殷玉瑾　張聰張　巫凡　王臣

摘要：本研究擬以新城疫疫苗聯(lián)合人工合成的BHP免疫雞。通過(guò)人工合成法氏囊活性六肽，將其作為佐劑添加到新城疫弱毒疫苗中免疫雛雞。本次實(shí)驗(yàn)表明，新城疫疫苗和法氏囊活性六肽（BHP）聯(lián)合使用免疫后，法氏囊指數(shù)與PBS組和疫苗紐相比，差異極顯著（P<0.01）；新城疫疫苗和法氏囊活性六肽聯(lián)合使用免疫后，雞的抗體效價(jià)與PBS對(duì)照組和新城疫疫苗組相比，差異顯著（P<0.05）。本研究為進(jìn)一步研制新型免疫佐劑提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：法氏囊；BHP；脾臟指數(shù)；法氏囊指數(shù)

佐劑是一種特殊的物質(zhì)，當(dāng)在動(dòng)物體內(nèi)注入這種特殊的物質(zhì)就能改變動(dòng)物機(jī)體的免疫反應(yīng)（細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)）的水平和/或類型，能增強(qiáng)抗原的免疫原性但沒(méi)有抗原性。又稱免疫佐劑。當(dāng)前我們可以利用的疫苗種類繁多，但很多疫苗免疫原型弱，誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)程度低，不能對(duì)雞群產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)作用，因此需要研發(fā)合適的佐劑，來(lái)增加疫苗對(duì)雞群的免疫保護(hù)作用。BHP是通過(guò)反相高壓液相色譜柱層析，質(zhì)譜和氨基酸分析等技術(shù)從法氏囊組織液中分離到一種新型的小肽，其氨基酸排列順序?yàn)椋罕彼?甘氨酸-半胱氨酸-半胱氨酸-天冬酰胺-甘氨酸（Ala-Gly-Cys-Cys-Asn-Gly）。BHP的摩爾質(zhì)量為523.152Da，等電點(diǎn)為5.74，電荷為-0.15。本實(shí)驗(yàn)中，將BHP添加到新城疫疫苗中研究其對(duì)新城疫疫苗的免疫增強(qiáng)作用，從而將BHP作為免疫佐劑在臨床上的應(yīng)用提供依據(jù)并且為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料

105只雛雞，購(gòu)于河南省洛陽(yáng)市峪口禽業(yè)有限公司；新城疫弱毒苗，遼寧益康生物制品有限公司；新城標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒F48E9，由本實(shí)驗(yàn)室保存；BHP由上?？齐纳锟萍加邢薰竞铣?。

2.動(dòng)物的分組及免疫

將105只雛雞平均分成三組，即PBS對(duì)照組、新城疫（ND）疫苗對(duì)照組、新城疫（ND）疫苗+六肽（BHP）組，每組35只。在0d時(shí)首免，首次免疫兩周后進(jìn)行二免，所有的雞在第21 d進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)。

3.雛雞法氏囊指數(shù)的測(cè)定

首免后14 d和21 d，分別從三組中隨機(jī)抽取5只，處死并收集其法氏囊，同時(shí)記錄每只雞的體重，及其相應(yīng)的法氏囊的重量，計(jì)算法氏囊指數(shù)。

4.HI抗體效價(jià)的測(cè)定

首免后21d，從三組中，分別隨機(jī)抽取5只雞，進(jìn)行心臟采血。離心5min，離心結(jié)束后收集血清：做好標(biāo)記，在冰箱中保存。然后進(jìn)行微量血凝試驗(yàn)（HA）和微量血凝抑制試驗(yàn)（HI）。

二、結(jié)果與分析

1.法氏囊活性六肽（BHP）對(duì)雛雞法氏囊器官發(fā)育的影響

法氏囊活性六肽與雞新城疫疫苗聯(lián)合使用，能夠促進(jìn)法氏囊的生長(zhǎng)發(fā)育，對(duì)法氏囊的生長(zhǎng)發(fā)育影響較大（如圖1）。

2.法氏囊活性六肽（BHP）對(duì)HI抗體效價(jià)的影響

試驗(yàn)中分別測(cè)定PBS組、疫苗組、疫苗+肽組三組雞共15只雞的血清，各組雞的抗體滴度（如圖2）。結(jié)果表明：新城疫苗與法氏囊活性六肽（BHP）聯(lián)合使用，能夠顯著提高雞的體液免疫水平，提高疫苗的Ⅲ抗體效價(jià)，增強(qiáng)雞群抗感染的能力。

三、討論

許多佐劑都可以添加到疫苗中使用，但是部分佐劑具有副作用，如能引起機(jī)體的局部反應(yīng)或全身不良反應(yīng)，甚至對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒害和損傷作用，在獸醫(yī)臨床中廣泛使用的是油性佐劑，因?yàn)樗哂袩o(wú)副作用和其它不良反應(yīng)，因此，研制新的和最佳的輔助佐劑已成為許多研究者研究的焦點(diǎn)，在許多出版物中已經(jīng)有很多研究者著重對(duì)小分子肽進(jìn)行研究，在本研究中就對(duì)新型免疫增強(qiáng)劑BHP進(jìn)行了初步的研究。本研究表明，法氏囊活性六肽和新城疫疫苗聯(lián)合使用不能促進(jìn)雞脾臟器官的發(fā)育，但能夠促進(jìn)法氏囊的生長(zhǎng)發(fā)育，對(duì)法氏囊的生長(zhǎng)發(fā)育影響較大。新城疫苗與法氏囊活性六肽（BHP）聯(lián)合使用，能夠顯著提高雞的體液免疫水平，提高疫苗的HI抗體效價(jià)，增強(qiáng)雞群抗感染的能力。