葛愛(ài)民　崔曉娜　李汝春

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院　山東 濰坊　261061）

山東地區(qū)肉雞源大腸桿菌對(duì)安普霉素的敏感性試驗(yàn)

葛愛(ài)民崔曉娜李汝春

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院山東 濰坊261061）

本研究對(duì)山東地區(qū)分離的77株肉雞源致病性大腸桿菌應(yīng)用安普霉素進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以指導(dǎo)養(yǎng)殖場(chǎng)正確合理地使用安普霉素來(lái)防治肉雞疾病。試驗(yàn)結(jié)果表明，山東省六個(gè)地區(qū)肉雞源大腸桿菌分離株對(duì)安普霉素的敏感性有較大差異，總體耐藥率高。因此，可增加大腸桿菌敏感藥物的輪換使用以及配伍應(yīng)用，做好致病性大腸桿菌的細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測(cè)，合理制定用藥方案。

安普霉素肉雞大腸桿菌藥敏試驗(yàn)

肉雞大腸桿菌病是由某些致病性大腸桿菌引起的不同類型疾病的總稱，主要引起肉雞的心包炎、肝周炎、氣囊炎、腹膜炎、輸卵管炎、敗血癥等［1］。本病傳染性強(qiáng)，發(fā)病率高，給肉雞生產(chǎn)帶來(lái)較大經(jīng)濟(jì)損失，因此肉雞大腸桿菌病的有效防治已成為集約化肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)的難題之一。由于大腸桿菌為條件性致病菌，多繼發(fā)于病毒感染、支原體感染、應(yīng)激等，且易對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性，所以很多養(yǎng)殖場(chǎng)在臨床用藥選擇上面臨較多困難，進(jìn)行致病性大腸桿菌分離株的藥敏試驗(yàn)不可避免。

硫酸安普霉素為動(dòng)物專用氨基糖苷類抗生素，對(duì)大腸桿菌病有較好的治療效果，目前很多肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)一個(gè)飼養(yǎng)周期甚至用到2～3遍，很容易出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象。本試驗(yàn)從山東不同地區(qū)肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)分離致病性大腸桿菌，做安普霉素的敏感性試驗(yàn)，為養(yǎng)殖場(chǎng)提供用藥參考。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1病料采自山東多地肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)疑似大腸桿菌病的肝、脾等臟器。

1.1.2試劑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂購(gòu)自上海醫(yī)藥試劑公司，按常規(guī)方法自制平板；葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇等微量生化發(fā)酵管，購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.1.3安普霉素藥敏紙片安普霉素藥敏紙片及大腸桿菌（ATCC25922），均購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)菌分離無(wú)菌操作取病料劃線接種于麥康凱培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)l8～24h。挑取單個(gè)菌落，于普通瓊脂平板上進(jìn)行純培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)18～24h。挑取單個(gè)菌落，進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。

1.2.2生化試驗(yàn)挑取待檢菌株單菌落接種葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇等微量生化發(fā)酵管進(jìn)行生化項(xiàng)目測(cè)定，反應(yīng)條件按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.3藥敏試驗(yàn)在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板表面均勻涂抹培養(yǎng)的待檢大腸桿菌，再將安普霉素藥敏紙片貼于培養(yǎng)基表面。將貼好紙片的培養(yǎng)皿放于37℃恒溫箱培養(yǎng)16～24h后，用游標(biāo)卡尺測(cè)量各藥敏紙片的抑菌圈直徑，并記錄結(jié)果。

2　結(jié)果

2.1細(xì)菌分離

在麥康凱培養(yǎng)基上形成中等大小的紅色菌落，挑取單個(gè)菌落，劃線接種于普通瓊脂平板上純培養(yǎng)后，菌落呈光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色、圓形微凸起。革蘭氏染色后，鏡下均可見(jiàn)大量散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無(wú)芽孢直桿菌，初步判定為大腸桿菌。

2.2生化試驗(yàn)

分離菌株都發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、阿拉伯糖，大多數(shù)菌株可迅速發(fā)酵木糖、乳糖。所有菌株不產(chǎn)生H2S，不分解尿素，不利用枸櫞酸鹽，不液化明膠。VP試驗(yàn)呈陰性，M-R試驗(yàn)和吲哚試驗(yàn)均呈陽(yáng)性。多地分離菌株均符合大腸桿菌的生化特性，共77株，判定為大腸桿菌。

2.3藥敏試驗(yàn)

根據(jù)2000年5月實(shí)施的《紙片法抗菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)》判定，判定敏感（S）、中介（I）和耐藥（R）。77株山東不同地區(qū)肉雞源大腸桿菌對(duì)安普霉素的藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　77株肉雞源大腸桿菌對(duì)安普霉素的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果顯示，山東地區(qū)總共分離的77株大腸桿菌對(duì)安普霉素的敏感菌株不多，其中，濰坊地區(qū)21株中只有14.3%的敏感，臨沂地區(qū)15株中沒(méi)有敏感菌株，濱州和日照地區(qū)也較少，分別只占分離菌株數(shù)的16.7%和8.3%，同時(shí)以上地區(qū)耐藥率都達(dá)到50%以上，臨沂地區(qū)更是達(dá)到了86.7%；青島和威海地區(qū)分離菌株中敏感菌株分別到達(dá)了55.6%和75%。以上說(shuō)明，不同地區(qū)分離到的大腸桿菌菌株對(duì)安普霉素的敏感性還是有較大差別。

3　討論

（1）安普霉素為動(dòng)物專用的抗生素，對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌等引起的感染有較好的療效，但隨著其在臨床上的應(yīng)用，已經(jīng)出現(xiàn)了耐安普霉素菌株［2］。（2）大腸桿菌的耐藥性是影響肉雞大腸桿菌病治療效果的重要因素，每年因耐藥問(wèn)題造成的經(jīng)濟(jì)損失非常大。由于該菌為條件致病菌，與各種抗菌藥物接觸的機(jī)會(huì)多，再加上肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)濫用抗菌藥物問(wèn)題突出，耐藥性產(chǎn)生相對(duì)容易，且易產(chǎn)生多重耐藥。因此，雞源大腸桿菌耐藥性問(wèn)題一直是很多學(xué)者研究的重點(diǎn)。2012年王彩先等［3］試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雞源大腸桿菌對(duì)安普霉素的耐藥率達(dá)70.9%。（3）本次藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，山東省6個(gè)地區(qū)肉雞源致病性大腸桿菌對(duì)安普霉素都產(chǎn)生了一定的耐藥性，其中臨沂地區(qū)耐藥率達(dá)到了86.7%，濰坊地區(qū)耐藥率達(dá)到了66.7%，濱州地區(qū)耐藥率達(dá)到了66.6%，基本反映目前生產(chǎn)一線安普霉素使用現(xiàn)狀，有些養(yǎng)殖場(chǎng)一批肉雞可以用到兩三遍，同時(shí)存在超量用藥情況，耐藥菌株出現(xiàn)非常正常［4］。（4）2009年鄒玲［5］試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)膠東地區(qū)130株肉雞源大腸桿菌對(duì)安普霉素的敏感率達(dá)到了64.6%，耐藥率為15.4%，本次試驗(yàn)青島和威海地區(qū)分離菌株中敏感菌株分別到達(dá)了55.6%和75%，耐藥率分別為22.2%和25%，說(shuō)明膠東地區(qū)相比其他地區(qū)幾年來(lái)用安普霉素防治肉雞大腸桿菌病相對(duì)效果好一些。

本次試驗(yàn)只是做了山東省六個(gè)地區(qū)分離的77株肉雞源大腸桿菌對(duì)安普霉素的敏感性試驗(yàn)，并沒(méi)有做大腸桿菌敏感藥物的篩選及安普霉素與其他藥物配伍使用的效果檢驗(yàn)，建議增加防治大腸桿菌藥物的輪換使用以及配合其他敏感藥物使用，盡可能做好肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)致病性大腸桿菌的細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測(cè)［6］，合理制定用藥方案。

［1］ 于萍， 于靜. 肉雞大腸桿菌病的診治［J］. 畜禽業(yè)， 2012， 12∶ 71-72.

［2］ 高允樂(lè)， 張秀英， 底佳芳等. 雞源耐安普霉素大腸桿菌耐藥表型研究［J］. 中國(guó)獸藥雜志， 2005， 39（9）∶ 9-11.

［3］ 王彩先， 詹麗娥， 陸冰洋等. 雞大腸桿菌的耐藥性試驗(yàn)［J］. 中國(guó)動(dòng)物保健， 2012， 9∶ 24-26.

［4］ 侯志華. 肉雞致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)［J］. 畜禽業(yè)，2013， 12∶ 20-21.

［5］ 鄒玲. 膠東地區(qū)肉雞大腸桿菌藥敏試驗(yàn)［J］. 畜禽業(yè)， 2009， 06∶ 74.

［6］ 徐士新. 我國(guó)對(duì)抗菌藥物耐藥性應(yīng)采取的措施［J］. 中國(guó)獸藥雜志，2001， 35（6）∶ 39-41.

S859.79+6

A

1007-1733（2016）10-0005-02

2016-07-06）

山東省濰坊市科學(xué)技術(shù)發(fā)展計(jì)劃（2014GX074）。