碎，裝入500mL的圓底燒瓶中，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油[6]，乙醚萃取，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醚后，得到淡黃色透明油狀物0.9g，揮發(fā)油得率0.45%，具有特殊香味，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2化學(xué)成分分析

采用氣-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對疏毛羅勒揮發(fā)油成分進(jìn)行分析。

氣相色譜條件：彈性毛細(xì)管色譜柱(BR-17型，奧嵩科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品，0.25μm×250μm×30m)，載氣：高純氦氣(南京上元工業(yè)氣體廠產(chǎn)品)，純度大于99.99%，柱流量1.0mL/min，采用分流進(jìn)樣，分流比 10∶1，進(jìn)樣量1.0μL，進(jìn)樣口溫度為 220℃；程序升溫條件：初始溫度為40℃(2min)，以2℃/min的速度升溫至100℃(保持2min)，再以5℃/min的速度升溫至250℃。

質(zhì)譜條件：EI離子源，電子能量70eV，離子源溫度為220℃，傳輸線溫度為260℃，四級桿溫度 為150℃；全掃描模式，掃描周期 1s，質(zhì)譜檢索標(biāo)準(zhǔn)庫：NIST 11.L。

1.2.3抗氧化活性測定

抑制率 (I)={[(△D/△t)對照- (△D/△t)]/ (△D/△t)對照}× 100%

2)清除DPPH·自由基能力測定參考文獻(xiàn)[10,11]的方法測試目標(biāo)化合物清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的能力。向1mL DPPH·乙醇溶液中加入不同濃度的疏毛羅勒揮發(fā)油使總體積達(dá)到2mL。振蕩器混勻后，室溫，避光放置30min后，在518nm波長處測定光密度D1，DPPH·乙醇溶液在518nm波長處測定光密度D0，平行測定3次，按下式計(jì)算清除率。用Vc進(jìn)行空白對照。

清除率=[(D0-D1)/D0]×100%

1.2.4抑菌活性測定

采用杯碟法[12]，檢測疏毛羅勒揮發(fā)油對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的抑制作用。樣品設(shè)5個(gè)濃度，分別為1050、525、262.5、131.25、65.625 μg/mL。

2　結(jié)果與分析

2.1疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分

采用GC/MS分析對疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行分析，共檢測出27個(gè)峰。對總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，經(jīng)計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索按各色譜峰的質(zhì)譜裂片圖并結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)對峰質(zhì)荷比和相對豐度等進(jìn)行直觀比較，同時(shí)還對一些主要成分采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照，分別對各色譜峰加以確認(rèn)，鑒定了疏毛羅勒揮發(fā)油組分中的化學(xué)成分，按面積歸一法確定各組分相對含量，分析結(jié)果見表1。

表1　疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分的GC/MS的分析結(jié)果

由表1可知，疏毛羅勒揮發(fā)油成分鑒定出27種化合物，主要成分為萜類物質(zhì)，占揮發(fā)油成分的60.61%。相對含量較高的是十六酸乙酸乙酯(44.16%)、酸松油酯(17.01%)、(s)-2,5,5,8-四甲基-1,2,3,6-四氫化薁-4-酮(9.92%)、香葉醇(3.05%)、3-(1,3-丁間二烯基)-2,4,4-三甲基-環(huán)己烯(2.42%)、肉桂酸甲酯(2.35%)、香樹烯(1.35%)、1,2,3,4,5,6,7,8,8a-八氫-1,4-二甲基-7-(1-異丙烯基)-甘菊環(huán)烴(1.52%)、莰烯(1.32%)及B-瑟林烯(1.09%)，其他成分含量較少。結(jié)合植物生源代謝途徑分析，認(rèn)為疏毛羅勒揮發(fā)油成分主要通過甲戊二羥酸代謝合成途徑、莽草酸代謝合成途徑和乙酰-丙酮酸代謝合成途徑完成，沒有發(fā)現(xiàn)氨基酸代謝合成途徑產(chǎn)物。

2.2疏毛羅勒揮發(fā)油的抗氧化活性

表2　疏毛羅勒揮發(fā)油抗氧化活性

2.3 疏毛羅勒揮發(fā)油的抑菌活性

從表3結(jié)果可以看出，疏毛羅勒揮發(fā)油樣品有一定抑菌活性，對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌均有一定的抑菌作用并成濃度依賴，濃度越高，抑菌作用越明顯；但是對枯草芽孢桿菌的抑菌效果最差。

表3　疏毛羅勒揮發(fā)油抑菌活性的結(jié)果分析

3　結(jié)論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)諸多疾病的發(fā)生和發(fā)展與自由基導(dǎo)致的機(jī)體細(xì)胞氧化損傷密切相關(guān)，從天然產(chǎn)物中尋找安全有效的抗氧化劑成為近年來的研究熱點(diǎn)之一。本研究以抗DPPH·自由基能力為指標(biāo)，評價(jià)疏毛羅勒揮發(fā)油成分的抗氧化能力；發(fā)現(xiàn)疏毛羅勒揮發(fā)油所含化學(xué)成分有較好的抗氧化性[13,14]；其揮發(fā)油對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌3株菌種隨濃度升高抑菌效果越明顯。試驗(yàn)過程中還將其制成液體溶劑用于蚊蟲叮咬實(shí)驗(yàn)，止癢效果也較明顯。此外，課題組從疏毛羅勒揮發(fā)油組分中分離純化到一個(gè)具有驅(qū)蚊活性的單體化合物和一個(gè)具有止癢效果的單體化合物，對2個(gè)化合物的藥理活性正在進(jìn)一步研究和開發(fā)。

[1]劉勇民.維吾爾藥志[M].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社,1999:336～338.

[2]國家中醫(yī)藥管理局,中華本草編委會(huì).中華本草[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1999.

[3]周緒霞,李衛(wèi)芬.羅勒的應(yīng)用與展望[J].中草藥,2003,(2):25～26.

[4]劉超祥,方成武,劉耀武.羅勒化學(xué)成分與抗氧化活性影響因素研究進(jìn)展[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,(6):51～55.

[5]胡云飛，吳德玲，徐國兵，等.GC-MS結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)對5個(gè)產(chǎn)地牡丹皮提取物的比較分析[J].中草藥,2015,37(9):2003～2007.

[6]盧汝梅,李耀華.桂產(chǎn)羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分的分析[J].廣西植物,2006,26(4):456～458.

[7]El-Toumy S A,Souda S S E,Mohamed T K,etal.Anthraquinone glycosides from Cassia roxburghii,and evaluation of its free radical scavenging activity[J].Carbohydrate Research,2012,360:47～51.

[8]陸洲,劉超祥,余星,等.新型脫氫樅胺衍生物的合成及其抗自由基活性[J].有機(jī)化學(xué).2013,33(3):562～567.

[9]Chao-Xiang Liu,Zhong-Xiang Lin,Zhou Lu,etal. Antitumor and scavenging radicals activities of some polyphenols related to dehydroabietylamine derivatives[J].Journal of Asian Natural Products Research,2013,15:819～827.

[10]Dawidowicz A L,Wianowska D,Olszowy M.On practical problems in estimation of antioxidant activity of compounds by DPPH,method (Problems in estimation of antioxidant activity)[J].Food Chemistry,2012,131:1037～1043.

[11]Chat O A,Najar M H,Mir M A,etal.Effects of surfactant micelles on solubilization and DPPH radical scavenging activity of Rutin[J].Journal of Colloid & Interface Science,2011,355:140～149.

[12]楊春杰,丁連峰,劉超祥,等.婦科止帶片微生物限度檢查的方法學(xué)驗(yàn)證研究[J].安徽醫(yī)藥,2014,(3):455～458.

[13]胡爾西丹,伊麻木,艾薩.羅勒子揮發(fā)油成分及抗氧化活性分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(2):752～754.

[14]勾明玥,劉梁,張春枝.采用DPPH·法測定26種植物的抗氧化活性[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2010,36(3):148～150.

2016-04-18

安徽省質(zhì)量工程—藥學(xué)專業(yè)省級教學(xué)團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2013jxtd067);安徽省質(zhì)量工程—藥品質(zhì)量檢測技術(shù)特色專業(yè)項(xiàng)目(2014tszy055);安徽省高等學(xué)校自然科學(xué)研究項(xiàng)目重點(diǎn)課題(KJ2015A358);亳州市中藥科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(BZ2014zzb21)。

劉超祥(1972-)，男, 博士, 副教授, 主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)成分及生物活性研究,cxliu888@163.com。

Q949.777.6

A

1673-1409(2016)21-0034-04

[引著格式]劉超祥，丁銳,王珊,等.亳州疏毛羅勒揮發(fā)油化學(xué)成分及抗氧化與抑菌活性研究[J].長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版) ，2016，13(21)：34～37.