王衛(wèi)杰,李　惠,王　樂(lè)，徐　丹

（開(kāi)封市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，河南 開(kāi)封 475000）

飼料添加劑對(duì)幼犬睪丸功能相關(guān)酶活性的影響研究

王衛(wèi)杰*,李惠,王樂(lè)，徐丹

（開(kāi)封市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，河南 開(kāi)封 475000）

觀察飼料添加劑的蓄積對(duì)雄性幼犬生殖發(fā)育的影響。選用12只1月齡土犬，隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，試驗(yàn)組幼犬飼喂正常劑量日糧和高劑量組大鼠鼠肉，正常對(duì)照組幼犬飼喂正常劑量日糧和大鼠鼠肉，喂至幼犬成熟，檢測(cè)雄性幼犬食用飼料添加劑高劑量組大鼠鼠肉后對(duì)其生長(zhǎng)、生殖發(fā)育產(chǎn)生影響。檢測(cè)幼犬睪丸標(biāo)志酶活性，結(jié)果顯示：試驗(yàn)組幼犬睪丸組織中酸性磷酸酶ACP和乳酸脫氫酶LDH的酶活性下降，堿性磷酸酶AKP活性未發(fā)生變化。試驗(yàn)組的酸性磷酸酶和乳酸脫氫酶活性明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。推測(cè)飼料添加劑可能通過(guò)食物鏈的蓄積影響雄性幼犬的睪丸標(biāo)志酶活性，從而影響雄性幼犬睪丸組織的正常生理功能，進(jìn)一步影響幼犬的生殖功能。

飼料添加劑；犬；睪丸標(biāo)志酶；蓄積

近年來(lái)濫用飼料添加劑的危害越來(lái)越受到人們的重視。隨著人民生活水平的提高和經(jīng)濟(jì)全球化，人們對(duì)畜禽產(chǎn)品的品質(zhì)和安全要求越來(lái)越高，高質(zhì)量的畜產(chǎn)品需要有高效安全的飼料作保障，飼料安全已成為動(dòng)物食品安全的重要環(huán)節(jié)和源頭［1］。飼料添加劑的不當(dāng)或超量使用會(huì)對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生危害作用，而其在動(dòng)物產(chǎn)品中的殘留以及蓄積進(jìn)一步對(duì)人的健康和環(huán)境產(chǎn)生不良影響。隨著人民生活水平的不斷提高，人們對(duì)于食品的安全問(wèn)題愈加關(guān)注，尤其是動(dòng)物性食品安全問(wèn)題。動(dòng)物飼料是食品中有毒有害物質(zhì)殘留的一個(gè)重要來(lái)源，飼料添加劑通過(guò)畜禽產(chǎn)品帶給人類(lèi)的隱患將是難以估量的［2-4］。

該試驗(yàn)通過(guò)研究食用飼料添加劑的大鼠鼠肉是否對(duì)雄性幼犬的生殖系統(tǒng)及發(fā)育產(chǎn)生影響，通過(guò)模擬人類(lèi)食物鏈試驗(yàn)，進(jìn)一步為動(dòng)物飼料添加劑的蓄積對(duì)人類(lèi)生殖系統(tǒng)的影響提供初步試驗(yàn)依據(jù)，從而推測(cè)動(dòng)物飼料添加劑對(duì)生殖發(fā)育的影響。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

SD雄性大鼠：河南省試驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)買(mǎi)的26日齡SD雄性大鼠，體質(zhì)量為（85.0±4.5）g。實(shí)驗(yàn)室控制溫度為22～24℃，空氣相對(duì)濕度50%～65%，自然采光，自由飲水，環(huán)境安靜。試驗(yàn)用犬的選擇是3只公犬，10只母犬，均通過(guò)農(nóng)村收購(gòu)，體質(zhì)量為3.5～4.5kg。3只公犬和10只母犬交配，對(duì)照組和試驗(yàn)組均為6只，從交配所生的10窩中選取6窩，每窩選取2只體質(zhì)量相近、發(fā)育良好的幼犬。

1.2飼料添加劑

市售4%仔豬用復(fù)合預(yù)混料配方見(jiàn)表1。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)動(dòng)物均為體質(zhì)量相近，年齡相近的幼犬12只。隨機(jī)分為試驗(yàn)組及對(duì)照組，每組6只，試驗(yàn)組從2月齡開(kāi)始喂養(yǎng)大鼠鼠肉。幼犬每日肉類(lèi)：0.262×57.3%=0.15kg，試驗(yàn)大鼠平均重量300.0g，大約需要0.5只；以后每月增加0.5只；對(duì)照組飼喂正常犬日糧和正常大鼠鼠肉，試驗(yàn)組飼喂高劑量組大鼠鼠肉和正常犬日糧，飼喂期為10個(gè)月。

表1　復(fù)合預(yù)混料配方

1.4飼養(yǎng)管理

所有試驗(yàn)犬全部飼養(yǎng)于同一動(dòng)物舍，單籠飼養(yǎng)，定期沖洗及消毒。預(yù)試期對(duì)試驗(yàn)犬驅(qū)蟲(chóng)、注射疫苗。采用群飼方式，每天上午8時(shí)和下午4時(shí)各飼喂1次。觀察犬的生長(zhǎng)發(fā)育、排便、采食等健康情況，并記錄各組投料量與剩料量，做好數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)工作。

1.4測(cè)定指標(biāo)

1.4.1生長(zhǎng)性能指標(biāo)

體質(zhì)量的稱量：在2月齡開(kāi)始每月第1周周一上午測(cè)量1次，連續(xù)測(cè)11個(gè)月。

1.4.2睪丸組織標(biāo)志酶指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束后取雙側(cè)睪丸，用冰冷的生理鹽水漂洗，制成1%的組織勻漿，酸性磷酸酶ACP、堿性磷酸酶AKP和乳酸脫氫酶LDH的活性測(cè)定操作按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS21.0作方差、x2檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2　結(jié)果與分析

2.1犬體質(zhì)量測(cè)定結(jié)果（見(jiàn)表2）

表2　試驗(yàn)組犬體質(zhì)量變化結(jié)果

由表2可知，試驗(yàn)組幼犬4個(gè)月齡開(kāi)始其體質(zhì)量明顯增加，具有顯著性差異（P＜0.01）；喂養(yǎng)不同天數(shù)后，試驗(yàn)組犬體質(zhì)量與對(duì)照組相比明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.01）。

2.2犬的睪丸組織標(biāo)志酶指標(biāo)結(jié)果

由表3可知，增加食用實(shí)驗(yàn)大鼠鼠肉的劑量，試驗(yàn)組睪丸組織標(biāo)志酶的變化如下：試驗(yàn)組酸性磷酸酶ACP、乳酸脫氫酶LDH活性下降，試驗(yàn)組的堿性磷酸酶AKP活性未發(fā)生明顯變化。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組的ACP、LDH活力明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表3　試驗(yàn)中各組犬的睪丸組織標(biāo)志酶指標(biāo)結(jié)果

3　討論

3.1雄性幼犬食用試驗(yàn)大鼠對(duì)其體質(zhì)量的影響

飼料添加劑引起機(jī)體和器官組織的改變，往往在動(dòng)物體質(zhì)量上反映出來(lái)。因此動(dòng)物體質(zhì)量是機(jī)體改變的重要而敏感的指標(biāo)之一。該試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)初始幼犬體質(zhì)量沒(méi)有出現(xiàn)顯著差異，但試驗(yàn)組雄性幼犬食用大鼠鼠肉后，試驗(yàn)組幼犬體質(zhì)量從4月齡開(kāi)始逐漸增加，試驗(yàn)組體質(zhì)量增加速度相比對(duì)照組較快。這表明飼料添加劑的二次蓄積能夠促進(jìn)雄性幼犬的生長(zhǎng)。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，飼料添加劑的殘留或蓄積通過(guò)食物鏈顯著提高了雄性幼犬的生長(zhǎng)。

3.2雄性幼犬食用試驗(yàn)大鼠對(duì)其睪丸標(biāo)志酶指標(biāo)的影響

雄性生殖細(xì)胞在睪丸組織中的發(fā)育依賴于其生存的穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境、激素以及相關(guān)酶類(lèi)的調(diào)節(jié)。有研究表明，睪丸組織標(biāo)志酶在精子發(fā)生與成熟過(guò)程中起重要作用，比如琥珀酸脫氫酶（SDH）、乳酸脫氫酶（LDH）、酸性磷酸酶（ACP）等。主要分布于生精細(xì)胞的線粒體內(nèi)，是能量代謝的主要參與酶，精子的發(fā)生和成熟與SDH和LDH的活力大小密切相關(guān)［5-7］。

睪丸堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）和乳酸脫氫酶（LDH）是睪丸中的幾種標(biāo)志酶，其活性是睪丸機(jī)能正常與否的標(biāo)志，也是維持精子發(fā)生不可缺少的重要條件。LDH主要存在于生精細(xì)胞胞質(zhì)及精子尾中段線粒體上，催化丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸進(jìn)行無(wú)氧代謝，其活性與精子生成、精子活動(dòng)、獲能及受精有關(guān)。筆者在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)10月齡幼犬睪丸組織中LDH活性下降，說(shuō)明睪丸組織細(xì)胞能量代謝作用受到影響，進(jìn)而影響到精子質(zhì)量；ACP由前列腺分泌，主要分布于睪丸支持細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，它參與精子代謝并有助于精子活力，其活性受雄激素調(diào)控，它在精液中的含量變化能反應(yīng)前列腺的分泌功能并有助于前列腺疾病的診斷。ACP在性激素誘導(dǎo)下參與蛋白質(zhì)的合成，其活性改變與上皮細(xì)胞的變性有關(guān)，可作為是否有生精障礙的指標(biāo)；筆者的結(jié)果同樣顯示，試驗(yàn)組酸性磷酸酶活性隨精子密度及活動(dòng)率減低而下降。

該試驗(yàn)結(jié)果表明，雄性犬增加食用大鼠鼠肉的劑量，實(shí)驗(yàn)組睪丸組織中LDH、ACP活性隨之下降。睪丸LDH參與能量代謝，該酶受到抑制，將阻礙能量的供給，造成精子活動(dòng)度降低，良好精子比例下降。這與該研究關(guān)于飼料添加劑對(duì)犬精子及生殖器官發(fā)育的影響結(jié)果一致［8-9］。

4　結(jié)論

雄性幼犬食用實(shí)驗(yàn)大鼠瘦肉后睪丸組織中乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶活性下降，堿性磷酸酶活性未見(jiàn)明顯變化。說(shuō)明雄性幼犬食用實(shí)驗(yàn)大鼠后可干擾其部分睪丸標(biāo)志酶的正常反應(yīng)，引起生殖系統(tǒng)的損傷。

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