喬宗駿，黃 真 ，余連喜，黃建軍，李拓凡

（1.重慶市忠縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心馬灌鎮(zhèn)站，重慶 忠縣 404317；2.湖北省江陵縣畜牧獸醫(yī)局，湖北 荊州 434101；3.長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025）

散養(yǎng)土雞黑頭病的診斷與治療

喬宗駿1，黃 真2，余連喜2，黃建軍2，李拓凡3

（1.重慶市忠縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心馬灌鎮(zhèn)站，重慶 忠縣 404317；2.湖北省江陵縣畜牧獸醫(yī)局，湖北 荊州 434101；3.長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025）

對(duì)散養(yǎng)土雞病雞進(jìn)行剖檢，提取病變肝組織DNA，針對(duì)組織滴蟲18S rDNA的特異性引物進(jìn)行PCR檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果擴(kuò)增出約490 bp與預(yù)期大小一致的條帶，表明病雞肝臟組織內(nèi)含有組織滴蟲，確診為雞黑頭病。對(duì)雞群投喂甲硝唑1周，雞群疫情基本得到控制，無(wú)新增病例發(fā)生。

土雞；黑頭??；診斷；治療

雞黑頭病是由組織滴蟲引起的一種主要侵害宿主肝臟和盲腸，引起血液循環(huán)障礙，造成頭部顏色發(fā)紫的急性寄生蟲病，又稱雞盲腸肝炎［1-2］。蚯蚓和雞異刺線蟲是組織滴蟲的主要傳播媒介，家禽常因食用被異刺線蟲卵污染的飼料或帶異刺線蟲蟲卵和幼蟲的蚯蚓而發(fā)生感染，因此，在蚯蚓活動(dòng)頻繁的春、秋季地下散養(yǎng)雞常發(fā)該病［3-4］。

2015年10月重慶市忠縣某農(nóng)戶果園下散養(yǎng)的1 000只45日齡土雞，在雨后第3天突然發(fā)病，主要表現(xiàn)為精神不振，雙眼微閉，頭部發(fā)黑，3 d內(nèi)死亡120余只，經(jīng)剖檢和PCR檢測(cè)，診斷為組織滴蟲感染。

1 材料和方法

1.1 病料及處理 病雞為某農(nóng)戶送檢的45日齡土雞，剖檢前進(jìn)行臨床觀察，剖檢時(shí)依據(jù)病變情況，按病理學(xué)方法進(jìn)行取材，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑 Taq酶，dNTP等PCR試劑和DNA Marker為寶生物 （大連）生物工程有限公司產(chǎn)品。DNA提取試劑盒為上海捷瑞生物有限公司產(chǎn)品。特異性引物根據(jù)Genbank發(fā)表的組織滴蟲18S rDNA基因序列及相關(guān)文獻(xiàn)［1，5-6］設(shè)計(jì)，具體序列為上游引物 F：5′-TTAGAAGTAGGACCTTAGAG-3′，下游引物 R：5′-TTATAAGAGTAGCTTTTCATTTTT-3′，目的片段長(zhǎng)度491 bp，引物由北京擎科生物技術(shù)有限公司合成。

1.3 DNA提取 取凍存的肝臟組織約50 mg，加入試劑盒中的組織細(xì)胞裂解液和蛋白酶K，55℃消化30 min，按照DNA提取試劑盒說(shuō)明書的具體步驟，進(jìn)行DNA提取，所得DNA-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 PCR檢測(cè) PCR體系采用25 μL體系進(jìn)行，具體組成：10×buffer 2.5 μL，25 mmol/L 的 Mg2+1.5 μL，dNTP（2.5 mmol/L，each）2.0 μL，上游引物 1 μL，下游引物 1 μL，DNA 模板 1 μL，rTaq 酶 1.25 U，加滅菌去離子水至25 μL。

循環(huán)條件為：預(yù)變性94℃3 min；（94℃30 s，55.5℃ 30 s，72℃ 40 s）×33個(gè)循環(huán)；72℃終末延伸10 min，4℃低溫10 min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳觀察和拍照。

1.5 藥物治療 及時(shí)將病雞隔離飼養(yǎng)，用甲硝唑按照0.05%全群飲水，每天1次，連飲7 d，對(duì)于重癥雞，進(jìn)行人工灌服，同時(shí)補(bǔ)充電解多維，尤其是VK、VA，以幫助病雞恢復(fù)。同時(shí)，對(duì)于污染區(qū)域的糞便及時(shí)清理，堆肥發(fā)酵消滅蟲卵。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀與病理變化 臨床觀察送檢病雞精神不振，雙眼框腫脹，頭部發(fā)黑，糞便黃色硫磺樣（見(jiàn)圖1A）。剖檢可見(jiàn)，心肌表面有散在出血點(diǎn)；肝臟表面布滿打火印狀病變（見(jiàn)圖1B）；脾臟腫大，色彩變淡，表面有散在出血點(diǎn)，盲腸腫脹。

2.2 PCR結(jié)果 取凍存的肝臟組織提取DNA，用組織滴蟲18S rDNA特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果擴(kuò)增出了預(yù)期大小一致，約490 bp大小的條帶（見(jiàn)圖2），表明病雞肝臟組織中含有組織滴蟲。

2.3 治療效果 雞群用甲硝唑按照0.05%全群飲水1周，同時(shí)，對(duì)于污染區(qū)域的糞便及時(shí)清理，堆肥發(fā)酵消滅蟲卵。病情基本得到有效控制，無(wú)新增死亡病例發(fā)生。

3 討論

圖1 病雞臨床癥狀與病理變化

圖2 18S rDNA特異性PCR結(jié)果

對(duì)送檢病例剖檢發(fā)現(xiàn)，病雞肝臟表面布滿打火印狀壞死灶，盲腸腫脹，心肌表面有散在出血點(diǎn)，用針對(duì)組織滴蟲18S rDNA的特異性引物進(jìn)行PCR檢測(cè)，擴(kuò)增出了預(yù)期大小的DNA片段，表明病雞感染組織滴蟲。

蚯蚓和雞異刺線蟲是組織滴蟲的中間宿主和主要傳播媒介，家禽常因食用被異刺線蟲卵污染的飼料或帶異刺線蟲蟲卵和幼蟲的蚯蚓而發(fā)生感染，因此，在蚯蚓活動(dòng)頻繁的春秋季節(jié)，對(duì)散養(yǎng)雞應(yīng)加強(qiáng)該病的防治。室內(nèi)飼養(yǎng)由于可以避免接觸蚯蚓等傳播媒介，能夠減少雞組織滴蟲病的發(fā)病率［2-4］。分析病因，該次疫情發(fā)生于雨后3 d，據(jù)推測(cè)可能是散養(yǎng)雞群食用了雨后出土的攜帶病原的蚯蚓而引起。

該病的防治相對(duì)簡(jiǎn)單，一般的抗蠕蟲藥物可以用來(lái)進(jìn)行預(yù)防［7］，痢特靈和甲硝唑通常對(duì)病雞具有較好的治療效果［8］。該次疫情在確診后，對(duì)雞群投用1周甲硝唑，疫情基本得到控制，未見(jiàn)新增病例發(fā)生。

近年來(lái)，隨著養(yǎng)雞業(yè)迅速發(fā)展以及消費(fèi)者對(duì)肉類品質(zhì)需求的不斷提高，規(guī)模土雞養(yǎng)雞戶也越來(lái)越多，不少養(yǎng)殖戶利用果園及山地進(jìn)行林下自然放養(yǎng)的模式，既可降低飼養(yǎng)成本又可增加雞肉品質(zhì)，并且雞和蛋的售價(jià)也高于籠養(yǎng)雞蛋，投資回報(bào)率較高。但是，該種養(yǎng)殖模式由于雞大部分時(shí)間在野外，也增加了雞與飼養(yǎng)環(huán)境中的微生物、寄生蟲等病原及蚯蚓等病原中間宿主的接觸機(jī)會(huì)，面臨相對(duì)于籠養(yǎng)雞更大的疾病威脅，養(yǎng)殖戶應(yīng)加強(qiáng)防疫措施，尤其應(yīng)重視防止雞黑頭病的發(fā)生。

［1］曲昌寶，王尚尚，侯照峰，等.雞組織滴蟲病PCR病原學(xué)診斷方法的建立［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，35（2）：160-163.

［2］張麗華，顧玉芳，梁雄燕，等.靈山麻雞組織滴蟲和大腸桿菌混合感染的診斷［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2015，51（5）：42-44.

［3］劉文文.土雞黑頭病的疫情調(diào)查及防治措施［J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2012（12）：102-103.

［4］曲昌寶，劉聰，郭平，等.組織滴蟲病診斷技術(shù)的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2013，8（4）：379-381.

［5］方磊涵.火雞組織滴蟲病流行病學(xué)初步調(diào)查與中藥治療［D］.長(zhǎng)沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

［6］曲昌寶.禽組織滴蟲病流行病學(xué)調(diào)查及其分子生物學(xué)診斷方法的建立與應(yīng)用［D］.揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2014.

［7］孟慶霞.中西藥結(jié)合治療雞組織滴蟲病的效果觀察［J］.養(yǎng)殖與飼料，2013（5）：30-32.

［8］李榮譽(yù)，張國(guó)祖.復(fù)方中西藥物對(duì)雞組織滴蟲病的療效［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004（12）：67-69.

S858.312.7

A文章順序編號(hào)：1672-5190（2016）04-0091-02

2016－03－15

喬宗駿（1989—），男，助理獸醫(yī)師，主要從事農(nóng)牧業(yè)技術(shù)推廣工作。

黃建軍（1984—），男，獸醫(yī)師，主要從事農(nóng)牧業(yè)技術(shù)推廣工作。

李拓凡（1991—），男，碩士，主要研究方向?yàn)閯?dòng)物病原分子生物學(xué)。

（責(zé)任編輯：趙景娣）