不孕癥女性陰道微生態(tài)狀況分析

秦曉梅 孫成華

【摘要】目的：觀察不孕女性陰道微生態(tài)和陰道菌群狀況，探討不孕癥女性進(jìn)行陰道微生態(tài)和菌群評(píng)價(jià)的臨床價(jià)值。方法：收集本院收治不孕癥女性150例，同期100例育齡期體檢健康婦女作為對(duì)照組；比較兩組陰道分泌物的微生態(tài)狀況和Nugent評(píng)分；采取細(xì)菌培養(yǎng)法檢測(cè)兩組陰道分泌物菌群分布。結(jié)果：對(duì)照組和不孕組在陰道分泌物的多樣性、密集度、優(yōu)勢(shì)菌、pH值以及清潔度方面，比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。對(duì)照組和不孕組的陰道分泌物Nugent評(píng)分在≥7分、4～6分和0～3分三個(gè)層次比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。對(duì)照組和不孕組在培養(yǎng)菌群金黃色葡萄球菌、大腸艾希氏菌、腸桿菌、酵母樣菌和表皮葡萄球菌的檢出率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。兩組清潔度異常者革蘭陽(yáng)性球菌、革蘭陰性桿菌、革蘭陰性球菌、革蘭陰性雙球菌、霉菌、滴蟲(chóng)、加德納菌檢出率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：不孕癥女性和育齡期健康女性的陰道微生態(tài)狀況、BV患病率以及陰道菌群分布方面比較無(wú)顯著性差異。

【關(guān)鍵詞】不孕癥；陰道微生態(tài)；陰道菌群；Nugent評(píng)分

Analysis of vaginal microflora and micro ecological condition in infertility femaleQIN Xiaomei1， SUN Chenghua2. 1.Department of Obstetrics and Gynecology， Fuling District Peoples Hospital， Chongqing 408000， China；2.Anesthesiology Department， Fuling Central Hospital， Chongqing 408000， China

【Abstract】Objectives： To observe the vaginal microflora and micro ecological condition in infertility female and discuss its clinical value. Methods： 150 infertile female patients in our hospital were selected as infertility group and 100 healthy women of child-bearing age as control group. Vaginal micro ecological conditions and scores of Nugent were compared between the two groups. Distributions of vaginal microflora were detected by bacterial culture method in two groups. Results： No statically significant differences were observed in intensity， diversity， advantage bacterium， pH value and cleanliness of vaginal secretion between the two groups （P>0.05）. No statistically significant difference were observed it scores of Nugent in vaginal secretion at three levels of ≥7 scores， 4～6 scores and 0～3 scores between the two groups （P>0.05）. No statically significant differences were observed in detection rate of bacteria of staphylococcus aureus， Escherichia coli， enteric bacilli， saccharomycopsis and staphylococcus epidermidis between the two groups （P>0.05）. Furthermore， there was no statistically significant difference in relevance ratio of gram positive coccus， gram negative bacilli， gram negative bacteria， gram-negative diplococcus， mould， trichomonad， and gardnerella for cleanliness anomal between the two groups （P>0.05）. Conclusions： Vaginal micro ecological condition， morbidity of BV and distribution of vaginal pathogenic bacteria show no significant difference between infertile female and normal ones.

【Key words】Infertility； Vaginal micro ecological condition； Vaginal microflora； Scores of Nugent

【中圖分類號(hào)】R711.6【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

女性陰道微生態(tài)體系由陰道解剖構(gòu)造、陰道微生態(tài)菌群以及內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能組成。健康女性陰道內(nèi)存在著不同種類的微生物群落，如乳酸桿菌、酵母菌以及大腸埃希菌等，這些菌落與集體環(huán)境間相互協(xié)調(diào)、相互制約，對(duì)陰道正常微生態(tài)和菌群的維持發(fā)揮了關(guān)鍵作用[1，2]。

目前，女性不孕癥是臨床常見(jiàn)病，伴隨工作壓力的增加、社會(huì)環(huán)境的變化以及性病發(fā)病率增多，女性不孕癥呈逐年增高趨勢(shì)[3]。研究證實(shí)，陰道感染是導(dǎo)致女性不孕癥的重要原因之一[4]。然而，關(guān)于不孕女性陰道的微生態(tài)及其陰道菌群的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究選取2014年2月至2015年3月本院收治不孕婦女150例，同期納入100例育齡健康體檢女性作為對(duì)照組，對(duì)兩組研究對(duì)象的陰道微生態(tài)狀況、Nugent評(píng)分以及陰道菌群分布進(jìn)行了評(píng)價(jià)。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象

選取2014年2月至2015年3月本院收治不孕婦女150例，不孕癥依據(jù)排卵功能和B超等影像學(xué)檢測(cè)進(jìn)行確診，年齡23～40歲，平均（33.15±3.52）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）月經(jīng)干凈至少3d者；（2）檢查前未做陰道沖洗，近1周內(nèi)未采用陰道藥物；（3）檢查前3d無(wú)性生活史；（4）無(wú)陰道炎癥狀以及性病者；（5）無(wú)其他合并癥；（6）自愿加入本研究，簽署同意協(xié)議。同期選取100例育齡健康體檢女性作為對(duì)照組，該組女性均有正常排卵，卵泡質(zhì)量良好，年齡22～38歲，平均（32.68±3.49）歲。

1.2研究方法

用無(wú)菌棉簽從所有研究對(duì)象的陰道側(cè)壁上1/3處取得分泌物，采用pH 3.8～5.4精密pH試紙檢測(cè)分泌物pH值；經(jīng)革蘭染色后在油鏡下評(píng)價(jià)陰道微生態(tài)，包括陰道菌群的密集度、多樣性、優(yōu)勢(shì)菌、炎癥反應(yīng)等狀況；同時(shí)進(jìn)行涂鹽水濕片，直接光鏡檢查清潔度、有無(wú)真菌菌絲和滴蟲(chóng)。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1菌群密集度評(píng)價(jià)在100倍油鏡下觀察，依據(jù)每個(gè)視野的平均細(xì)菌數(shù)分為Ⅰ～Ⅳ級(jí)[4]；Ⅰ級(jí)：l～9個(gè)；Ⅱ級(jí)：10～99個(gè)；Ⅲ級(jí)：≥100個(gè)或細(xì)菌滿視野；Ⅳ級(jí)：細(xì)菌聚集成團(tuán)。

1.3.2菌群多樣性依據(jù)可辨別的細(xì)菌菌群數(shù)目分為Ⅰ～Ⅳ級(jí)[4]；Ⅰ級(jí)：1～3種細(xì)菌；Ⅱ級(jí)：4～6種細(xì)菌；Ⅲ級(jí)：7～10種細(xì)菌；Ⅳ級(jí)：11種以上細(xì)菌。

1.3.3優(yōu)勢(shì)菌鏡下觀察到的最多微生物即為優(yōu)勢(shì)菌[5]。

1.3.4清潔度判斷標(biāo)準(zhǔn)參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第4版）制定標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ～Ⅱ度為正常，Ⅲ和Ⅲ度以上為炎癥。

1.3.5細(xì)菌性陰道病參照Nugent等[6制定標(biāo)準(zhǔn)；≥7分為細(xì)菌性陰道?。˙V）陽(yáng)性，4～6分為BV中間型，0～3分為正常。

1.3.6細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)用無(wú)菌棉拭子取陰道后穹隆分泌物，將分泌物接種于平板上，置于37℃溫箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)菌鑒定應(yīng)用美國(guó)SCAN24鑒定系統(tǒng)。

1.3.7兩組清潔度異常者陰道分泌物中微生物觀察主要觀察指標(biāo)包括革蘭陰性菌、革蘭陽(yáng)性球菌、霉菌、加德納菌以及滴蟲(chóng)。

1.4指標(biāo)診斷標(biāo)準(zhǔn)

（1）陰道微生態(tài)正常：陰道菌群的多樣性和密集度均為Ⅱ～Ⅲ級(jí)，優(yōu)勢(shì)菌為革蘭陽(yáng)性大桿菌，陰道pH值≤4.5，清潔度為Ⅰ度。（2）陰道微生態(tài)失調(diào)：陰道菌群的多樣性、密集度、優(yōu)勢(shì)菌、pH值和炎性反應(yīng)其中任一出現(xiàn)異常，均可確診。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件包處理，用χ2檢驗(yàn)處理計(jì)數(shù)資料，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組陰道微生態(tài)狀況的比較

對(duì)照組和不孕組在陰道分泌物的多樣性、密集度、優(yōu)勢(shì)菌、pH值以及清潔度方面比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

2.2兩組陰道分泌物Nugent評(píng)分比較

對(duì)照組和不孕組的陰道分泌物Nugent評(píng)分在≥7分、4～6分和0～3分三個(gè)層次比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

2.3兩組陰道分泌物細(xì)菌培養(yǎng)比較

對(duì)照組和不孕組培養(yǎng)金黃色葡萄球菌、大腸艾希氏菌、腸桿菌、酵母樣菌和表皮葡萄球菌的檢出率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表3。

2.4兩組陰道分泌物清潔度異常者微生物感染分布比較

對(duì)照組和不孕組陰道分泌物清潔度異常者的革蘭陽(yáng)性球菌、革蘭陰性桿菌、革蘭陰性球菌、革蘭陰性雙球菌、霉菌、滴蟲(chóng)、加德納菌的檢出率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表4。

3討論

女性不孕癥的病因病機(jī)較為復(fù)雜，目前已知的因素包括內(nèi)分泌失調(diào)、子宮內(nèi)膜異位癥、輸卵管堵塞以及心理障礙等[7-9]。近年，陰道感染已被證實(shí)與女性不孕癥的發(fā)生聯(lián)系密切。眾所周知，射精后精液暫存于陰道后穹窿的精液池，在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中精子脫離精漿而懸浮在生殖道分泌物中。因此，精子是否能夠與卵子結(jié)合或繼續(xù)保持良好狀態(tài)與陰道分泌物密切相關(guān)。由于不孕癥患者陰道微生態(tài)狀況和菌群分布改變?cè)谂R床往往無(wú)癥狀，常易被漏診。陰道分泌物診查具有標(biāo)本提取方便、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果直觀等特點(diǎn)，可作為不孕癥患者臨床檢查的首選項(xiàng)目。

陰道分泌物是由陰道、前庭大腺、子宮及其周圍結(jié)構(gòu)分泌。正常陰道分泌物以乳酸桿菌為主，其分泌物的量、黏稠度、pH值以及化學(xué)成分均利于精子的存活、運(yùn)動(dòng)。近年，陰道微生態(tài)已日益獲得國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視，關(guān)于陰道微生態(tài)對(duì)不孕癥的影響也取得較大進(jìn)展[10]。目前，陰道微生態(tài)的臨床診斷指標(biāo)包括觀察菌群的多樣性、密集度、優(yōu)勢(shì)菌以及陰道清潔度和pH值等。本研究選擇本院收治150例女性不孕癥患者，同期納入100例育齡期女性作為健康對(duì)照，比較兩組研究對(duì)象陰道分泌物微生物菌群的多樣性、密集型、清潔度、優(yōu)勢(shì)菌以及pH值；結(jié)果顯示，對(duì)照組和不孕組在陰道分泌物的多樣性、密集度、優(yōu)勢(shì)菌、pH值以及清潔度方面，比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果與以往研究報(bào)道略有不同，可能與納入樣本量和具體研究對(duì)象素質(zhì)不同相關(guān)，但結(jié)論與之前報(bào)道一致[11]。

BV為陰道內(nèi)正常菌群失調(diào)引起的一種混合陰道感染，伴隨致病菌的生長(zhǎng)繁殖，其代謝產(chǎn)生可破壞機(jī)體的免疫防御系統(tǒng)，使得致病菌進(jìn)入上生殖道，導(dǎo)致炎癥發(fā)生，如不及時(shí)治療會(huì)引起輸卵管扭曲；因此，BV可能是輸卵管性不孕的隱患[7]。本研究應(yīng)用Nugent評(píng)分結(jié)果顯示，對(duì)照組和不孕組的陰道分泌物Nugent評(píng)分在≥7分、4～6分和0～3分三個(gè)層次比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；結(jié)果與以往報(bào)道近似[11]。

女性陰道內(nèi)寄生許多細(xì)菌，這些細(xì)菌相互制約、正常共生，保持陰道的健康狀態(tài)[12]。目前已知的菌群如乳酸桿菌、腸球菌、大腸桿菌以及棒狀桿菌等[13-15]。本研究經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)檢出的菌群包括金黃色葡萄球菌、大腸艾希氏菌、腸桿菌、酵母樣菌和表皮葡萄球菌；通過(guò)比較結(jié)果顯示：對(duì)照組和不孕組的金黃色葡萄球菌、大腸艾希氏菌、腸桿菌、酵母樣菌和表皮葡萄球菌的培養(yǎng)檢出率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

為了進(jìn)一步探討不孕癥女性陰道微生態(tài)狀況，筆者對(duì)兩組清潔度異常者的陰道分泌物的微生物情況進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示：不孕癥患者的陰道分泌物中均可檢出革蘭陽(yáng)性球菌、革蘭陰性桿菌、革蘭陰性球菌、革蘭陰性雙球菌、霉菌、滴蟲(chóng)以及加德納菌；然而與對(duì)照組比較，上述指標(biāo)比較的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。以上細(xì)菌對(duì)人體均有一定致病性，尤其是革蘭陽(yáng)性球菌和加德納菌；如加德納菌為性接觸傳播疾病的常見(jiàn)病原菌，也是女性非特異性BV最常見(jiàn)病原菌；加德納菌可分泌陰道溶細(xì)胞素，抑制陰道黏膜屏障免疫球蛋白A的作用，激活P38分裂原從而活化蛋白激酶，促進(jìn)陰道上皮細(xì)胞凋亡[16]。至于上述細(xì)菌是否對(duì)不孕癥產(chǎn)生影響有待于進(jìn)一步探究。

綜上所述，不孕癥女性與體檢健康女性在微生態(tài)狀態(tài)、陰道分泌物Nugent評(píng)分以及陰道分泌物細(xì)菌培養(yǎng)菌群比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而，尚不能認(rèn)為女性不孕癥與陰道微生態(tài)無(wú)關(guān)。由于陰道分泌物改變不完全是女性不孕癥的獨(dú)立因素，某些情況下可能僅僅是其中的一個(gè)中間環(huán)節(jié)；因此，陰道分泌內(nèi)容無(wú)異?？赡芎蜕硟?nèi)分泌、免疫異常等相聯(lián)系，相互作用，促成不孕癥的形成、發(fā)展。

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