中西藥治療牛環(huán)形泰勒蟲病的效果觀察

郭慶勇，伊春陽，海尼木古力艾合買提，楊紅霞，謝小婉，巴音查汗*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，新疆烏魯木齊 830052；2.托克遜縣夏鄉(xiāng)畜牧業(yè)服務(wù)中心，新疆吐魯番 830031)

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中西藥治療牛環(huán)形泰勒蟲病的效果觀察

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，新疆烏魯木齊 830052；2.托克遜縣夏鄉(xiāng)畜牧業(yè)服務(wù)中心，新疆吐魯番 830031)

托克遜縣是牛環(huán)形泰勒蟲病的疫區(qū)之一，準(zhǔn)確診斷以及有效治療是防控該病的要點(diǎn)。論文采用流行病學(xué)調(diào)查、實(shí)驗(yàn)室方法檢測(cè)和臨床診斷的方法綜合確診45頭舍飼患牛作為研究對(duì)象。將45頭陽性牛隨機(jī)分為西藥治療組、中藥治療組以及空白組，按1、2、3、4、5 d以及1周，分別對(duì)每組患牛進(jìn)行臨床癥狀觀察、體溫測(cè)定、血涂片觀察、染蟲率統(tǒng)計(jì),評(píng)價(jià)治療效果。結(jié)果表明，托克遜縣夏鄉(xiāng)5個(gè)鎮(zhèn)散養(yǎng)戶的194頭牛血液涂片中62份有環(huán)形泰勒蟲蟲體；PCR檢測(cè)有57份DNA樣品得到與預(yù)期結(jié)果相同的534 bp條帶；臨床診斷有45頭牛表現(xiàn)為牛環(huán)形泰勒蟲病癥狀；西藥治療組治愈率為93.33%(14/15)明顯高于中藥治療組治愈率為73.33%(11/15)。西藥組對(duì)于治療環(huán)形泰勒蟲病具有顯著的效果，可為新疆有效治療環(huán)形泰勒蟲病提供參考。

牛；泰勒蟲??；中藥；西藥；對(duì)比治療

牛環(huán)形泰勒蟲是寄生在單核巨噬系統(tǒng)與紅細(xì)胞中的一種原蟲，蟲體多呈圓形、梨形、逗點(diǎn)形；牛環(huán)形泰勒蟲病的臨床癥狀主要以淋巴結(jié)腫脹、高熱、食欲減退以及貧血為主。本病具有明顯的季節(jié)性和地區(qū)性，春季多發(fā)且發(fā)病率和病死率高。印度畜牧業(yè)每年因該病造成的損失高達(dá)3.843億美元[1]。新疆吐魯番地區(qū)夏季氣溫高達(dá)約35 ℃～45 ℃，地貌復(fù)雜多樣，十分適合璃眼蜱的滋生，從而使得牛環(huán)形泰勒蟲病在該地區(qū)常年廣泛地流行；加之，基層縣、鄉(xiāng)一級(jí)單位缺乏有效防治本病的有效方法，導(dǎo)致了本地區(qū)每年牛環(huán)形泰勒蟲病感染，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前國內(nèi)對(duì)于本病的治療主要以西藥為主，包括黃色素、貝尼爾(血蟲凈、三氮脒)及青蒿琥酯等藥物[2-4]，偶有中藥治療的報(bào)道。但對(duì)其與西藥治療效果對(duì)比的研究很少。國外報(bào)道中常用布帕伐醌加其他輔助治療藥物對(duì)病牛進(jìn)行治療[5-7]。本試驗(yàn)通過流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀以及實(shí)驗(yàn)室診斷等方法對(duì)患牛進(jìn)行綜合診斷，然后經(jīng)中西藥方劑治療并觀察治療效果。有效地控制了疫情，獲得了較好的臨床治療效果，這對(duì)新疆牛環(huán)形泰勒蟲病的綜合防控具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用動(dòng)物 2015年4月12日至2015年6月15日對(duì)吐魯番市托克遜縣夏鄉(xiāng)5個(gè)鎮(zhèn)散養(yǎng)戶的194頭牛進(jìn)行檢測(cè)。了解和收集當(dāng)?shù)孬F醫(yī)站就診的病牛資料并采集疑似病牛的耳緣靜脈血和全血分別進(jìn)行血涂片和PCR檢測(cè)。綜合確診為牛環(huán)形泰勒蟲病的45頭舍飼患牛作為試驗(yàn)對(duì)象。

1.1.2 試劑與儀器 甲醇、姬姆薩染料、二甲苯、香柏油、蒸餾水、全血基因組提取試劑盒、PCR儀、電泳儀及數(shù)碼互動(dòng)顯微鏡等均由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲實(shí)驗(yàn)室提供;貝尼爾(三氮脒、血蟲凈)為河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司產(chǎn)品(1 g/瓶)；50 g/L葡萄糖為甘肅武威新天馬制藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品(25 g/瓶)；9 g/L生理鹽水為陜西圣奧動(dòng)物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；維生素C為河南官渡獸藥制造有限公司產(chǎn)品(1 g/支)；復(fù)合維生素B12為西鄉(xiāng)長江動(dòng)物藥品有限責(zé)任公司產(chǎn)品(0.5 mg/支)；柴胡為山西芮城維爾富獸藥有限公司產(chǎn)品(1 g/支)；PCR診斷性引物由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 綜合診斷法 根據(jù)臨床癥狀診斷 通過觀察牛只精神狀態(tài)、測(cè)量體溫、體表是否有璃眼蜱寄生、淋巴結(jié)是否腫脹以及是否貧血；并通過詢問畜主牛只進(jìn)食情況和是否有發(fā)病史等臨床癥狀綜合診斷。

1.2.2 血涂片檢查診斷 耳緣靜脈無菌采血，滴至載玻片做血液涂片，待自然干燥后滴適量甲醇固定；待其完全晾干后按參考文獻(xiàn)中的方法進(jìn)行染色[10]；染色結(jié)束后，用蒸餾水將血涂片沖洗干凈，自然晾干后滴香柏油并進(jìn)行鏡檢。

1.2.3 PCR診斷 采集牛全血并通過全血基因組提取試劑盒提取DNA；根據(jù)牛環(huán)形泰勒蟲裂殖子的表面抗原(Tams1)基因，設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。上游引物：5′- TTCGTTATCTCATCCGTT-3′；下游引物：5′- ATACTTGGCATTGTTTGG-3′；采用25 μL反應(yīng)體系以全血基因組DNA為模板，反應(yīng)條件為：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s；55 ℃ 1 min；72 ℃ 1 min；30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物用10 g/L瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。綜合以上診斷結(jié)果，確診為牛環(huán)形泰勒蟲病的45頭患牛作為治療對(duì)象。

1.2.4 治療方案 將45頭患牛環(huán)形泰勒蟲病的牛隨機(jī)分為中藥治療組、西藥治療組以及空白組3個(gè)組。按治愈療程分別對(duì)中、西藥治療組以及空白組進(jìn)行為期7、5、5 d的臨床癥狀觀察、體溫測(cè)定、血涂片觀察以及染蟲率統(tǒng)計(jì)。綜合分析以上試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)比中西藥治療效果。

1.2.5 西藥治療組 貝尼爾(血蟲凈、三氮脒)用量為3 mg/kg～5 mg/kg體重，臨用前配成5%～7%溶液，做臀部深層肌肉注射，每天1次，連用3 d；輔助治療采取靜脈注射50 g/L～100 g/L葡萄糖500 mL～1000 mL，100 g/L維生素C 20 mL～40 mL,100 g/L維生素B1210 mL～20 mL,100 g/L柴胡20 mL～40 mL。

1.2.6 中藥治療組 地骨皮40 g,生地50 g,白芍40 g,丹皮40 g,青蒿100 g,黃柏 50 g,木通30 g,龍膽草40 g,大青葉50 g,大黃40 g,知母40 g。將上述藥物粉碎成細(xì)粉混入飼料中，每日1次，連用3劑。

1.2.7 空白組 不采取任何治療措施。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS19.0進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 綜合診斷結(jié)果

對(duì)調(diào)查的194頭牛進(jìn)行臨床癥狀觀察，并將其血液進(jìn)行血涂片觀察以及PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示45份血涂片中含有環(huán)形或戒指狀的環(huán)形泰勒蟲蟲體(圖1)；57份DNA樣品PCR檢測(cè)結(jié)果得到預(yù)期534 bp條帶，與實(shí)際情況相符(圖2)；62頭牛表現(xiàn)出牛環(huán)形泰勒蟲病臨床癥狀：病初臨床癥狀表現(xiàn)為食欲減退，精神不振，喜臥。后期體溫升到39℃～42℃，呈稽留熱，體表淋巴結(jié)腫脹，其中肩前淋巴結(jié)腫脹明顯。重癥患牛初期眼結(jié)膜潮紅，鼻鏡濕潤，偶有白色或透明狀鼻汁流出，肩前淋巴結(jié)腫脹明顯。后期病牛貧血，可視黏膜、肛門周圍、乳房等薄皮膚處黃染或蒼白，食欲廢絕，消瘦。少數(shù)病牛具有異嗜性，流涎，磨牙等特征。

圖1 患牛紅細(xì)胞內(nèi)寄生的環(huán)形泰勒蟲(10×100)

Fig.1Theileriaannulatain bovine erythrocytes

M.DNA標(biāo)準(zhǔn)DL 2 000；1.陰性對(duì)照；2.陽性對(duì)照；3.PCR陽性產(chǎn)物

M.DNA Marker DL 2 000; 1.Negative control; 2.Positive control; 3.PCR positive product

圖2 牛環(huán)形泰勒形蟲PCR擴(kuò)增結(jié)果

Fig.2 PCR amplification results ofTheileriaannulata

2.2 治療結(jié)果

西藥治療組治愈率為93.33%(14/15)；中藥治療組治愈率為73.33%(11/15)；空白組100%(15/15)發(fā)病(表1)。通過比較西藥治療組、中藥治療組以及空白組平均染蟲率變化可以看出，空白組染蟲率及體溫變化均呈上升趨勢(shì)；西藥治療組平均染蟲率以及體溫下降幅度較中藥治療組均明顯(圖3和圖4)。

圖3 不同治療組治療后體溫變化表

Fig.3 Body temperature changes in different groups after treatment

圖4 不同治療組治療后染蟲率變化表

Fig.4 Erythrocyte infection rates in different groups after treatment

3 討論

托克遜縣隸屬于新疆吐魯番地區(qū)，屬典型大陸性暖溫帶荒漠氣候。充足的光照為泰勒蟲病傳播媒介-璃眼蜱的孳生提供了充分條件，使得該病廣泛傳播，繼而給作為當(dāng)?shù)氐谝划a(chǎn)業(yè)的農(nóng)牧業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在試驗(yàn)進(jìn)行中發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)鼗鶎荧F醫(yī)對(duì)于該病存在診斷技術(shù)滯后、治療藥物使用混亂、治療方法不妥當(dāng)?shù)葐栴}。故本試驗(yàn)結(jié)合臨床癥狀、病原檢查和PCR檢測(cè)等三種方法來綜合診斷、確診病例；選用中藥和西藥處方，進(jìn)行對(duì)比治療及其藥效觀察。

在綜合確診為牛環(huán)形泰勒蟲病的前提下，各試驗(yàn)組治療結(jié)果表明，西藥治療組治愈率為93.33%(14/15)顯著高于中藥治療組治愈率73.33%(11/15)；染蟲率及體溫變化的描述性統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，西藥治療組較中藥治療組平均染蟲率、體溫下降幅度均較大，說明西藥組治療效果優(yōu)于中藥組。這可能與中藥見效緩慢且療程較西藥長，而牛環(huán)形泰勒蟲病常呈急性發(fā)病有關(guān)。因此對(duì)于部分急性病例起不到及時(shí)治愈的效果，臨床可針對(duì)慢性病例酌情應(yīng)用該方法治療[11-14]。筆者建議牛環(huán)形泰勒蟲病疫區(qū)的獸醫(yī)人員應(yīng)預(yù)先對(duì)急性、慢性病例進(jìn)行綜合性診斷，在準(zhǔn)確診斷的基礎(chǔ)上針對(duì)急性病例、慢性病例分別進(jìn)行西藥方和中藥方治療，既可以及時(shí)、有效地控制疫情，又能彌補(bǔ)西藥的抗藥性與局限性，緩解西藥的毒副作用。

[1] Minjauw B.The impact of ticks and tick-borne diseases on the livelihood and marginal livestock owners in India and Eastern and Southern Africa[D].Edinburgh:University of Edinburgh, 2003.

[2] 楊茂生, 吳位珩, 廖 梅, 等.牛梨形蟲病的診斷與防治[J].中國獸醫(yī)寄生蟲病, 2008, 16(2):48-49.

[3] 馬建文, 汪萬山.牛泰勒焦蟲病的診斷與治療[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘, 2012, 28(4):153.

[4] 劉宗漢, 李春成, 楊偉松, 等.青蒿酯治療奶牛環(huán)形泰氏焦蟲病的試驗(yàn)[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志, 1990(5):1-2.

[5] Amit K V, Shanker K S.Control and therapeutic management of bovine tropical theileriosis in crossbred cattle[J].J Parasit Dis, 2014(4):57-59.

[6] Qayyum A, Farooq U, Samad H A , et al.Prevalence, clinic other apeutic and prophylactic studies on theileriosis in district Sahiwal (Pakistan)[J].J Animal Plant Sci, 2010, 20(4):266-270.

[7] Vikrant S, Sharma R L, Yadav R, et al.Turning sickness in a riverine buffalo naturally infected with Theileria annulata and its successful therapeutic management[J].Comp Clin Pathol, 2014, 23(1):39-42.

[8] 劉 進(jìn).奶牛場(chǎng)爆發(fā)牛泰勒焦蟲病的診療[J].當(dāng)代畜牧, 2013 (6):24.

[9] 賈建林.中西藥結(jié)合治療牛環(huán)形泰勒氏焦蟲病的體會(huì)[J].新疆畜牧業(yè), 2011(6):38-39.

[10] 高明巧, 喻 冰.介紹改進(jìn)的瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色液[J].錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1991, 12(4):246.

[11] 孫金明.貝尼爾在獸醫(yī)臨床中應(yīng)用的體會(huì)[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問, 2009(7):123.

[12] 王光雷, 金 鑫.牛焦蟲病的防治[J].新疆畜牧業(yè), 2008(6):18.

[13] 房世平.中西結(jié)合治療牛環(huán)形泰勒焦蟲病[J].畜牧獸醫(yī)科技信息, 2006(7):31.

[14] 劉新義, 傅香希, 周桂圓.中西結(jié)合治療牛環(huán)形泰勒蟲病效果報(bào)告[J].湖南畜牧獸醫(yī), 2008(5):17-18.

Therapeutic Observation of Bovine Theileriosis by Western Medicine and Chinese Herb Prescription

GUO Qing-yong1, YI Chun-yang1, HAI Ni-muguliaihemaiti2, YANG Hong-xia1, XIE Xiao-wan1,BA Yin-chahan1

(1.XinjiangAgriculturalUniversity,Xinjiang,Urumchi, 830052,China; 2.AnimalHusbandryServiceCenterofToksunCounty,Turpan,Xinjiang,838100,China)

Bovin theileriosis is a common disease in cattle caused byTheileriaannulata.Appropriate diagnosis and effective treatment are essential in the treatment of this disease.In this study,we tested Chinese herbs (Artemisiacaruifolia) as the alternative treatment for the theileriosis.A total of 194 blood samples from cattle were collected and screened forTheileriaannulatainfection in a high prevalent area of Toksun, Xinjiang, China.Blood smears from 62 of these samples showed circular or ring shaped parasites that indicated the infection ofTheileriaannulata.Fifty-seven of the 62 samples were confirmed asTheileriaannulatainfection by PCR amplification of a 534 bp fragment.Among these PCR positive cattle, 45 with clinical symptoms of theileriosis were selected for treatments.These cattle were randomly divided into three groups, including one group with diminazene aceturate(3 mg/kg-5 mg/kg body weight, intravenous injection), one forArtemisiacaruifolia(one dose per day, per oral) and one group as negative control.Clinical symptoms, body temperature, blood smear and infection rate were recorded for days 1, 2, 3, 4, 5 and 7 post treatment.The results showed that diminazene aceturate treatment cured 93.33% (14/15) cattle, which was significantly higher thanArtemisiacaruifoliagroup that cured 73.33% (11/15) of the cattle (P<0.05 ).The control group had no change in infection.Our study illustrated that western medicine diminazene aceturate is more effective than the Chinese herbArtemisiacaruifoliain the treatment of theileriosis in cattle.

cattle; Theileriosis; Chinese herb; western medicine; contrast treatment

2015-10-09

新疆維吾爾自治區(qū)高?？蒲杏?jì)劃科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目資助(XJEDU2013I18)

郭慶勇，(1973-)，男，山東人，博士研究生，主要從事獸醫(yī)寄生蟲學(xué)研究。*通訊作者

S852.7

B

1007-5038(2016)11-0129-04