王愛平，孫海波

（1遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧大連116600；2遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院）

慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者鼻黏膜組織中YKL-40及TLR4的表達(dá)變化及意義

王愛平1，2，孫海波1，2

（1遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧大連116600；2遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院）

目的 觀察幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1（YKL-40）及Toll樣受體4（TLR4）在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者竇口鼻道復(fù)合體黏膜組織中的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法 留取46例慢性鼻-鼻竇炎伴息肉患者（伴息肉組）和41例不伴息肉患者（不伴息肉組）的竇口鼻道復(fù)合體黏膜標(biāo)本，30例鼻中隔偏曲患者（對照組）的正常鼻黏膜組織標(biāo)本。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、核因子κB（NF-κB）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、環(huán)氧化酶2（COX-2）mRNA表達(dá)，Pearson相關(guān)分析變量間的關(guān)系。結(jié)果 伴息肉組鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-1β、COX-2 mRNA相對表達(dá)量均高于不伴息肉組、對照組（P均＜0.05）；Pearson相關(guān)分析顯示，伴息肉組鼻黏膜組織中YKL-40 mRNA相對表達(dá)量與TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相對表達(dá)量呈正相關(guān)（r分別為0.416、0.364，P均＜0.05）。結(jié)論 慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB呈高表達(dá)，YKL-40、TLR4可能協(xié)同作用參與激活NF-κB信號通路促進(jìn)病情進(jìn)展。

慢性鼻-鼻竇炎；鼻息肉；幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1；Toll樣受體4；核因子κB信號通路

慢性鼻-鼻竇炎發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病程遷延反復(fù)［1］，包括伴鼻息肉和不伴鼻息肉兩種亞型［2］。然而，這兩種亞型的發(fā)生機(jī)制、治療手段及預(yù)后等均存在差異［3］。研究表明，幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1（YKL-40）與炎性疾病的發(fā)生關(guān)系密切［3，4］。Toll樣受體4（TLR4）作為Ⅰ型跨膜糖蛋白受體，可與配體結(jié)合誘導(dǎo)核因子κB（NF-κB）信號通路異?；罨鰪?qiáng)炎癥反應(yīng)［5］。本研究對YKL-40及TLR4在慢性鼻-鼻竇炎患者黏膜組織中表達(dá)變化進(jìn)行分析，探討其在伴鼻息肉患者發(fā)病中的意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料 選取2013年2月～2015年3月在遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院行手術(shù)治療的慢性鼻-鼻竇炎患者87例，均符合慢性鼻-鼻竇炎診療指南［2］，其中男54例、女33例，年齡（45.7±9.2）歲，伴息肉46例（伴息肉組）、不伴息肉41例（不伴息肉組），病程3～14年。排除術(shù)前1個(gè)月接受糖皮質(zhì)激素類藥物、抗菌藥物治療。術(shù)中均留取竇口鼻道復(fù)合體黏膜標(biāo)本。同期，選取單純外傷性鼻中隔偏曲患者30例作為對照組，男21例、女9例，年齡（44.2±8.7）歲，病程2～12 d，均留取正常鼻黏膜組織。三組均排除腫瘤、免疫功能異常、支氣管疾病、肺囊性纖維化以及高血壓、冠心病、糖尿病、高脂血癥等慢性疾病。三組性別、年齡等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、環(huán)氧化酶2（COX-2）mRNA表達(dá)檢測 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法。三組留取的標(biāo)本經(jīng)生理鹽水沖洗，洗凈血液及黏液，保存于-70℃冰箱中備檢。組織經(jīng)研磨后，用細(xì)胞裂解液裂解，利用TRIzol總RNA提取試劑盒（購自美國Invitrogen公司）提取總RNA。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（大連寶生物公司）將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為第一模板鏈cDNA，以cDNA為模板用PCR試劑盒（大連寶生物公司）進(jìn)行檢測。引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司設(shè)計(jì)合成，YKL-40引物序列上游：5′-TGAGGCATCGCAATGTAAG-3′，下游：5′-AAGGGGAAGTAGGATAGGGG-3′；TLR4引物序列上游：5′-TGTCCTCCCACTCCAGGTAAGT-3′，下游：5′-GATTGCTCAGACCTGGCAGTT-3′；NF-κB引物序列上游：5′-TCCAGAAGTATTTCAACCACAG-3′，下游：5′-GCCTTCACATACATAACGGA-3′；IL-1β引物序列上游：5′-ACCTGCTGGTGTGTGACGTT-3′，下游：5′-TCGTTGCTTGGTTCTCCTTG-3′；COX-2引物序列上游：5′-TGCTGTACAAGCAGTGGCAA-3′，下游：5′-GCAGC-CATTTCCTTCTCTCC-3′；GAPDH引物序列上游：5′-CCACCCATGGCAAATTCCATGGCA-3′，下游：5′-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC-3′。PCR反應(yīng)條件：94℃60 s，92℃30 s，56℃30 s，74℃30 s，38個(gè)循環(huán)。每個(gè)標(biāo)品均設(shè)3個(gè)平行反應(yīng)復(fù)孔。利用2-ΔΔCt公式計(jì)算目的基因相對表達(dá)量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；Pearson相關(guān)分析變量間關(guān)系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1三組鼻黏膜組織YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-6、TNF-α mRNA表達(dá)比較 見表1。

表1　三組鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-1β、COX-2 mRNA相對表達(dá)量比較（±s）

表1　三組鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-1β、COX-2 mRNA相對表達(dá)量比較（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與不伴息肉組比較，＃P＜0.05。

組別nYKL-40 mRNATLR4 mRNANF-κB mRNAIL-1βmRNACOX-2 mRNA伴息肉組460.89±0.16*＃0.90±0.17*＃0.84±0.13*＃1.47±0.21*＃1.73±0.15*＃不伴息肉組410.75±0.12*0.65±0.14*0.68±0.11*1.24±0.18*1.38±0.19*對照組300.51±0.110.49±0.120.37±0.161.05±0.131.08±0.11

2.2伴息肉組鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB的關(guān)系 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，伴息肉組鼻黏膜組織YKL-40 mRNA相對表達(dá)量與TLR4、NF-κB mRNA相對表達(dá)量呈正相關(guān)（r分別為0.416、0.364，P均＜0.05）。

3　討論

YKL-40是新近發(fā)現(xiàn)的炎性標(biāo)志物，可由多種細(xì)胞分泌，在調(diào)控先天免疫系統(tǒng)激活中發(fā)揮重要作用［6］。有研究［5］指出，YKL-40在慢性鼻-鼻竇炎患者血漿中表達(dá)升高，且與鼻-鼻竇炎患者亞型有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，慢性鼻-鼻竇炎伴息肉組和不伴息肉組患者鼻黏膜組織YKL-40 mRNA相對表達(dá)量均高于對照組，且伴息肉組高于不伴息肉組（P均＜0.05），說明YKL-40基因在慢性鼻-鼻竇炎患者黏膜組織中呈高表達(dá)，且在伴息肉患者黏膜組織中表達(dá)更為顯著，提示YKL-40可能在慢性鼻-鼻竇炎伴息肉發(fā)病中發(fā)揮重要作用。研究證實(shí)，Th2介導(dǎo)的體液免疫在鼻-鼻竇炎伴息肉發(fā)病中占優(yōu)勢，而不伴息肉者則以Th1為主，YKL-40可能參與了Th2介導(dǎo)的炎性反應(yīng)及組織重構(gòu)［7，8］。本研究證實(shí)，YKL-40在黏膜組織中表達(dá)異?？赡苁菍?dǎo)致慢性鼻-鼻竇炎表型不同的原因。

研究表明，TLR4可誘導(dǎo)NF-κB通路激活，促使下游IL-1β和COX-2等炎性因子表達(dá)而增強(qiáng)炎癥反應(yīng)［9，10］。本研究結(jié)果顯示，在慢性鼻-鼻竇炎患者鼻黏膜組織中TLR4、NF-κB、IL-1β和COX-2表達(dá)升高，且伴息肉患者更顯著，提示TLR4可能通過激活NF-κB信號通路而使下游IL-1β和COX-2炎性因子表達(dá)升高，從而促進(jìn)慢性鼻-鼻竇炎發(fā)生，尤其是在伴息肉患者中作用更為顯著。Pearson相關(guān)分析顯示，慢性鼻-鼻竇炎伴息肉組患者黏膜組織中YKL-40 mRNA表達(dá)量與TLR4 mRNA和NF-κB mRNA表達(dá)量均呈正相關(guān)，進(jìn)一步說明YKL-40和TLR4可能共同作用于NF-κB信號通路而參與慢性鼻-鼻竇炎伴息肉的發(fā)生。

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10.3969／j.issn.1002-266X.2016.21.036

R765.4

B

1002-266X（2016）21-0088-02

孫海波（E-mail：402767260＠qq.com）

（2015-12-07）