精血補片的質量標準構建和控制

任金燕，朱海燕，王兆龍

（精華制藥集團股份有限公司，江蘇南通226000）

精血補片的質量標準構建和控制

任金燕，朱海燕，王兆龍

（精華制藥集團股份有限公司，江蘇南通226000）

為研究精血補片的質量標準，分別采用顯微鑒別法鑒別制劑中紫河車，薄層色譜法鑒別制劑中南五味子、陳皮、制何首烏、人參和紅參，高效液相色譜法測定制劑中的2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷含量。結果表明：顯微鑒別特征明顯；薄層色譜斑點清晰、分離良好；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷在0.028 24～0.706 00μ g內(nèi)與峰面積有良好的線性關系，R為0.999 9，平均回收率為99.56%，RSD為2.1%（n=9）。所建質量標準能有效控制精血補片的質量。

精血補片；質量標準；顯微鑒別法；薄層色譜法；高效液相色譜法

精血補片由人參、紅參、制何首烏、紫河車、南五味子和陳皮等6味藥材組成，具有補肝腎、益氣血、養(yǎng)心神的功效，用于神經(jīng)衰弱、精神萎靡、頭暈目眩、心悸失眠等治療。為有效控制制劑質量，對該制劑的質量標準進行了研究。

1　實驗部分

1.1儀器與藥品

顯微鏡，美國AO公司顯微鏡；Waters e2695高效液相色譜儀、超聲儀、BP211D十萬分之一電子天平，德國Sartorius公司；玻璃點樣毛細管，華西醫(yī)科大學儀器制造廠；層析缸，上海信宜儀器廠；硅膠G，青島海洋化工有限公司。

南五味子對照藥材（批號為121118-201008）、安五脂素對照品（批號為111844-201102）、陳皮對照藥材（批號為120969-200907）、橙皮苷對照品（批號為110721-201203）、制何首烏藥材（批號為121454-201210）、大黃素對照品（批號為110756-200809）、人參對照藥材（批號為120917-201004）、人參皂苷Rg1對照品（批號為110703-201109）、人參皂苷Re對照品（批號為110754-201204）、人參皂苷Rb1對照品（批號為110704-200916）和2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷（批號為110844-201205），均為中國食品藥品檢定研究院提供，試劑均為分析純或色譜純。

1.2紫河車顯微鑒別

取精血補片置顯微鏡下觀察，顯微特征為：無定形團塊，表面凹凸不平，有的隱約可見卵圓形細胞輪廓。

1.3薄層色譜鑒別

取精血補片10片，研細，加環(huán)己烷30mL，超聲處理30min，過濾，濾液蒸干，殘渣加正己烷1mL溶解，作為供試品溶液，進行薄層色譜鑒別。

2　結果與討論

2.1. 南五味子的TCL鑒別

取精血補片10片，研細，加環(huán)己烷30mL，超聲處理30min，過濾，濾液蒸干，殘渣加正己烷1mL溶解，作為供試品溶液。取無南五味子的處方藥制成陰性供試品溶液，南五味子對照藥材0.2g制成對照藥材溶液，制備工藝同供試品。取安五脂素對照品，加正己烷制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法，吸取上述四種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮（60∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性供試品溶液無干擾，如圖1所示。

圖1　南五味子TLC圖

2.2陳皮TCL鑒別

取精血補片10片，研細，加甲醇20mL，加熱回流20min，過濾，濾液濃縮至約2mL，作為供試品溶液。取無陳皮的處方藥制成陰性供試品溶液，陳皮對照藥材0.3制成對照藥材溶液，制備工藝同供試品。取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開劑，展開，取出，晾干，噴三氯化鋁試液，置紫外燈（365nm）下觀察[1]。供試品色譜中，在對照藥材和對照品位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性供試品溶液無干擾，如圖2所示。

圖2　陳皮TLC圖

2.3制何首烏TCL鑒別

取精血補片10片，研細，加乙酸乙酯20mL，鹽酸0.5mL，超聲20min，過濾，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。取無制何首烏的處方藥制成陰性供試品溶液，制何首烏對照藥材0.2g制成對照藥材溶液，制備工藝同供試品。取大黃素對照品加甲醇制成1mL含1mg的溶液作為對照品溶液。按照薄層色譜法，吸取上述四種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶2∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干[2]。供試品色譜中，在對照藥材和對照品位置上，顯相同顏色的斑點，陰性供試品溶液無干擾，如圖3所示。

圖3　制何首烏TLC圖

2.4人參、紅參TCL鑒別

取精血補片10片，研細，置索氏提取器中，加甲醇100mL，加熱回流提取3h，冷卻，過濾，濾液蒸干，殘渣加水30mL溶解，移至分液漏斗，用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次20mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加水30mL溶解，過濾，濾液通過D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.5cm，柱高12cm），水50mL洗脫，再用40%乙醇30mL洗脫，棄去兩次洗脫液，繼續(xù)用70%乙醇50mL洗脫，收集70%乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5mL溶解，作為供試品溶液。取無人參、紅參的處方藥，按同樣工藝制成陰性供試品溶液[3]。取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rb1對照品各2mg，分別加甲醇2mL溶解，制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法，吸取上述四種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴足量的10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外燈（365nm）下觀察。供試品色譜中，在對照藥材和對照品位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性供試品溶液無干擾，如圖4所示。

圖4　人參、紅參TLC圖

2.5標準曲線繪制

色譜柱：Waters C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（19∶81）；檢測波長：320nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min，理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷計算不得低于5000。

精確稱取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷對照品7mg，置100mL容量瓶中，用稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取精血補片10片，研細，精確稱取1g，，置具塞錐形瓶中，精確加入稀乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理15min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇不足減失的重量，搖勻，上清液用0.45μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

精確量取對照品溶液1、2、5、10mL和15mL，分別置25mL容量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度,搖勻。分別精確吸取上述6種濃度的對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積對濃度C（mg/mL）進行回歸處理，得回歸方程A=5.913×106C-2.308×103（R=0.9999）。結果表明，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷峰在0.02824～0.70600μg內(nèi)與峰面積有良好的線性關系。

精確吸取供試品溶液10μL，重復進樣6次，測定峰面積，其RSD為0.6%。表明儀器精確度良好。

取供試品溶液，分別于0、1、2、3、4h和8h進樣10μL，測定峰面積，其RSD為0.7%。表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

按供試品溶液的制備方法，對同一批樣品（批號：131001）分別制備5份供試品溶液，分別進樣10μL，測定峰面積。表明測定方法重現(xiàn)性良好。

精確稱取已知含量的樣品（批號：151101，含量1.027mg/g）適量，共9份，置具塞錐形瓶中，加入2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷對照品溶液（0.0506mg/mL）10mL，按供試品溶液的制備方法及色譜條件進行測定。結果表明：2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷的回收率95%～103%，加樣回收率良好。

2.6樣品含量測定

取3個批號的樣品各2份，制成供試品溶液，分別精確吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，進樣，測定峰面積，計算2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-O-β-D-葡萄糖苷含量。平均含量分別為0.233、0.241、0.237mg/片（n=2）。

3　結論

實驗比較了超聲提取15、30、45min，結果表明：含量測定數(shù)據(jù)接近，為節(jié)約時間，故確定超聲提取時間為15min。

試驗比較了用超聲、回流、冷浸的提取方法，結果顯示：超聲和回流這兩種提取方法的含量測定數(shù)據(jù)較高，且兩種數(shù)據(jù)較接近，為簡化操作方法，故確定提取方法為超聲提取。

試驗比較了用稀乙醇、乙醇、甲醇作為提取溶劑的方法，結果顯示：用稀乙醇所提取的供試品溶液含量較高，雜質峰較少，故采用稀乙醇作為制備供試品溶液的提取溶劑。

[1]閻雪梅,賈凡.扶腎顆粒質量標準研究[J].天津中醫(yī)藥大學學報,2011,30(4):234-237.

[2]李礪,張偉南,毛福林,等.七寶美髯丸的質量標準提高研究[J].海峽藥學,2014,26(2):72-74.

[3]國家藥典委員會.中國藥典2015版[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:468-469.

Study on Quality Standards of Hematinic Tablets

Ren Jin-yan,Zhu Hai-yan,Wang Zhao-long
(Jinghua Pharmaceutical Group Co. Ltd.,Jiangsu Nantong 226000)

To study the quality standard ofhematinic tablets,the researcher usedmicroscopic observation methodto identifythe Placenta Hominis,TLC method identifiedKadsura longipedunculata,dried tangerine,Radix Polygoni Multiflori,Radix Ginseng and red ginseng,2,3,5,4 '- four hydroxy two styrene-O-β-D-grape glycoside contentin the pillis determined by HPLC. The results showed that the microscopic characteristics was obvious; the TLC spots were clear and separatedwell; 2,3,5,4 '-four hydroxy two styrene-O-β-D-glucoside is 0.028 24～0.706 00μ g,the content and peak area had a good linear relationship whileR is 0.9999,the average recovery rate was 99.56%,RSD was 2.1% (n=9). The quality standard can effectively control the quality of hematinic tablets.

Hematinic tablets; Quality standards; Microscopic identification; TLC; HPLC

R286

A

2096-0387（2016）05-0051-04

任金燕（1983-），女，江蘇如皋人，本科，藥師，研究方向：制劑分析。