HPLC法測定獸用鹽酸林可霉素注射液的含量方法探討

趙 莉，楊妮娜

（河南省洛陽市獸藥飼料（動物產品）質量檢驗監(jiān)測中心，河南　洛陽　471000）

HPLC法測定獸用鹽酸林可霉素注射液的含量方法探討

趙 莉，楊妮娜

（河南省洛陽市獸藥飼料（動物產品）質量檢驗監(jiān)測中心，河南洛陽471000）

目的：采用HPLC法測定獸用鹽酸林可霉素注射液中林可霉素的含量。方法：用XBridge C18色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm），以0.05 moL/L硼砂溶液（用85%磷酸溶液調節(jié)pH值至6.0）-甲醇（4∶6）為流動相，檢測波長214 nm。結論：在0.473 8～3.790 0 mg/mL的濃度范圍內，林可霉素線性關系良好，回歸方程Y=159 000X+52 600，r2=0.999 7，精密度試驗RSD為0.20%（n=6），重復性試驗RSD為0.36%（n=6）。結論：本方法簡便，靈敏，能有效縮短獸用鹽酸林可霉素注射液中林可霉素含量的檢測時間，提高工作效率。

鹽酸林可霉素；HPLC；含量測定

鹽酸林可霉素（Lincomycin Hydrochloride，潔霉素）為窄譜抗生素，作用與紅霉素相似，對革蘭陽性球菌有較好作用，臨床主要用于敏感菌引起的各種感染，如肺炎、腦膜炎、心內膜炎、蜂窩織炎、扁桃體炎、丹毒，癤及泌尿系統(tǒng)感染等。

獸用鹽酸林可霉素注射液含量測定方法常用高效液相色譜法，本文將獸用鹽酸林克霉素含量測定的流動相比例調整為0.05 moL/L硼砂溶液（用85%磷酸溶液調節(jié)pH值至6.0）-甲醇（4∶6）為流動相，試樣經前處理后測定，結果準確、可靠，有效節(jié)省檢測時間。

1　儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀配備Waters 2489紫外檢測器，XBridge C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）

鹽酸林可霉素對照品（中國食品藥品檢定研究所，含量：85.7%），批號：130432-201109

十萬分之一分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），型號：XS-105DU

超聲波清洗器（圣迅（上海）醫(yī)療器械有限公司），型號：YJ5120-1

甲醇（國藥集團化學試劑有限公司），色譜純

硼砂（天津市德恩化學試劑有限公司），分析純

鹽酸林可霉素注射液（湖北武當動物藥業(yè)有限責任公司），批號：141216 13

2　方法與結果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：XBridge C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）

流動相：0.05 mol/L硼砂溶液（用85%磷酸調節(jié)pH值至6.0）-甲醇（2∶3）

流速：1.0 mL/min

進樣量：10 μL

柱溫：30 ℃

在本文的色譜條件下，鹽酸林可霉素的出峰時間是6.1 min左右。

2.2溶液的制備

2.2.1流動相的制備 準確稱取硼砂19.20 g加適量純凈水，超聲溶解后置1 000 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，用85%的分析純磷酸調節(jié)pH值為6.0，用0.45 μm的微孔濾膜過濾后，以硼砂溶液：甲醇（2∶3）的比例配成流動相。

2.2.2對照品貯備溶液的制備 精密稱取鹽酸林可霉素對照品37.90 mg，置10 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，既得3.79 mg/mL的對照品貯備液。

2.2.3對照品溶液的制備 精密吸取對照品貯備液2.5 mL于10 mL離心管中，準確加入1.5 mL流動相，渦旋混勻后，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，既得濃度為2.316 mg/mL的對照品溶液。2.2.4供試品溶液的制備 精密吸取1.0 mL鹽酸林可霉素注射液，置50 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，用0.45 μm的微孔濾膜過濾后，作為供試品溶液。

2.3線性范圍和回歸方程 精密吸取對照品貯備液0.5、0.5、1.0、2.5 mL，分別置10 mL離心管中，精密加入流動相3.5、1.5、1.0、1.5 mL，渦旋混勻，得濃度為0.473 8、0.947 5、1.895 0、2.368 8 mg/mL的對照品溶液，分別進樣10 μL，記錄色譜圖。結果表明，在0.473 8～3.790 0 mg/mL的濃度范圍內，林可霉素線性關系良好，回歸方程Y=159 000X+52 600，r2=0.999 7。

2.4精密度試驗 取供試品溶液，在本文色譜條件下，連續(xù)進樣6針，測定林可霉素峰面積，六次檢測結果的相對偏差RSD為0.20%，表明該方法精密度較好。

2.5重復性試驗 取鹽酸林可霉素注射液供試品6份，照2.2.4所述方法制成供試品溶液，分別進樣10 μL，測定林可霉素峰面積，計算六次檢測結果的含量并計算相對偏差RSD，表明該方法重復性較好，結果見表1。

表1　6份鹽酸林可霉素注射液供試品含量測定結果

2.6與藥典方法的比較 用獸藥典規(guī)定的流動相：0.05 mol/L硼砂溶液（用85%磷酸調節(jié)pH值至5.0）-甲醇-乙腈（67∶33∶2）分別配置成對照品溶液和供試品溶液，各進樣10，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，將測得的結果與本法比較，結果見表2。

表2　本法與獸藥典方法的結果比較

3　討論與小結

（1）本文所用0.05 mol/L硼砂溶液（用85%磷酸調節(jié)pH值至6.0）-甲醇（2∶3）的流動相比例，與2010版獸藥典所用方法比較：出峰時間顯著提前（本文所用方法6.1 min，獸藥典方法21.1 min），且峰形對稱性較好，峰寬明顯減小。故本文能有效縮短檢測時間，提高工作效率。

（2）與2010版獸藥典方法比較，本試驗流動相保留林可霉素化學性質穩(wěn)定，且未使用毒性較大、價格較貴的乙腈；另用本法可同時處理和檢測鹽酸林可霉素注射液和可溶性粉，可有效降低檢測成本和縮短檢測時間。

［1］中國獸藥典委員會，編.中華人民共和國獸藥典：2010年版一部［M］.北京：中國農業(yè)出版社，2010：206-207.

（編輯：張淑鳳）

R927.2

B

1006-799X（2016）14-0086-02

趙 莉（1983-），女，河南太康人，助理畜牧師，主要從事畜產品質量安全檢測工作。