響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化脆江蘺多糖提取工藝及其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用

鞠瑤瑤，曹純潔，陳美珍*，葉天文

（汕頭大學(xué)理學(xué)院，廣東 汕頭 515063）

響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化脆江蘺多糖提取工藝及其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用

鞠瑤瑤，曹純潔，陳美珍*，葉天文

（汕頭大學(xué)理學(xué)院，廣東 汕頭 515063）

目的：研究脆江蘺多糖（Gracilaria chouae polysaccharides，GLP）的提取方法及其對(duì)腫瘤細(xì)胞生長的影響。方法：響應(yīng)面法優(yōu)化GLP提取工藝條件；四甲基偶氮唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法檢測GLP對(duì)體外培養(yǎng)的人宮頸癌（HeLa）、食道癌（EC-109）、肝癌（HepG-2）以及乳腺癌（MCF-7）細(xì)胞生長的影響。結(jié)果：GLP最佳提取條件為預(yù)熱溫度93.1 ℃、料液比1∶61.5（g/mL）、超聲時(shí)間35 min，在此條件下GLP提取率為16.75%。GLP在質(zhì)量濃度200～1 000 μg/mL范圍內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞均有抑制作用，且呈劑量依賴關(guān)系。當(dāng)GLP質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL時(shí)，其對(duì)HeLa、HepG-2、MCF-7和EC-109細(xì)胞的抑制率分別為49.11%、41.18%、34.98%和31.33%。對(duì)HeLa細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察以及Annexin V-FITC/PI熒光染色檢測發(fā)現(xiàn)，隨著GLP給藥劑量的增加，凋亡和壞死細(xì)胞不斷增多。結(jié)論：GLP對(duì)體外培養(yǎng)的人HeLa、EC-109、HepG-2以及MCF-7等癌細(xì)胞增殖有抑制作用，并能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

脆江蘺多糖；提??；HeLa細(xì)胞；凋亡

鞠瑤瑤， 曹純潔， 陳美珍， 等. 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化脆江蘺多糖提取工藝及其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用［J］. 食品科學(xué)， 2016，37（8）: 57-62. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201608010. http://www.spkx.net.cn

JU Yaoyao， CAO Chunjie， CHEN Meizhen， et al. Optimization of extraction of polysaccharides from Gracilaria chouae and their inhibitory effects on tumor cells［J］. Food Science， 2016， 37（8）: 57-62. （in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201608010. http://www.spkx.net.cn

脆江蘺（Gracilaria chouae）屬于紅藻門（Rhodophyta）、真紅藻綱（Florideae）、杉藻目（Gigartinales）、江蘺科（Gracilariaceae）、江蘺屬（Gracilaria）［1］，是一種新型的養(yǎng)殖海藻。目前，該海藻已在廣東省南澳沿海養(yǎng)殖成功并可大面積種植，多糖是其主要活性成分之一。關(guān)于海藻多糖提取的研究很多，傳統(tǒng)工藝有熱水浸提法和稀酸、稀堿浸提法等。新工藝包括酶法、超聲波輔助法、微波輔助浸提法、超濾法［2］等。其中熱水浸提法因其操作簡便、成本低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。研究發(fā)現(xiàn)江蘺屬的龍須菜多糖具有多種生物活性，如Fan Yanli等［3］研究發(fā)現(xiàn)龍須菜酸性多糖可以有效抑制H22肝癌細(xì)胞的生長，陳美珍等［4］對(duì)龍須菜多糖研究表明龍須菜多糖具有抗腫瘤、抗氧化等生理活性。然而，國內(nèi)外對(duì)江蘺屬脆江蘺的研究報(bào)道主要集中在品種的改良、栽培等方面，對(duì)其多糖的提取及生理活性的研究報(bào)道甚少。本實(shí)驗(yàn)將對(duì)脆江蘺多糖（Gracilaria chouae polysaccharides，GLP）的提取及體外抗腫瘤活性展開研究，以期為GLP的加工以及利用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

脆江蘺 廣東省汕頭大學(xué)南澳實(shí)驗(yàn)站。

人宮頸癌HeLa細(xì)胞株 汕頭大學(xué)多學(xué)科中心；食道癌細(xì)胞（EC-109）、肝癌細(xì)胞（HepG-2）、乳腺癌細(xì)胞（MCF-7） 溫州醫(yī)學(xué)院。

半乳糖標(biāo)準(zhǔn)品 中國食品藥品檢定研究院；牛血清白蛋白（分析純） 美國Sigma公司；DMEM高糖培養(yǎng)基 美國Hyclone公司；胎牛血清 杭州四季青科技有限公司；四甲基偶氮唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO） 美國Amresco公司；陽性藥物5-氟尿嘧啶（5-FU） 上海源葉生物科技有限公司；胰酶細(xì)胞消化液、青霉素-鏈霉素溶液、Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒碧云天生物技術(shù)研究所。

1.2儀器與設(shè)備

高速萬能粉碎機(jī) 天津市泰斯特儀器有限公司；NJL07-5超聲波細(xì)胞粉碎機(jī) 南京杰全微波設(shè)備有限公司；HH-2型恒溫水浴鍋 國華電器有限公司；Universal 320R臺(tái)式冷凍離心機(jī) 德國Hettich公司；低溫冷凍干燥機(jī) 上海比朗儀器有限公司；3111型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱美國Thermo公司；CK30倒置顯微鏡 日本Olympus公司；倒置熒光顯微鏡 日本Nikon公司；-65 ℃超低溫冰箱 中科美菱低溫科技有限責(zé)任公司；全波段掃描酶標(biāo)儀 瑞士Tecan公司。

1.3方法

1.3.1GLP的提取工藝流程

脆江蘺洗凈、烘干→粉碎過40 目篩→脆江蘺干粉→加水溶解→預(yù)熱→超聲提取→提取液離心→減壓濃縮→無水乙醇沉淀2次→冷凍干燥→粗多糖

取適量粗多糖溶液，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%的三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）溶液至終質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到4%以除蛋白，4 ℃放置過夜，離心，NaOH中和上清多糖溶液。單蒸水、雙蒸水各透析36 h，濃縮透析液，冷凍干燥后得精多糖（GLP）。

1.3.2GLP含量的測定

采用改良的苯酚-硫酸比色法［5-6］。以半乳糖為標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，試劑的配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制等參照文獻(xiàn)［5-6］進(jìn)行。經(jīng)測定得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.005 1X-0.013 8（Y為吸光度，X為多糖含量），相關(guān)系數(shù)R2=0.995。將多糖溶液適當(dāng)稀釋后，測其吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算其多糖含量。

1.3.3GLP提取工藝單因素試驗(yàn)

分別以預(yù)熱溫度、料液比、超聲時(shí)間為單因素進(jìn)行試驗(yàn)，考察各因素對(duì)GLP提取率的影響，計(jì)算如式（1）所示：

1.3.4響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取預(yù)熱溫度、料液比、超聲時(shí)間3 個(gè)因素作為Box-Behnken設(shè)計(jì)的自變量，GLP提取率為響應(yīng)值進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化組合，因素與水平設(shè)計(jì)見表1。試驗(yàn)結(jié)果用Minitab軟件進(jìn)行分析。

表1　Box-Behnken試驗(yàn)因素水平編碼表Table 1 Coded levels for dependent variables used in Box-Behnken design

1.3.5GLP對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞生長的影響

MTT法檢測多糖對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用［7-8］。取對(duì)數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，調(diào)成細(xì)胞數(shù)量濃度為1×105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，100 μL/孔接種于96 孔板，18 h后換液，按終質(zhì)量濃度200、400、600、800、1 000 μg/mL分別加入GLP作用液，陰性對(duì)照組用等量的完全培養(yǎng)基代替，48 h后，移除上清液加入MTT孵育4 h，吸出MTT，加入DMSO，振蕩混勻。酶標(biāo)儀作雙波長檢測，檢測波長490 nm，參考波長570 nm，計(jì)算GLP對(duì)HeLa細(xì)胞的生長抑制率。抑制率計(jì)算如式（2）所示：

式中：A0為陰性對(duì)照組吸光度；A1為給藥組吸光度。

1.3.6HeLa細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

不同質(zhì)量濃度的GLP作用液（200、400、600、800、1 000 μg/mL）處理HeLa細(xì)胞48 h，陰性對(duì)照組用等量的完全培養(yǎng)基代替，于倒置顯微鏡下觀察HeLa細(xì)胞的形態(tài)變化。

1.3.7Annexin V-FITC/PI熒光染色檢測細(xì)胞凋亡

采用上海碧云天生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的細(xì)胞凋亡Annexin V-FITC/PI檢測試劑盒。檢測方法按照試劑盒說明書進(jìn)行，并于倒置熒光顯微鏡下觀察、拍照。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。用單因素方差分析組間差異的顯著性，結(jié)果采用±s表示，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果與分析

2.1GLP提取的單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1料液比對(duì)GLP提取率的影響

圖1　料液比對(duì)GLP提取率的影響Fig.1 Effect of water to material ratio on the yield of polysaccharides

將脆江蘺粉按1∶40、1∶50、1∶60、1∶70、1∶80（g/mL）比例加水，預(yù)熱至80 ℃，在超聲波功率200 W條件下提取30 min，測定GLP提取率，結(jié)果如圖1所示。隨著溶劑體積的不斷增大，GLP提取率明顯提高，原因可能是超聲波將堅(jiān)硬的細(xì)胞壁破碎，而增加溶劑的比例，可有效降低溶液的黏度，提高質(zhì)量濃度差，有利于多糖分子的傳質(zhì)擴(kuò)散。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，確定GLP超聲提取的料液比1∶60為宜。

2.1.2超聲時(shí)間對(duì)GLP提取率的影響

將脆江蘺粉加水（料液比1∶60），預(yù)熱至80 ℃，在超聲波功率200 W條件下分別提取25、30、35、40、45 min，計(jì)算GLP提取率，結(jié)果如圖2所示。隨著超聲時(shí)間的延長，GLP提取率提高，當(dāng)超聲時(shí)間超過35 min后GLP提取率反而下降。原因可能是超聲波強(qiáng)有力的機(jī)械剪切長時(shí)間的作用使植物組織中大量的細(xì)胞破裂，細(xì)胞內(nèi)大量不溶物及黏性物質(zhì)等混入到提取液中，導(dǎo)致溶液中雜質(zhì)增多，黏度增大，影響了多糖成分的溶出；另一方面隨著超聲時(shí)間的延長，超聲波較強(qiáng)的空化作用使部分多糖分子鏈斷裂，小分子的糖在醇沉處理過程中損失掉，從而降低了GLP提取率［9］。由此可確定超聲時(shí)間以35 min為佳。

2.1.3預(yù)熱溫度對(duì)GLP提取率的影響

圖3　預(yù)熱溫度對(duì)GLP提取率的影響Fig.3 Effect of extraction temperature on the yield of polysaccharides

分別準(zhǔn)確稱取脆江蘺干粉10 g，在料液比1∶60、超聲時(shí)間30 min條件下，考察將料液預(yù)熱至不同溫度對(duì)GLP提取率的影響，結(jié)果見圖3。當(dāng)料液預(yù)熱溫度為90 ℃時(shí)，GLP提取率達(dá)最大值，繼續(xù)升高預(yù)熱溫度，GLP提取率反而呈下降趨勢，可能是由于溫度過高溶出大量的雜質(zhì)，導(dǎo)致溶液的黏度變大，GLP難以溶出，提取率下降。所以選擇90 ℃作為最佳預(yù)熱溫度。

2.2GLP提取工藝條件優(yōu)化結(jié)果

應(yīng)用Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以預(yù)熱溫度、料液比、超聲時(shí)間作為響應(yīng)面設(shè)計(jì)的因素，GLP提取率為響應(yīng)值，應(yīng)用三因素三水平的響應(yīng)面分析方法優(yōu)化GLP的提取工藝條件，試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果如表2所示。

對(duì)所得數(shù)據(jù)采用Minitab進(jìn)行回歸分析。如表3、4所示，該模型回歸極顯著（P＜0.01），失量項(xiàng)（P=0.103＞0.05）不顯著，表明二次多項(xiàng)式回歸模型可靠；R2=94.63%，表明方程對(duì)試驗(yàn)量合度較好，因此該模型可用于預(yù)測響應(yīng)值的實(shí)際情況。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果建立的數(shù)學(xué)模型為：Y=16.576 7+1.395 0A+0.117 5B+ 0.527 5C-2.390 8A2-3.145 8B2-2.330 8C2+0.015 0AB+ 0.510 0AC-0.200 0BC。試驗(yàn)號(hào)A預(yù)熱溫度B料液比C超聲時(shí)間Y GLP提取率/%

表2　響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案與結(jié)果Table 2 Box-Behnken experimental design and results for response surface analysis

表3　方差分析Table 3 Analysis of variance for the fitted regression equation

表4　回歸方程系數(shù)檢驗(yàn)Table 4 Significance test of all coefficients in the regression model

圖4　各因素交互作用對(duì)GLP提取率影響的響應(yīng)面及等高線圖Fig.4 Three-dimensional response surface and contour plots for the interactive effects of operating parameterson the extraction yield of GLP

根據(jù)回歸分析結(jié)果作響應(yīng)面圖，如圖4所示，由等高線圖可知，AC交互作用顯著（等高線圖呈橢圓形），結(jié)合表4可知AB及BC交互作用不顯著（等高線圖呈圓形）［10-12］；由曲面圖可知，3 種因素對(duì)GLP提取率的影響均呈拋物線型，表明3 種因素均存在最優(yōu)值，且都在中心點(diǎn)附近，即預(yù)熱溫度90 ℃左右、料液比1∶60附近、超聲時(shí)間35 min左右。

綜合響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果，得GLP最佳提取工藝條件為預(yù)熱溫度93.1 ℃、料液比1∶61.5、超聲時(shí)間35 min。在此最佳工藝條件下進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，所得GLP提取率平均值為16.75%，與模型所得理論值16.78%相近，偏差較小，表明回歸模型可靠，可用于GLP的提取。

2.3GLP對(duì)腫瘤細(xì)胞體外生長的影響

表5　GLP對(duì)HeLa、HepG-2、MCF-7和EC-109細(xì)胞生長的抑制作用Table 5 Inhibitory effects of GLP on HeLa， HepG-2， MCF-7 and EC-109 cells

由表5可見，GLP對(duì)體外培養(yǎng)的4 種腫瘤細(xì)胞均具有顯著的抑制作用，并在200～1 000 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。當(dāng)劑量為1 000 μg/mL作用48 h時(shí)，其抑制率分別達(dá)到49.11%、41.18%、34.98%、31.33%。結(jié)果表明，GLP對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的抑制作用具有差異性，其中對(duì)HeLa細(xì)胞的生長抑制作用最強(qiáng)。因此，選取HeLa細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。

圖5　GLP處理48 h后HeLa細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察（10×20）Fig.5 Morphological observation of HeLa cells treated with GLP for 48 h （10 × 20）

2.4GLP對(duì)HeLa細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響由圖5可見，陰性對(duì)照組細(xì)胞排列較緊密，體積較大，呈多邊形，細(xì)胞邊緣光滑，有少量漂浮細(xì)胞；而給藥各組隨著GLP質(zhì)量濃度的增大，細(xì)胞由貼壁逐漸脫落懸浮，貼壁細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞排列疏松，體積小，呈長梭形或死亡呈圓形，折光率增強(qiáng)，細(xì)胞膜完整但有發(fā)泡現(xiàn)象，且有不規(guī)則突起。部分細(xì)胞脫離周圍細(xì)胞，變圓，形態(tài)學(xué)上呈細(xì)胞凋亡狀態(tài)［13-14］，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GLP可能通過誘導(dǎo)HeLa凋亡，從而抑制HeLa細(xì)胞增殖。

2.5Annexin V-FITC/PI熒光染色檢測細(xì)胞凋亡

圖6　GLP處理HeLa細(xì)胞48 h后的Annexin V-FITC/PI雙熒光檢測照片（10×20）Fig.6 Annexin V-FITC/PI fluorescence pictures of HeLa cells treated with GLP for 48 h （10 × 20）

不同質(zhì)量濃度的GLP對(duì)HeLa細(xì)胞處理48 h，用Annexin V-FITC/PI雙熒光染色法檢測GLP誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡的能力，結(jié)果如圖6所示。GLP作用48 h后，隨著給藥劑量的增加，呈紅色熒光的細(xì)胞數(shù)量逐漸增多，說明GLP作用后HeLa細(xì)胞凋亡率隨藥物質(zhì)量濃度增加而升高［15-16］，且具有劑量依賴性，進(jìn)一步證實(shí)GLP通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖。

3　討 論

傳統(tǒng)多糖提取方法存在提取時(shí)間長、提取率偏低的缺陷。孟慶勇等［17］采用熱水浸提法提取GLP，結(jié)果在料液比1∶30、浸提溫度70 ℃的條件下水提10 h，其多糖提取率達(dá)到14.98%。本研究在優(yōu)化的GLP提取工藝條件下，即預(yù)熱溫度93.1 ℃、料液比1∶61.5、超聲時(shí)間35 min，GLP提取率可達(dá)16.75%，說明超聲波處理可有效提高GLP溶出。

隨著人們對(duì)分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)認(rèn)識(shí)的不斷深入，細(xì)胞凋亡在腫瘤發(fā)生中所起的作用日益受到矚目，已成為當(dāng)前腫瘤研究中的熱點(diǎn)。國內(nèi)外眾多研究表明，多糖類化合物具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。如謝好貴等［18］發(fā)現(xiàn)，將紫菜多糖、龍須菜多糖和雞腿菇多糖按一定比例復(fù)合后，該復(fù)合多糖具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，能顯著誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡。景艷等［19］研究發(fā)現(xiàn)，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)（2、4、6 mg/mL）花蛇舌草多糖（PEHD）能夠明顯抑制鼻咽癌CNE2細(xì)胞的增殖，其抑制作用與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。本研究表明，體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞HeLa經(jīng)不同劑量的GLP處理48 h后，倒置光學(xué)顯微鏡下觀察到細(xì)胞凋亡的特征性改變，經(jīng)Annexin V-FITC/PI雙熒光染色后，發(fā)現(xiàn)活細(xì)胞數(shù)量減少，凋亡和壞死細(xì)胞數(shù)量明顯增多，證明了GLP可通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。

然而細(xì)胞凋亡作為細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，是由多基因嚴(yán)格控制的過程，具有極其復(fù)雜的分子生物學(xué)機(jī)制。研究表明，許多活性多糖可通過重建腫瘤細(xì)胞的凋亡信號(hào)傳遞系統(tǒng)，幫助機(jī)體及時(shí)地清除過多受損的細(xì)胞，進(jìn)而達(dá)到抗腫瘤的作用。Kwon等［20］研究發(fā)現(xiàn)一種水溶性海藻多糖可以通過胰島素量受體信號(hào)和PI3K/Akt通路作用，激活胃癌細(xì)胞中caspase-3，降低Bcl-2基因的表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而抑制細(xì)胞增殖，達(dá)到抗腫瘤的目的。此外，還有眾多研究發(fā)現(xiàn)多糖可將腫瘤細(xì)胞周期阻滯于不同時(shí)期，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［21-25］。GLP作為一種天然提取物，其成分復(fù)雜，本研究只是發(fā)現(xiàn)GLP具備誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，對(duì)于其是否通過上述途徑或其他途徑或通道誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，尚待進(jìn)一步深入研究。

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Optimization of Extraction of Polysaccharides from Gracilaria chouae and Their Inhibitory Effects on Tumor Cells

JU Yaoyao， CAO Chunjie， CHEN Meizhen*， YE Tianwen
（College of Science， Shantou University， Shantou 515063， China）

Objective: To optimize the extraction of polysaccharides from Gracilaria chouae （GLP） and to investigate their inhibitory effects on tumor cells. Methods: Response surface methodology was used to optimize the extraction process for GLP. Methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） method was used to determine the effects of GLP on the proliferation of HeLa， EC-109，HepG-2 and MCF-7 cells. Results: The optimal extraction conditions were determined as follows: temperature， 93.1 ℃；material-to-liquid ratio， 1:61.5 （g/mL）； and ultrasonification time， 35 min. Under these conditions， the maximum yield of polysaccharides of 16.75% was obtained. GLP revealed anti-proliferation effect on HeLa， EC-109， HepG-2 and MCF-7 cells in a dose-dependent manner in the range of 200-1 000 μg/mL. When the concentration was up to 1 000 μg/mL， the percentage growth inhibition of the above four cells were 49.11%， 41.18%， 34.98% and 31.33% respectively. With increasing GLP dose over a certain range， the numbers of apoptotic and necrotic cells increased， as revealed by cell morphology observation and Annexin V-FITC/PI fluorescence double staining detection. Conclusions: GLP could induce apoptosis of cancer cells.

Gracilaria chouae polysaccharides （GLP）； extraction； HeLa cell； apoptosis

10.7506/spkx1002-6630-201608010

R931

A

1002-6630（2016）08-0057-06

2015-07-05

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013B0203012005）；2013年汕頭大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心項(xiàng)目（生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心）；2013年廣東省高等學(xué)校教學(xué)質(zhì)量與教學(xué)改革工程本科類立項(xiàng)建設(shè)項(xiàng)目（汕頭大學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心）

鞠瑤瑤（1989—），女，碩士研究生，主要從事生物活性物質(zhì)研究與開發(fā)。E-mail：12yyju@stu.edu.cn

陳美珍（1956—），女，教授，本科，主要從事生物活性物質(zhì)研究與開發(fā)。E-mail：chenmz@stu.edu.cn

引文格式：