王彩霞

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雞新城疫抗體檢測技術(shù)在診斷中的應(yīng)用

王彩霞

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東濰坊 261061）

近幾年在生產(chǎn)實(shí)踐中存在雞非典型新城疫及新城疫強(qiáng)毒株感染的和在免疫過程中的一些問題，是雞群發(fā)生了新城疫的一個(gè)主要原因，如果雞群新城疫抗體水平很低，就會(huì)引起典型的新城疫；如果雞群新城疫抗體水平不均勻，就會(huì)引起非典型的新城疫抗體檢測技術(shù)在診斷中的應(yīng)用，具有診斷和預(yù)防意義.

1 發(fā)病情況

2015年2月，山東濰坊某雞場的雞突然發(fā)病，發(fā)病率90%，死亡1500只左右，主要的臨床癥狀表現(xiàn)為：體溫升高，呼吸困難，下痢，排黃白色、黃綠色甚至綠色稀便；嗉囊積液，倒提病雞從口角流出酸臭液體；有的表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，兩腿麻痹，不能站立。

2 剖檢變化

喉頭、氣管出血，十二指腸、小腸前段及小腸近盲腸基部呈點(diǎn)狀或斑塊狀出血，嚴(yán)重的出現(xiàn)潰瘍，腺胃乳頭、腺胃和肌胃交界處、肌胃角質(zhì)層下出血；盲腸扁桃體出血、腫脹、潰瘍，心冠脂肪及心外膜點(diǎn)狀出血，脾臟腫大有白色壞死點(diǎn)，肝、肺、腎基本正常，無肉眼可見的明顯變化。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 細(xì)菌涂片和分離培養(yǎng) 取病死雞肝臟、脾臟及腦組織分別作組織觸片，美蘭染色和革蘭氏染色鏡檢，沒有發(fā)現(xiàn)任何細(xì)菌；取上述病料分別接種普通瓊脂平板、SS瓊脂平板和血清瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h，結(jié)果無細(xì)菌生長。

3.2 病毒分離 無菌取剛死亡的雞腦及脾臟，減碎、研磨后凍融2次，然后用每ml含青霉素、鏈霉素各1000IU的無菌生理鹽水1:5稀釋，4000r/min離心15min，取上清液，置4℃冰箱作用4~12h，備用[1][2]。（1）雞胚接種：將雙抗處理的病料上清液通過尿囊腔接種30枚11日齡的SPF雞胚，每胚0.2ml，石蠟封孔后繼續(xù)孵化，棄去24h內(nèi)死亡的雞胚，以后每2~4h照蛋一次，并將死亡雞胚置4℃冰箱冷藏備用。（2）病毒的鑒定：①病毒的血凝試驗(yàn)(HA)：取雞胚接種分離的尿囊液作血凝試驗(yàn)，以微量法在血凝板作2-11倍比稀釋，并設(shè)生理鹽水對照孔，然后向每孔加1%雞的紅細(xì)胞，振蕩混勻，20~25℃作用40min后觀察結(jié)果，生理鹽水對照孔的紅細(xì)胞成明顯的鈕扣狀沉到孔底時(shí)判定結(jié)果.病毒若有凝集性，說明導(dǎo)致雞發(fā)病死亡的病原體具有血凝性。②抗NDV陽性血清血凝抑制試驗(yàn)。③討論：結(jié)果中，前4孔仍出現(xiàn)凝集，是由于ND陽性血清效價(jià)較低，而病毒濃度較高，從第5孔開始病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全被ND陽性血清所抑制，從病死雞腦、脾分離到的病毒，具有凝集紅細(xì)胞的特性，并且能被ND陽性血清所抑制，說明分離到的病毒與NDV有很大的相關(guān)性[3]。

附表 抗NDV陽性血清血凝抑制試驗(yàn)(HI) (μl)

孔號123456789101112 生理鹽水252525252525252525252550 尿囊液2525252525252525252525 ND陽性血清252525252525252525252525 1%雞紅細(xì)胞252525252525252525252525 結(jié)果﹢﹢﹢﹢﹣﹣﹣﹣﹣﹣﹣﹣

注：輕叩反應(yīng)板，20-25℃作用不少于30min。20~25℃作用40min后觀察結(jié)果，生理鹽水對照孔的紅細(xì)胞成明顯的鈕扣狀沉到孔底時(shí)判定結(jié)果。﹢凝集，﹣不凝集。

3.3 抗體檢測 到雞場按5%采樣30只，進(jìn)行ND抗體檢測，抗體水平30只雞有27只超過11log2，發(fā)現(xiàn)抗體異常升高，結(jié)合臨床癥狀和剖檢變化，說明可能感染強(qiáng)毒，可診斷該雞群已經(jīng)感染ND強(qiáng)毒。

4 發(fā)生非典型ND的緊急措施

（1）深埋或焚燒病死雞，淘汰病重雞，隔離有癥狀的雞，對病死雞污染的環(huán)境進(jìn)行徹底消毒。（2）對未發(fā)病的雞群進(jìn)行緊急接種 可采用倍量Clone-30疫苗緊急接種，或用倍量IV系疫苗滴鼻點(diǎn)眼，同時(shí)肌肉可皮下注射油乳劑滅活苗，還中口服大劑量(5倍量)V4弱毒疫苗進(jìn)行緊急預(yù)防。一般不宜采用大劑量中等毒力的I系疫苗作緊急預(yù)防，因其接種后易產(chǎn)生較大的應(yīng)激反應(yīng)，影響雞的產(chǎn)蛋率，并且雞群恢復(fù)時(shí)間較長，死亡率相對較高。（3）患病雞不宜進(jìn)行接種，可以使用抗ND卵黃液和抗血清進(jìn)行治療，為防止繼發(fā)感染細(xì)菌病，可在飼料和飲水中適量添加抗菌類藥物。

5 應(yīng)用

無條件開展ND抗體監(jiān)測的雞場，提高免疫接種密度和質(zhì)量，使雞具有穩(wěn)定持久的高滴度的中和抗體和循環(huán)抗體，可選用以下免疫程序：7~10日齡采用NDII系或IV系滴鼻點(diǎn)眼首免，20~25日齡用II系疫苗進(jìn)行第2次滴鼻點(diǎn)眼，同時(shí)皮下或肌肉注射ND油乳劑滅活苗0.3ml/只，60日齡左右進(jìn)行1次弱毒或聯(lián)苗注射，120日齡進(jìn)行油苗或聯(lián)苗注射，種雞在300~350日齡再進(jìn)行1次油苗接種。

5.1 確定雛雞首免日齡 在母源抗體消失或接近消失時(shí)進(jìn)行首免，可獲得理想的免疫效果。一般在雛雞出殼1日齡時(shí)采血，檢查雛雞的HI效價(jià)。在大型高密度雞場抽樣率不低于0.1%，雞群越小，抽樣率應(yīng)隨之增加，理想的抽樣率為2%。求出HI抗體效價(jià)均值，然后將效價(jià)均值帶入公式推算適宜的首免日齡：適宜的首免日齡＝4.5(1日齡HI抗體效價(jià)均值-4)+5。例如某批雛雞1日齡HI抗體效價(jià)均值為6log2，則該批雛雞的首免日齡=4.5(6-4)+5= 14(日齡)。

5.2 首免后定期抽檢，適時(shí)強(qiáng)化免疫 首免后10d采血抽檢，當(dāng)HI抗體效價(jià)均值降至4log2或以下時(shí)進(jìn)行二免。二免后15d再采血抽檢，如抗體效價(jià)在5log2以下時(shí)，應(yīng)進(jìn)行第2次免疫接種。以后，雞的HI效價(jià)應(yīng)保持在5log2以上，同日齡的種雞應(yīng)比其他雞高一個(gè)滴度。如低于此標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)立即進(jìn)行免疫接種，只有HI抗體效價(jià)均值上升2log2以上方可認(rèn)為該次免疫成功，否則應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)免。

[1] 徐為燕. 獸醫(yī)病毒學(xué)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 1993. 219-221.

[2] 陸承平. 獸醫(yī)微生物學(xué)(第3版)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2001-523.

[3] 嚴(yán)維巍, 王永坤, 周繼宏等. 鵝副粘病毒的分類地位初探[J]. 中國獸醫(yī)科技, 2000, 30(12).

（2016–05–19）

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