李鍵淇，顏 勇，王 闖，齊潔敏

（承德醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河北承德 067000）

胃癌組織整合素α 2β1的表達(dá)和意義

李鍵淇，顏 勇，王 闖，齊潔敏△

（承德醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河北承德 067000）

目的：探討整合素α 2 β 1在胃癌組織中的表達(dá)和意義。方法：采用免疫組化SP法和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測(cè)85例胃癌組織和50例癌旁正常胃組織整合素α 2 β 1蛋白和mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果：胃癌組織整合素α 2 β 1蛋白和mRNA的表達(dá)均明顯高于癌旁正常胃組織（P＜0.05）。胃癌組織整合素α 2 β 1蛋白和mRNA的表達(dá)與患者年齡、性別無(wú)關(guān)（P＞0.05）；與胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)深度有關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論：整合素α 2 β 1與胃癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有望成為胃癌檢測(cè)、評(píng)估惡性程度及預(yù)后的重要指標(biāo)。

胃癌；整合素α 2 β 1；RT-PCR；免疫組織化學(xué)染色

胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居各惡性腫瘤的第二位，死亡率居第三位［1］。胃癌發(fā)病隱匿，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)多數(shù)已經(jīng)浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移［2］。因此，找到一種早期診斷胃癌的指標(biāo)具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞黏附分子在胃癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要作用［3］。整合素α 2 β 1作為細(xì)胞黏附分子的一員，在癌癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著重要角色。目前，整合素α 2 β 1在胃癌中的表達(dá)情況尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用免疫組化SP法和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了胃癌組織整合素α 2 β 1蛋白和mRNA表達(dá)情況。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2012年10月至2014年3月承德市多家醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷確診為胃癌的組織85例，男54例、女31例，患者平均年齡67歲，高-中分化64例、低-未分化21例。以＞癌灶10cm處癌旁正常胃組織50例作為對(duì)照，男32例、女18例，平均年齡62歲。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放、化療，臨床及病例資料完整。

1.2 試劑來(lái)源 兔抗整合素α 2 β 1多克隆IgG抗體，RD有限公司；LSAB免疫組化試劑盒，ZYMED公司。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑盒和Marker，Takara公司；引物由上海Invitrogen公司合成。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 免疫組化染色檢測(cè)整合素α 2 β 1蛋白的表達(dá)：采用免疫組化SP法，一抗?jié)舛?：80，染色程序按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。整合素α 2 β 1陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞漿和（或）細(xì)胞膜，呈黃色顆粒。免疫組化染色結(jié)果采用陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分綜合判定：⑴在×400倍顯微鏡下選取視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞率：1分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%-25%；2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%-50%；3分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%。⑵陽(yáng)性染色強(qiáng)度：0分為陰性，與背景色完全一致；1分為弱陽(yáng)性，呈淡黃色，略深于背景色；3分為強(qiáng)陽(yáng)性染色，呈棕黃色或棕褐色。以⑴+⑵判定最終結(jié)果：0分（-），1-2分（+），3-4分（++），5-6分（+++）。

1.3.2 RT-PCR檢測(cè)整合素α 2 β 1 mRNA的表達(dá)：新鮮組織標(biāo)本于-80℃保存。按照Trizol試劑盒說(shuō)明書(shū)提取組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄及PCR反應(yīng)按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。目的基因?yàn)檎纤卅?2 β 1，以β-actin為內(nèi)對(duì)照。整合素α 2 β 1引物序列：上游：5′-AGATGTTGTGGTTGTGTGTGATGA-3′，下游：5′-CTTTCTGTTGGAATACTAGCGATTG-3′，片段長(zhǎng)度198bp；β-actin引物序列：上游：5′-CCTGTGG CATCCACGAAACT-3′，下游：5′-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3′，片段長(zhǎng)度100bp。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性2min，94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，共30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5min。PCR產(chǎn)物行1.5%瓊脂糖電泳，經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)采集，采用Quantity One 4.6.2 軟件對(duì)顯影條帶進(jìn)行分析，以目的條帶吸光度與β-actin條帶吸光度的比值，作為整合素α 2 β 1 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料的比較采用卡方檢驗(yàn)、計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化染色結(jié)果

2.1.1 整合素α 2 β 1蛋白的表達(dá)情況：胃癌組織整合素α 2 β 1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.1.2 整合素α 2 β 1蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系：胃癌組織整合素α 2 β 1蛋白的表達(dá)與患者年齡、性別無(wú)關(guān)（P＞0.05），與胃癌分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度有關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表1 胃癌組織和癌旁正常組織整合素α 2 β 1蛋白的表達(dá)情況

2.2 RT-PCR結(jié)果

2.2.1 整合素α 2 β 1 mRNA的表達(dá)情況：胃癌組織整合素α 2 β 1 mRNA的表達(dá)量為4.39±1.20，明顯高于癌旁正常組織整合素α 2 β 1 mRNA的表達(dá)量（1.36±0.63，P＜0.05）。

2.2.2 整合素α2β1 mRNA表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系：胃癌組織整合素α2β1 mRNA的表達(dá)與患者年齡、性別無(wú)關(guān)（P＞0.05），與胃癌分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度有關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表3：

表3 整合素α 2 β 1 mRNA表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多步驟、多因素參與的復(fù)雜過(guò)程，其中涉及多種復(fù)雜的機(jī)制和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的變化。在惡性腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，黏附分子表達(dá)的異常扮演了重要角色。整合素是黏附分子家族成員，是由α亞基和β亞基組成的異二聚體，研究發(fā)現(xiàn)，α亞基至少有24種，β亞基至少有9種，共同組成至少25種不同的整合素［4］。整合素α 2 β 1在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在腫瘤組織，整合素通過(guò)介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用，使腫瘤細(xì)胞的黏附特性發(fā)生變化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移［5］。同時(shí)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌［6］、骨肉瘤［7］、軟骨肉瘤［8］、神經(jīng)母細(xì)胞瘤［9］、肝癌［10］等腫瘤組織整合素α 2 β 1均表達(dá)過(guò)量，但未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于胃癌組織整合素α 2 β 1表達(dá)變化的研究。

本研究采用免疫組化SP法和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了85例胃癌組織和50例癌旁正常胃黏膜組織中整合素α 2 β 1蛋白和mRNA的表達(dá)情況，并分析了整合素α 2 β 1表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中整合素α 2 β 1在轉(zhuǎn)錄和翻譯階段的表達(dá)均高于癌旁正常胃黏膜組織，且與胃癌分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)。

綜上所述，整合素α 2 β 1在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，尤其是胃癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要作用。通過(guò)在分子和基因水平研究整合素α 2 β 1在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用并分析其與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，可為胃癌的臨床治療和評(píng)估預(yù)后提供新的理論依據(jù)，但其具體作用機(jī)制，還需進(jìn)一步研究。

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（基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)欄目編輯：陳志宏）

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF INTEGRIN A2B1 IN GRASTIC CARCINOMA

LI Jian-qi， YAN Yong， WANG Chuang， et al
（Department of Pathology， Chengde Medical College， Hebei Chengde 067000， China）

Objective: To investigate the expression and signifi cance of integrin α2β1 in gastric carcinoma. Methods: SP immunohistochemical stain and RT-PCR were used to detect the integrin α2β1 protein and mRNA expression in 85 cases gastric carcinoma and 50 cases adjacent normal gastric mucosa. Results: The integrin α2β1 protein and mRNA expression in gastric carcinoma were all obviously higher than that in normal gastric mucosa （P＜0.05）. In gastric carcinoma， the integrin α2β1 protein and mRNA expression were irrelevant to age and sex （P＞0.05）； but related to differentiated degree， TNM stage， lymph node metastasis and infi ltration depth （P＜0.05）. Conclusions: Integrin α2β1 is closely related to infi ltration and metastasis of gastric carcinoma， so it is expected to be an important indicator for detection， evaluation of malignant degree and prognosis of gastric cancer.

Gastric carcinoma； Integrin α2β1； RT-PCR； Immunohistochemical stain

R735.2

A

1004-6879（2016）02-0104-03

△

（2015-09-25）