袁子民，趙強，賈天柱，王靜

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

正交試驗優(yōu)選酒白芷飲片的炮制工藝△

袁子民，趙強，賈天柱，王靜*

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連116600)

目的：優(yōu)選酒白芷隔水蒸制的最佳炮制工藝。方法：以黃酒加入量、悶潤時間和蒸制時間為考察因素，以總香豆素含量為評價指標(biāo)，采用L9(34)正交設(shè)計，優(yōu)選酒白芷的炮制工藝。結(jié)果：黃酒的加入量為每100kg白芷加入黃酒20kg，悶潤時間為0.5h，蒸制時間為5h。結(jié)論：該工藝合理、可靠、重復(fù)性好，可作為酒白芷炮制品的制備方法。

酒白芷飲片；酒燉；總香豆素

白芷為傘形科植物白芷或杭白芷的干燥根，具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿的功能，用于感冒頭痛等的治療。在對白芷炮制歷史沿革及炮制品的現(xiàn)代研究中發(fā)現(xiàn)，古代白芷的炮制品有16種(去皮、水洗、去梢、微焙、炒炭、炒、濕紙裹煨、面裹煨、醋制、鹽炙、酒炙、米泔水制、黃精制、斑蝥制、蘿卜制、石灰制)，發(fā)展到現(xiàn)代只剩下1種生白芷(凈制后切制)。2015版《中華人民共和國藥典》一部、各省市炮制規(guī)范及《中藥炮制學(xué)》等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及書籍中均收載生白芷，未見其他炮制品。古代白芷酒炙，在明《滇南本草》的附方中有記載，依據(jù)附方的功能推測酒洗、酒浸可增強白芷祛風(fēng)散寒作用，酒炒可加強白芷消腫排膿作用[1-2]。另外，臨床常用中藥都梁丸[1]中，白芷采用隔水蒸制(酒燉)炮制后入藥，但缺少規(guī)范化的炮制工藝，且其未用生品，采用炮制品入藥是否具有一定臨床價值，值得深入研究。因此，本實驗采用正交試驗法對白芷隔水蒸制的工藝進行優(yōu)選，確定最佳炮制工藝，為酒白芷炮制機理的深入研究及其在都梁丸中的臨床應(yīng)用提供參考。

1 儀器與試藥

U-3010紫外可見分光光度計(日本日立公司)；電子分析天平(SHIMADZUCORPORATION)；SG3300型超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)；真空干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

白芷藥材(祁白芷，河北安國，批號：20141120)經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)李峰教授鑒定為為傘形科植物白芷Angelicadahurica(Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook.f.的干燥根；歐前胡素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110826-200307)；黃酒(鎮(zhèn)江恒順酒業(yè)有限責(zé)任公司)；甲醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1炮制工藝的設(shè)計

根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，以黃酒加入量(A)、悶潤時間(B)、蒸制時間(C)三個因素、三個水平進行試驗考察。分別取白芷飲片30g，加黃酒適量，置密閉容器內(nèi)，按L9(34)正交試驗設(shè)計表，隔水蒸制一定時間，取出，于40℃干燥至恒重，即得。鑒于白芷止痛的有效成分為香豆素類成分[3-4]，因此本實驗以白芷總香豆素作為評價指標(biāo)。因素水平見表1。

表1 正交試驗因素水平表

2.2總香豆素的含量測定

2.2.1對照品溶液的制備 取歐前胡素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度為19.2μg·mL-1的對照品溶液。

2.2.2線性關(guān)系 分別精密量取上述對照品溶液1、2、4、5、10mL置10mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度依次為1.92、3.84、5.76、7.68、9.60、19.20μg·mL-1的系列對照品溶液。以甲醇為空白，在300nm波長處測定吸光度，以歐前胡素濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程Y=0.0443X+0.0096(r=0.9994)。結(jié)果歐前胡素質(zhì)量濃度在1.92～19.20μg·mL-1與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.2.3供試品溶液制備 取各正交試驗項下酒白芷飲片粉末(過40目篩)0.2g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率50KHz)1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。分別精密量取續(xù)濾液2.5mL置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.4精密度試驗 取同一供試品溶液，以甲醇為空白，在300nm波長處測定吸光度，重復(fù)操作6次，RSD為0.50%，表明儀器精密度良好。

2.2.5重復(fù)性試驗 取同一酒白芷飲片樣品，按2.2.3項下方法分別制備6份供試品溶液，以甲醇為空白，分別在300nm波長處測定吸光度，RSD為1.61%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗 取同一酒白芷飲片供試品溶液，分別于0、2、4、6、8h以甲醇為空白，在300nm波長處測定吸光度，RSD為1.74%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7回收率試驗 分別取已知含量的同一酒白芷飲片粉末(總香豆素含量為1.30%)0.1g，精密稱定，各6份，分別精密加入歐前胡素對照品溶液(質(zhì)量濃度為192μg·mL-1)7.0mL，再精密加入甲醇18.0mL，其余按2.2.3項下方法分別制備6份供試品溶液。以甲醇為空白，在300nm波長處測定吸光度，計算回收率，結(jié)果見表2，符合相關(guān)規(guī)定。

表2 回收率試驗測定結(jié)果(n=6)

2.2.8 含量測定 分別取各正交試驗項下酒白芷飲片粉末(過20目篩)0.2 g，按2.2.3項下的供試品溶液制備方法，分別制備供試品溶液，以甲醇為空白，分別在300 nm波長處測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算其總香豆素含量[5]。結(jié)果見表3。

2.3正交試驗結(jié)果及方差分析

方差分析見表4，由表4可知，A、C因素對酒燉炮制工藝有顯著性影響。經(jīng)直觀分析，影響酒燉工藝的主要因素依次為C>A>B，得工藝的最優(yōu)條件應(yīng)為A2B3C3，但由于B因素影響不顯著，為節(jié)省時間選擇悶潤時間0.5h，因此酒白芷最終確定的最佳炮制工藝為A2B1C3，即黃酒的加入量為20%(每100kg白芷加入黃酒20kg)，悶潤時間為0.5h，隔水蒸制時間為5h。

表3 正交試驗結(jié)果

表4 方差分析表

2.4炮制工藝的驗證

為保證該工藝的重復(fù)性、穩(wěn)定性，本實驗按確定的最佳炮制工藝進行3次工藝驗證試驗，取酒白芷飲片30g進行炮制，結(jié)果3批樣品的外觀顏色均為棕紅色(生品為類白色)，見圖1。總香豆素含量分別為1.62%、1.60%、1.57%。結(jié)果表明，該炮制工藝穩(wěn)定、可靠、重復(fù)性好。

注：A.生品；B.酒白芷。圖1 白芷生品與酒白芷的外觀顏色圖

3 討論

都梁丸由白芷(酒燉)、川芎組成，具有祛風(fēng)散寒、活血通絡(luò)的功能，主要用于風(fēng)寒瘀血阻滯脈絡(luò)所致的頭痛[1]。方中白芷為治頭痛的常用藥且采用酒燉入藥，但目前缺少酒燉白芷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、炮制工藝及炮制機理的相關(guān)研究。本研究為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及炮制機理的研究提供參考。研究發(fā)現(xiàn)，炮制后總香豆素含量增加約11.7%(生品含量1.43%，炮制品按3批驗證的平均值為1.597%)，可能與黃酒的加入、炮制過程中受熱致使成分轉(zhuǎn)化、溶出增加有關(guān)，炮制后可增強祛風(fēng)散寒、止痛的藥效。

將對照品溶液、供試品溶液分別在200～400nm進行掃描，見圖2。結(jié)果歐前胡素對照品溶液、酒白芷供試品溶液均在300nm左右有最大吸收，因此選擇300nm為紫外測定波長。

注：A.歐前胡素對照品；B.白芷生品；C.白芷酒制品。圖2 對照品溶液、生品與炮制品供試品溶液紫外掃描圖

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部 [S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2] 金潔，金傳山，吳德玲，等.白芷炮制歷史沿革及其炮制品的現(xiàn)代研究進展[J].安徽醫(yī)藥，2012，16(1)：1-3.

[3] 秦旭華，李祖?zhèn)?，朱果夫，?川白芷總香豆素治療偏頭痛的部分藥效學(xué)實驗研究[J].四川中醫(yī)，2008，26(6)：4-6.

[4] 魏玉平，劉俊，顏小林，等.白芷治療頭痛的提取工藝評判指標(biāo)的研究[J].中草藥，2001，32(4)：318-319.

[5] 張利，馬逾英，蔣桂華，等.白芷新型飲片中總香豆素與歐前胡素的含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2011，22(1)：80-81.

OptimizationofRiceWineProcessingTechnologyofSlicedRadixAngelicaeDahuricaebyOrthogonalTest

YUANZimin,ZHAOQiang,JIATianzhu,WANGJing*

(LiaoninguniversityofTCM,Dalian116600，China)

Objective：To optimize the wine processing technology of sliced Radix Angelicae Dahuricae.Methods：The rice wine processing technology of sliced Radix Angelicae Dahuricae was optimized by L9(34) orthogonal test with the amount of yellow rice wine，braising time and steaming temperature as factors and with the content of total coumarins as evaluation indicator.Results：The optimal processing technology was that20kg rice wine plus into100kg sliced Radix Angelicae Dahuricae，braising for0.5hour and steaming for5hours.Conclusion：The process is reasonable and reliable, can provide a basis for production of yellow rice wine processedRadix Angelicae Dahuricae.

Sliced Radix Angelicae Dahuricae；rice wine processed；total coumarins

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.023

2015-11-27)

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)杏林杰出青年資助項目(2015044)

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王靜，博士，副教授，研究方向：藥物分析及炮制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究；Tel：(0411)85890139，E-mail：yuanmengwj@163.com