飼糧中添加外源酶對(duì)湖羊瘤胃發(fā)酵培養(yǎng)液產(chǎn)氣量、pH值及發(fā)酵參數(shù)動(dòng)態(tài)變化的影響

陳宇

（寧德出入境檢驗(yàn)檢疫局，福建 寧德 352100）

飼糧中添加外源酶對(duì)湖羊瘤胃發(fā)酵培養(yǎng)液產(chǎn)氣量、pH值及發(fā)酵參數(shù)動(dòng)態(tài)變化的影響

陳宇

（寧德出入境檢驗(yàn)檢疫局，福建 寧德 352100）

旨在研究外源酶對(duì)湖羊瘤胃液微生物體外培養(yǎng)的影響，為將外源酶應(yīng)用于湖羊飼料添加劑提供一定的科學(xué)依據(jù)。采用瘤胃液體外培養(yǎng)法，將10、20、30、40 mg/kg 4個(gè)水平的外源酶加入體外培養(yǎng)體系分別培養(yǎng)6、12、18、24、36、48 h后，測(cè)定體外培養(yǎng)液中的產(chǎn)氣量（GP）、pH值、氨態(tài)氮（NH3-N）濃度、微生物蛋白（MCP）濃度、揮發(fā)性脂肪酸（VFA）濃度。結(jié)果表明，添加不同水平的外源酶可有效提高瘤胃微生物體外培養(yǎng)液的GP、pH值、NH3-N濃度、MCP濃度及VFA濃度。添加外源酶可改善湖羊瘤胃微生物發(fā)酵特性，其中以添加量為10 mg/kg效果最佳。

外源酶；瘤胃微生物；體外培養(yǎng)；湖羊

在畜禽配合飼料中添加適量酶制劑，可以提高畜禽的采食量和飼料利用率，減少氮、磷排放量，降低畜禽養(yǎng)殖對(duì)環(huán)境造成的污染。在飼料中添加外源酶制劑，可以使包被的淀粉和多糖暴露在消化酶中，從而達(dá)到降解多糖的目的［1］。此外，外源酶制劑還可以通過(guò)降低內(nèi)源物質(zhì)的損失來(lái)提高日糧的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值［2］。有研究表明，在玉米—豆粕日糧中添加外源復(fù)合酶，可以有效提高生長(zhǎng)豬的生產(chǎn)性能［3］；在生長(zhǎng)育肥豬飼料中添加木聚糖酶可以有效提高飼料利用率和豬的生長(zhǎng)性能［4-6］。

目前，酶制劑在反芻動(dòng)物飼料中的應(yīng)用還不夠普及，相關(guān)研究也較少。直接添加到反芻動(dòng)物飼料中的外源酶制劑在瘤胃內(nèi)會(huì)被蛋白酶降解，從而失去活性。但也有研究表明，纖維素酶、半纖維素酶對(duì)蛋白酶的水解作用相對(duì)穩(wěn)定，木聚糖酶也可以抵抗多種蛋白酶降解，這主要是由于瘤胃微生物對(duì)作用底物有著嚴(yán)格要求。該研究旨在闡明添加外源酶制劑對(duì)湖羊瘤胃液微生物體外培養(yǎng)特性的影響，探討不同培養(yǎng)時(shí)間下不同外源酶添加水平對(duì)體外培養(yǎng)液產(chǎn)氣量（GP）、pH值、氨態(tài)氮（NH3-N）濃度、微生物蛋白（MCP）濃度和揮發(fā)性脂肪酸（VFA）濃度的影響，為將外源酶開(kāi)發(fā)為湖羊或其他反芻動(dòng)物的飼料添加劑提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理 健康湖羊公母羊各2只，體重為30～32 kg，每只湖羊都安裝永久性瘤胃瘺管，護(hù)理15 d后開(kāi)始試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物日糧包括粗飼料1 kg和精飼料0.5 kg兩部分，粗飼料為新鮮雜交狼尾草，精飼料包括玉米、豆粕、次粉、氯化鈉等（見(jiàn)表1）。每日6：30和17：30各飼喂1次，自由飲水。

1.2 培養(yǎng)液的配制 培養(yǎng)液（A）：FeCl3·6H2O16.0g，CoCl2·6H2O 2.0 g，MnCl2·4H2O 20 g，CaCl2·2H2O 26.4 g， 用蒸餾水定容至 200 mL。培養(yǎng)液（B）：NH4HCO34.0 g，NaHCO335.0 g，用蒸餾水定容至1 000 mL。培養(yǎng)液（C）：Na2HPO45.7 g，K2HPO46.2 g，MgSO4·7H2O0.6g，用蒸餾水定容至1000mL。還原劑培養(yǎng)液：NaOH320mL，Na2S·9H2O625mL，加蒸餾水100mL。取800mL蒸餾水+0.2mL培養(yǎng)液A+400mL培養(yǎng)液B+400 mL培養(yǎng)液C+2 mL刃天青溶液+80 mL還原劑培養(yǎng)液，升溫至39℃并通入CO2至飽和。

表1 實(shí)驗(yàn)湖羊精飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 外源酶為纖維素酶和木聚糖酶按照4∶1的比例混合制成，2種酶均購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司。纖維素酶和木聚糖酶酶活按照該公司提供的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定，纖維素酶酶活為22 525 IU，木聚糖酶酶活為24 200 IU。

試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)處理組，每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù)，對(duì)照組記為A0，處理組分別記為A1、A2、A3、A4。對(duì)照組A0的全混合日糧不添加外源酶，處理組A1、A2、A3、A4每千克全混合日糧中分別添加外源酶 10、20、30、40 mg。

1.4 試驗(yàn)方法 在湖羊晨飼前，利用真空負(fù)壓裝置從湖羊永久性瘤胃瘺管采取瘤胃液，4層紗布過(guò)濾后灌入經(jīng)預(yù)熱的收集瓶中，通入CO2氣體，39℃恒溫水浴備用。在三角錐形瓶中加入600 mg全混合日糧底物（稻草∶精料=1∶1）和體外培養(yǎng)液30 mL，然后迅速吸取30 mL瘤胃液注入。在（39.0±0.5）℃的搖床中振蕩培養(yǎng)。分別在培養(yǎng)0、6、12、18、24、36、48 h時(shí)采集三角錐形瓶中的培養(yǎng)液，然后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)與方法 培養(yǎng)液氣體產(chǎn)量（GP）的測(cè)定參照Menke和Raab報(bào)道的方法進(jìn)行。培養(yǎng)液pH值用pHS-3D型酸度計(jì)（上海雷磁分析儀器公司）測(cè)定。培養(yǎng)液NH3-N濃度的測(cè)定參照參考文獻(xiàn)［7］報(bào)道的方法進(jìn)行，并做部分改進(jìn)。培養(yǎng)液MCP濃度的測(cè)定參照參考文獻(xiàn)［8］報(bào)道的嘌呤法進(jìn)行。培養(yǎng)液VFA濃度的測(cè)定參照參考文獻(xiàn)［9］報(bào)道的方法進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 2013進(jìn)行初步整理，然后利用SPSS 17.0中的One-way ANOVA進(jìn)行方差分析，并采用Paired-Sample T Test進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)結(jié)果以平均值（Mean）±標(biāo)準(zhǔn)差（S.E.M）形式表示。

2 結(jié)果與分析

表2 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液GP的影響mL

表3 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液pH值的影響

2.1 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液GP的影響 由表2可知，各組在0～48 h內(nèi)的產(chǎn)氣量均呈上升趨勢(shì)。產(chǎn)氣量的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程可大致劃分為2個(gè)階段，0～24 h為快速上升期，24～48 h為緩慢上升期。其中，在6 h時(shí)，處理組A1、A2、A3的產(chǎn)氣量均極顯著高于對(duì)照組 A0（P＜0.01）組；在 12～36 h時(shí)，處理組A1的產(chǎn)氣量極顯著高于各處理組及對(duì)照組（P＜0.01）；在24、36、48 h時(shí)，處理組A2、A3的產(chǎn)氣量極顯著高于處理組A4與對(duì)照組A0（P＜0.01）。

2.2 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液pH值的影響 由表3可知，各組在體外培養(yǎng)期間，pH值均呈下降趨勢(shì)，總體可以分為2個(gè)階段：0～24 h為快速下降階段，24～48 h為緩慢下降階段。在培養(yǎng)6 h時(shí)，處理組A1、A2的pH值顯著高于處理組A3、A4和對(duì)照組A0（P＜0.05）；在培養(yǎng)12 h時(shí)，處理組A1的pH值極顯著高于其他各處理組和對(duì)照組 （P＜0.01）；在培養(yǎng)18、24 h時(shí)，處理組A1、A2的pH值極顯著高于對(duì)照組A0（P＜0.01）；在培養(yǎng)18、24、36、48 h時(shí)，處理組A1、A2的pH值極顯著高于對(duì)照組A0（P＜0.01）。

2.3 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中NH3-N濃度的影響 由表4可知，各組培養(yǎng)液中NH3-N濃度的變化可分為快速上升和緩慢下降2個(gè)階段，第1階段為0～12 h，第二階段為12～48 h。處理組A1的NH3-N濃度在各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)均極顯著高于對(duì)照組A0（P＜0.01），處理組A1的NH3-N濃度在24 h時(shí)顯著高于處理組A2（P＜0.05）；在12、24、36 h時(shí)，處理組A1的NH3-N濃度極顯著高于處理組A3、A4（P＜0.01）。結(jié)果表明，添加量為10 mg/kg的外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中NH3-N濃度的提高作用最明顯。

表4 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中NH3-N濃度的影響mg/100 mL

2.4 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中MCP濃度的影響 由表5可知，各處理組體外培養(yǎng)液中MCP濃度的變化趨勢(shì)相似。在0～12 h和18～24 h 2個(gè)時(shí)間段內(nèi)，MCP濃度快速提高。在培養(yǎng)6、12 h時(shí)，處理組A1的MCP濃度極顯著高于其他各組（P＜0.01）；在培養(yǎng)12 h時(shí)，處理組A2的MCP濃度顯著高于處理組A4與對(duì)照組A0（P＜0.05）；在培養(yǎng)24 h時(shí)，處理組A1的MCP濃度極顯著高于處理組A2與對(duì)照組A0（P＜0.01），處理組A2的MCP濃度顯著高于處理組A4（P＜0.05）。

表5 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中MCP濃度的影響mg/100 mL

表6 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中乙酸濃度的影響mmol/L

在培養(yǎng)0～12 h時(shí)，由于培養(yǎng)底物豐富，瘤胃微生物有充足的底物進(jìn)行發(fā)酵，因此，培養(yǎng)液中的MCP濃度快速上升。除了處理組A1，其他各組MCP產(chǎn)量相似。在培養(yǎng)24～48h，MCP濃度緩慢上升，各組MCP濃度差異變大。結(jié)果表明，添加量為10mg/kg的外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中MCP濃度的提高作用最明顯。

2.5 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中VFA濃度的影響 由表6～9可知，隨著微生物體外培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理組培養(yǎng)液中的乙酸、丙酸、丁酸和TVFA濃度持續(xù)上升。由表6可知，在培養(yǎng)6～48 h時(shí)，處理組A1的乙酸濃度極顯著高于其他處理組和對(duì)照組（P＜0.01）。由表7可知，在培養(yǎng)12、18、36 h時(shí)，各處理組的丙酸濃度顯著或極顯著高于對(duì)照組（P＜0.05或 P＜0.01）；在培養(yǎng)18～36 h時(shí)，處理組A1的丙酸濃度顯著或極顯著高于其他處理組（P＜0.05或P＜0.01）。由表8可知，在培養(yǎng)12～48 h時(shí)，處理組A1的丁酸濃度顯著或極顯著高于對(duì)照組A0（P＜0.05或P＜0.01）。由表9可知，在培養(yǎng)6～48 h時(shí)，處理組A1的TVFA濃度極顯著高于各處理組和對(duì)照組（P＜0.01）；在培養(yǎng)6～36 h時(shí)，處理組A2的TVFA濃度極顯著高于處理組A3、A4和對(duì)照組A0（P＜0.01）。由表10可知，在培養(yǎng)6～12 h時(shí)，個(gè)別處理組的乙酸濃度/丙酸濃度高于或極顯著高于對(duì)照組（P＜0.05或P＜0.01）；在培養(yǎng)18～48 h時(shí)，各處理組培養(yǎng)液中的乙酸濃度/丙酸濃度與對(duì)照組相比差異均不顯著（P＞0.05），表明外源酶不會(huì)對(duì)瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中的VFA成分組成產(chǎn)生顯著影響。

表7 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中丙酸濃度的影響mmol/L

表8 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中丁酸濃度的影響mmol/L

表9 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中TVFA濃度的影響mmol/L

表10 外源酶對(duì)湖羊瘤胃微生物體外培養(yǎng)液中乙酸濃度/丙酸濃度的影響mmol/L

3 討論

3.1 對(duì)體外培養(yǎng)液GP的影響 瘤胃微生物體外產(chǎn)氣法是利用瘤胃微生物在體外模擬反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程，該方法利用恒溫水浴鍋?zhàn)鳛楹銣卣駝?dòng)環(huán)境，通過(guò)三通閥來(lái)控制厭氧環(huán)境。Raab等［10］提出的體外產(chǎn)氣法具有操作簡(jiǎn)單、試驗(yàn)時(shí)間短、成本低的優(yōu)點(diǎn)，可以有效模擬反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)微生物生長(zhǎng)及繁殖環(huán)境，試驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性好［11］。通常情況下，在培養(yǎng)底物中碳水化合物含量較高時(shí)，體外培養(yǎng)產(chǎn)氣量的高峰一般出現(xiàn)在培養(yǎng)24 h左右；當(dāng)培養(yǎng)底物中蛋白質(zhì)含量較高時(shí)，產(chǎn)氣量的高峰一般出現(xiàn)在培養(yǎng)48 h左右；當(dāng)培養(yǎng)底物中粗纖維和木質(zhì)素含量較高時(shí)，產(chǎn)氣量的高峰一般出現(xiàn)在培養(yǎng)48 h之后。在該研究中，底物選用高蛋白質(zhì)精料（精粗比為1∶1），培養(yǎng)底物中碳水化合物含量較低，體外培養(yǎng)產(chǎn)氣高峰出現(xiàn)在培養(yǎng)48 h左右，試驗(yàn)結(jié)果符合理論推斷。

微生物培養(yǎng)產(chǎn)生的氣體主要包括揮發(fā)性脂肪酸、甲烷、CO2等瘤胃微生物利用底物產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。體外培養(yǎng)產(chǎn)氣量可以作為了解飼料在瘤胃內(nèi)降解特性的依據(jù)［12-13］。在該研究中，各組在培養(yǎng)0～24 h時(shí)，微生物產(chǎn)氣量快速上升，這主要是由于微生物在培養(yǎng)液中充分利用底物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行代謝；在培養(yǎng)24～48 h時(shí)，由于底物中沒(méi)有足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可供微生物利用，而且在培養(yǎng)前期微生物代謝產(chǎn)物積累，因此，嚴(yán)重阻礙了微生物的代謝效率。從培養(yǎng)6 h開(kāi)始，添加外源酶的瘤胃微生物體外培養(yǎng)液的GP顯著或極顯著高于未添加外源酶的對(duì)照組（P＜0.05或P＜0.01），由此可知，添加外源酶可提高瘤胃微生物的活性及其對(duì)底物的利用率，其中，10 mg/kg的添加量對(duì)瘤胃微生物體外培養(yǎng)液GP的提高作用最為顯著。

3.2 對(duì)體外培養(yǎng)液pH值的影響 反芻動(dòng)物瘤胃液的pH值是反映營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝水平的重要指標(biāo)，其穩(wěn)定性對(duì)瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定起到關(guān)鍵作用。影響瘤胃液pH值的因素很多，主要包括：日糧類型、飼喂規(guī)律、動(dòng)物唾液分泌量、瘤胃有機(jī)酸含量。瘤胃液pH值對(duì)微生物生長(zhǎng)和繁殖有很大影響，當(dāng)瘤胃液pH值小于6.4時(shí)，微生物對(duì)纖維素的降解率下降［14］；當(dāng)瘤胃液pH值小于5.2時(shí)，瘤胃液中不耐酸菌的生長(zhǎng)和繁殖受到抑制，而酸性環(huán)境有利于乳酸菌的生長(zhǎng)、繁殖，其代謝過(guò)程中產(chǎn)生大量乳酸，最終引起慢性酸中毒［15］。由于瘤胃酸度增加，產(chǎn)甲烷菌、黃色瘤胃球菌、纖維降解菌、琥珀酸絲狀桿菌等纖維素降解菌的生長(zhǎng)受到抑制，瘤胃內(nèi)粗纖維不能被降解、利用，從而出現(xiàn)胃積食現(xiàn)象。

在該研究中，各組瘤胃微生物體外培養(yǎng)液的pH值均隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低，這主要是由于瘤胃微生物利用有機(jī)物產(chǎn)生了VFA和CO2等酸性物質(zhì)。在培養(yǎng)0～24 h時(shí)，pH值下降較快，這是由于瘤胃微生物在該段時(shí)間內(nèi)可利用的底物多，生長(zhǎng)、繁殖速度較快；在培養(yǎng) 24～48 h時(shí)，培養(yǎng)液pH值下降緩慢，這主要是由于培養(yǎng)液中的大量底物已經(jīng)被微生物利用，剩余底物不能滿足其需求，致使微生物生長(zhǎng)受到抑制，造成VFA產(chǎn)量降低。瘤胃微生物體外培養(yǎng)pH值正常范圍在6.6～6.8。從培養(yǎng)6 h開(kāi)始，與其他處理組和對(duì)照組相比，外源酶10 mg/kg處理組的pH值在各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)均為最高值。這是由于低濃度外源酶具有調(diào)控瘤胃發(fā)酵、促進(jìn)底物利用的作用。各組在培養(yǎng)48 h時(shí)培養(yǎng)液的pH值最低，由此可知，在該時(shí)間點(diǎn)瘤胃液體外發(fā)酵程度最大。

3.3 對(duì)體外培養(yǎng)液中NH3-N濃度的影響 反芻動(dòng)物瘤胃中的NH3-N是瘤胃微生物降解飼料中的蛋白質(zhì)、氨基酸等含氮成分時(shí)產(chǎn)生的，也是合成MCP的重要原料。反芻動(dòng)物瘤胃中NH3-N的濃度維持在一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)，其濃度變化受到2個(gè)因素的影響：一是飼糧中蛋白質(zhì)含量和種類，主要是可消化蛋白質(zhì)比例；二是瘤胃微生物合成MCP的速度。瘤胃中主要由厭氧真菌和細(xì)菌分泌蛋白酶，利用蛋白質(zhì)合成NH3-N。研究發(fā)現(xiàn)，瘤胃內(nèi)有7種真菌可以通過(guò)合成有氨基肽酶活性的蛋白酶利用蛋白質(zhì)［16］。有研究表明，瘤胃內(nèi)去除厭氧真菌后，蛋白酶合成量顯著減少，真菌和細(xì)菌競(jìng)爭(zhēng)作用消失，細(xì)菌生長(zhǎng)、繁殖抑制得到解除，對(duì)NH3-N利用速度加快。反芻動(dòng)物瘤胃液中NH3-N濃度越高，表明飼糧中蛋白質(zhì)被利用的程度越高，細(xì)菌合成MCP的原料就越多，從而可以提高M(jìn)CP的合成量。

在該研究中，各組體外培養(yǎng)液中的NH3-N濃度在培養(yǎng)0～12 h時(shí)呈快速上升趨勢(shì)，主要是由于瘤胃微生物有充足的碳水化合物可供利用，生長(zhǎng)繁殖快速，大量利用蛋白質(zhì)產(chǎn)生NH3-N；在培養(yǎng)12～48 h時(shí)進(jìn)入緩慢下降階段，這是由于微生物生成NH3-N的速度小于細(xì)菌利用NH3-N合成MCP的速度。從培養(yǎng)6 h開(kāi)始，與其他處理組及對(duì)照組相比，外源酶10 mg/kg處理組的NH3-N濃度始終處于較高水平，這主要是由于低濃度外源酶可提高厭氧真菌的活性。

3.4 對(duì)體外培養(yǎng)液中MCP濃度的影響 瘤胃液中的MCP是反芻動(dòng)物所需蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的主要來(lái)源，對(duì)反芻動(dòng)物生長(zhǎng)影響很大。瘤胃中的細(xì)菌利用NH3-N合成MCP，而一些黃色瘤胃球菌和白色瘤胃球菌對(duì)NH3-N的利用優(yōu)于對(duì)氨基酸的利用。在該研究中，在培養(yǎng)0～12 h和18～24 h 2個(gè)時(shí)間段內(nèi)，各組體外培養(yǎng)液中MCP的合成呈現(xiàn)出快速上升趨勢(shì)，這主要是由于培養(yǎng)液中NH3-N的濃度較高，細(xì)菌有充足的NH3-N可供合成MCP；在培養(yǎng)后期，NH3-N產(chǎn)量減少，抑制細(xì)菌合成MCP，MCP合成進(jìn)入緩慢期。該研究結(jié)果表明，添加10 mg/kg的外源酶能夠顯著提高培養(yǎng)液NH3-N濃度，促進(jìn)細(xì)菌合成MCP，提高蛋白質(zhì)利用率。然而，40 mg/kg處理組培養(yǎng)液中的MCP濃度在除48 h外的各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比差異均不顯著（P＞0.05），表明高濃度外源酶抑制了微生物的活性。

3.5 對(duì)體外培養(yǎng)液VFA濃度的影響 反芻動(dòng)物瘤胃液中的VFA是微生物降解碳水化合物的產(chǎn)物，是反芻動(dòng)物機(jī)體主要的碳來(lái)源和能量來(lái)源，瘤胃液VFA為反芻動(dòng)物提供60%～80%的能量［17］。在該研究中，在培養(yǎng)0～18 h時(shí)，培養(yǎng)液中的VFA濃度快速上升，主要是由于底物中碳水化合物含量較高，引起瘤胃液VFA濃度升高，進(jìn)而刺激瘤胃上皮組織對(duì)VFA的吸收，提高吸收率。由乙酸、丙酸濃度變化情況可知，添加外源酶可以顯著提高二者產(chǎn)量，以添加量為10 mg/kg的效果最佳。在培養(yǎng)18～48 h時(shí)，各處理組培養(yǎng)液中的乙酸濃度/丙酸濃度與對(duì)照組相比差異均不顯著（P＞0.05），表明外源酶不會(huì)改變VFA中各成分組成比例，只是提高VFA總產(chǎn)量，這主要是由于外源酶可以提高瘤胃微生物活性，進(jìn)而增加其對(duì)底物的利用率。

4 結(jié)論

在體外培養(yǎng)條件下，添加外源酶可改善湖羊瘤胃微生物發(fā)酵特性，提高瘤胃微生物對(duì)底物的利用率，其中以添加量為10 mg/kg效果最佳。

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Effects of Exogenous Enzymes Supplementation to Diet on Gas Production,pH Value and Dynamic of Changes of Fermentation Parameters in Rumen Fermentation of Lake Sheep in vitro

CHEN Yu
（Ningde Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Ningde 352100，China）

The aims of the present study were to assess the effect of exogenous enzymes supplementation on in vitro cultural characteristic of microbes in rumen fermentation of Lake Sheep and to provide scientific references for the application of exogenous enzymes in animal feedstuff.Four levels of exogenous enzymes,including 10,20,30,40 mg/kg,were supplemented into in vitro rumen fermentation cultural system respectively.The rumen microbes were co-cultured with exogenous enzymes,and the gas production（GP）,pH value,NH3-N concentration,MCP concentration and VFA concentration in the cultural fermentation were determined at 6th,12th,18th,24th,36thand 48thh after the start of culture.The results showed that the GP,pH value,NH3-N concentration,MCP concentration and VFA concentration in the rumen microbes fermentation of Lake Sheep in vitro were effectively increased by supplementation of different levels of exogenous enzymes,and the 10 mg/kg of exogenous enzymes exhibited the best performance.

exogenous enzymes；rumen microbes；in vitro culture；Lake Sheep

S816.79；S826.6

A文章順序編號(hào)：1672-5190（2016）09-0039-06

2016-08-10

陳宇（1981—），男，獸醫(yī)師，碩士，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量、飼料及飼料添加劑質(zhì)量控制研究工作。

（責(zé)任編輯：趙俊利）