藍(lán)花參甲醇提取物保肝作用及化學(xué)成分

周向文， 祁 燕， 譚文紅， 楊竹雅， 周志宏， 馬曉霞*

( 1. 云南中醫(yī)學(xué)院， 中藥學(xué)院， 昆明 650500； 2. 云南中醫(yī)學(xué)院 第一附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，昆明 650021； 3. 云南中醫(yī)學(xué)院， 民族醫(yī)藥學(xué)院， 昆明 650500 )

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藍(lán)花參甲醇提取物保肝作用及化學(xué)成分

周向文1， 祁 燕2， 譚文紅3， 楊竹雅1， 周志宏1， 馬曉霞1*

( 1. 云南中醫(yī)學(xué)院， 中藥學(xué)院， 昆明 650500； 2. 云南中醫(yī)學(xué)院 第一附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，昆明 650021； 3. 云南中醫(yī)學(xué)院， 民族醫(yī)藥學(xué)院， 昆明 650500 )

藍(lán)花參為桔?？扑{(lán)花參屬植物藍(lán)花參的根或全草，具有益氣健脾、祛痰止咳等功效。臨床實(shí)踐中藍(lán)花參被用于肝病治療，效果較好，但目前未見(jiàn)其保肝活性的相關(guān)報(bào)道。該研究采用80%甲醇冷浸提取藍(lán)花參全草，提取液濃縮后經(jīng)冷凍干燥得到藍(lán)花參提取物。對(duì)以刀豆蛋白A造模的急性肝損傷小鼠分別給予聯(lián)苯雙酯及不同劑量的藍(lán)花參提取物灌胃，測(cè)定血清中 ALT/AST 活性，HE 染色觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)的改變。結(jié)果表明：藍(lán)花參提取物可以降低急性肝損傷小鼠血清中 ALT/AST 水平，且對(duì)減輕肝臟病理組織損傷有積極作用。進(jìn)一步利用多種現(xiàn)代色譜學(xué)方法從藍(lán)花參甲醇提取物的水溶性部位分離單體化合物，經(jīng)過(guò)波譜學(xué)分析(MS、1D-NMR、2D-NMR等)并結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)比，鑒定了5個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)。其中化合物1為新化合物，命名為Wahlenoside D。其它4個(gè)已知化合物分別為demethyl syringin (2)、3,5-dihydroxyphenethyl alcohol-3-O-β-D-glucopyranoside (3)、蘆丁 (4)、異牡荊素 (5)，其中化合物3-5為首次從該植物中分離得到。該研究結(jié)果為藍(lán)花參的保肝作用提供了科學(xué)依據(jù)，同時(shí)促進(jìn)了藍(lán)花參藥材資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)與利用。

藍(lán)花參, 甲醇提取物, 急性肝損傷, 保肝活性, 化學(xué)成分, Wahlenoside D

藍(lán)花參為桔梗科(Campanulaceae) 藍(lán)花參屬植物藍(lán)花參(Wahlenbergiamarginata)的根或全草。該屬植物全球約100種，我國(guó)僅有藍(lán)花參1種，在我國(guó)長(zhǎng)江流域以南及西南各地均有分布，包括湖北、湖南、福建、廣西、廣東、云南、貴州、四川等地，其藥用資源十分豐富。藍(lán)花參主要用于治療病后體虛、小兒疳積、支氣管炎、肺虛咳嗽、瘧疾、高血壓等癥(國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì)，1999)。藍(lán)花參主要含有植物甾醇、三萜成分、內(nèi)酯、香豆精、多糖、酚性成分(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物資源開(kāi)發(fā)研究所，1961)。

Ma et al (1997)和Tan et al (1998)從藍(lán)花參中分離得到苯丙素苷類(lèi)化合物demethyl syringin，wahlenbergioside，wahlenosides A, B, C；多炔類(lèi)化合物lobetyolin；紫羅蘭酮類(lèi)似物 6-epimeric roseoside，(±)-3-oxo-a-ionyl-O-β-D-glucopyranoside，blumenol C-O-β-D-glucopyranoside, 3,5,5-trimethyl-4-(2’-β-D-glucopyranosyloxy)ethyl-cyclohexa-2-en-1-one，roseoside等?？蛮i頡(2006)對(duì)藍(lán)花參的揮發(fā)油進(jìn)行分析，分離得到10個(gè)揮發(fā)油成分。葉華等(2012)和張文清等(2012)研究表明，藍(lán)花參具有明顯的抗炎止痛作用和止咳化痰作用。臨床實(shí)踐中，在肝病患者的治療中有使用藍(lán)花參藥材，但未見(jiàn)這方面研究報(bào)道。本研究對(duì)藍(lán)花參抗急性肝損傷的藥理活性進(jìn)行初步研究，并進(jìn)一步研究其化學(xué)成分，以期為藍(lán)花參的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

藍(lán)花參藥材購(gòu)自云南綠生藥業(yè)有限公司，由云南中醫(yī)學(xué)院楊樹(shù)德教授鑒定為桔?？扑{(lán)花參屬植物藍(lán)花參(Wahlenbergiamarginata)的全草，標(biāo)本保存于云南中醫(yī)學(xué)院云南中醫(yī)藥民族醫(yī)藥博物館。

1.1 藥理實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:昆明種小鼠60只，7～8周齡，體重20～22 g，雌雄各半，購(gòu)自昆明醫(yī)科大學(xué)，合格證為SCXK(滇)2011-0004，于SPF級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)2周后使用。溫度( 22±1) ℃、濕度( 55±5 )%、12 h光暗循環(huán)。飼料和水均在消毒后由動(dòng)物自由攝取。所有實(shí)驗(yàn)均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有關(guān)條例進(jìn)行。聯(lián)苯雙酯滴丸購(gòu)自浙江萬(wàn)邦藥業(yè)有限公司；ConA購(gòu)自Sigma公司(St.Louis.MO.USA)；離心機(jī)為德國(guó)Thermo Scientific Heraeus；AU640全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自日本Olympus公司。正置顯微鏡+圖文系統(tǒng)(Leica DM2500)、組織包埋機(jī)(Leica EG1150H+EG1130C)均購(gòu)自德國(guó)萊卡儀器有限公司。

1.2 化學(xué)成分研究材料

柱色譜用Rp-C18材料(Merck公司產(chǎn)品)，MCI-gel CHP-20P(Mitsubishi公司產(chǎn)品)，柱層析用Sephadex LH-20 ( 25～100 μm)(Mitsubishi公司產(chǎn)品)；柱層析硅膠(200～300目)與薄層層析硅膠G板，均為青島海洋化工廠產(chǎn)品；所用試劑若無(wú)特殊說(shuō)明均為工業(yè)級(jí)重蒸溶劑，顯色劑為10%硫酸乙醇溶液或碘蒸氣。

2 研究方法

藍(lán)花參藥材15 kg粉碎后用80%甲醇冷浸提取6次，提取液減壓濃縮至無(wú)醇味后經(jīng)冷凍干燥得到藍(lán)花參甲醇提取物。

2.1 藥理實(shí)驗(yàn)方法

選擇昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，空白組、模型組、聯(lián)苯雙酯滴丸組(陽(yáng)性對(duì)照組)、藍(lán)花參I組(300 mg·kg-1)、藍(lán)花參II組(600 mg·kg-1)，每組10只。空白組和模型組分別給予等體積的0.9%氯化鈉和聯(lián)苯雙酯滴丸(150 mg·kg-1)灌胃，藍(lán)花參組給予相應(yīng)濃度的藥液灌胃，每天1次，連續(xù)6 d，末次給藥后，空白組小鼠尾靜脈注射0.9%氯化鈉0.2 mL，其他各組用0.9%氯化鈉稀釋?zhuān)珻onA按20 mg·kg-1小鼠尾靜脈注射造模，禁食，不禁水，造模8 h后摘眼球采血分離血清，頸椎脫臼處死小鼠。

血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (ALT) 及天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (AST) 測(cè)定：實(shí)驗(yàn)小鼠造模8 h后，采用摘眼球取血，待血液凝固后，置離心機(jī)于4 ℃，5 000 r·min-1，10 min離心后分離血清，用全自動(dòng)化生化分析儀測(cè)定ALT及AST水平。

肝臟病理組織檢測(cè)：取相同部位肝臟，分別浸泡于10%甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋連續(xù)切片，常規(guī)HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟的病理組織學(xué)改變。

2.2 化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法

藍(lán)花參甲醇提取物加水混懸，用氯仿萃取，殘留水部位濃縮后經(jīng)大孔樹(shù)脂柱色譜，依次用純水、100%甲醇洗脫，收集甲醇洗脫物 (500 g)。經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿-甲醇-水(10∶1∶ 0～6∶4∶1)梯度洗脫，收集流份，TCL檢識(shí)后，合并得23個(gè)組分(A-W)。組分I經(jīng)Sephadex LH-20，MCI-gel CHP-20P分離得化合物1 (40 mg)；組分M經(jīng)MCI-gel CHP-20P，Sephadex LH-20，Rp-C18分離得化合物2 (65 mg)；組分O經(jīng)Sephadex LH-20，MCI-gel CHP-20P，Rp-C18分離得化合物3 (55 mg)與化合物4 (23 mg) 。組分T經(jīng)Sephadex LH-20，硅膠柱層析，MCI-gel CHP-20P分離得化合物5 (120 mg)。

3 結(jié)果與分析

3.1 藥理研究

各組小鼠血清ALT和AST水平的比較：模型組小鼠血清ALT和AST水平明顯高于空白組(P<0.01)，說(shuō)明肝損傷模型制備成功。陽(yáng)性藥聯(lián)苯雙酯和藍(lán)花參灌胃干預(yù)后，血清ALT和AST水平顯著低于模型組(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。

藍(lán)花參對(duì)小鼠肝臟病理組織學(xué)的影響：肝臟病理學(xué)研究結(jié)果顯示，空白組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)清晰，肝索圍繞中央靜脈呈放射狀排列， 未見(jiàn)點(diǎn)狀壞死細(xì)胞及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)纖維組織及假小葉形成。模型組肝索細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞，肝細(xì)胞輪廓不清晰，肝細(xì)胞腫脹，可見(jiàn)壞死肝細(xì)胞，細(xì)胞界限不清，脂肪空泡變大。陽(yáng)性藥組肝索結(jié)構(gòu)較模型組完整，肝細(xì)胞輕度腫脹，見(jiàn)少量壞死及炎細(xì)胞，肝血竇結(jié)構(gòu)清晰。藍(lán)花參給藥組肝組織結(jié)構(gòu)基本正常，肝索結(jié)構(gòu)稍清晰，少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)及肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死及灶性壞死程度較模型組減輕。結(jié)果見(jiàn)圖1。

分組GroupnALT(U·L?1)AST(U·L?1)空白Blank10156．30±72．69144．90±30．30模型Model10542．88±114．27346．13±88．95聯(lián)苯雙酯Bifendatatum1047．75±16．65??195．50±30．14??藍(lán)花參300mg·kg?1ExtractofW．marginata10216．63±136．63??257．38±107．60?藍(lán)花參600mg·kg?1ExtractofW．marginata10176．25±83．35??249．00±54．37??

注： *. 與模型組比，P<0.05； **. 與模型組比，P<0.01。

Note: *. Compare with the model set, P<0.05 ; **. Compare with the model set,P<0.01.

3.2 化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1 無(wú)色膠狀物，正離子ESI-MS顯示準(zhǔn)分子離子峰m/z 395 [M+Na]+及其倍峰m/z 767 [2M+Na]+，提示其分子量為372，正離子ESI-HR-MS m/z 395.1314 [M+Na]+(calcd. 395.1313)分析表明分子式為C17H24O9。1H-NMR中顯示兩個(gè)芳?xì)滟|(zhì)子信號(hào)δ：6.50 (1H，brs，H-2)，6.49 (1H，brs，H-6)，提示該化合物為1,3,4,5-四取代苯類(lèi)型。1H-NMR中可以觀察到一個(gè)烯丙基的特征信號(hào)δ：4.52 (1H，d，J = 6.7 Hz，H-γ)，5.85 (1H，m，H-β)，5.25 (1H， d， J = 17.2 Hz，H-α-trans)，5.15 (1H，d，J=10.4 Hz，H-α-cis)和兩個(gè)甲氧基信號(hào)δ：3.82 (3H，s)，3.28 (3H，s)。1H-NMR還顯示了一個(gè)糖基的端基質(zhì)子信號(hào)δ：4.66 (1H，d，J = 7.7 Hz，H-1′)，說(shuō)明化合物1為苷類(lèi)化合物。13C-NMR中δ：139.9 (d, C-β)和116.7 (t, C-α)為末端雙鍵信號(hào)，而85.8處的次甲基信號(hào)較為低場(chǎng)，提示烯丙基有含氧基團(tuán)的取代。碳譜中的四取代芳環(huán)信號(hào)δ：139.7 (s, C-1)，103.4 (d, C-2)， 154.2 (s, C-3)， 134.5 (s, C-4)，151.9 (s, C-5)，109.1 (d, C-6)，一個(gè)葡萄糖基信號(hào)δ：106.8 (d, C-1′)，75.3 (d, C-2′)，78.3 (d, C-3′)，70.8 (d, C-4′)，77.6 (d, C-5′)，62.1 (t, C-6′)及兩個(gè)甲氧基信號(hào)δ 56.7 (q)，56.6 (q)與1H-NMR數(shù)據(jù)特征相符。綜合以上數(shù)據(jù)分析，說(shuō)明化合物1中有一個(gè)烯丙基，一個(gè)葡萄糖基，兩個(gè)甲氧基和一個(gè)羥基，其取代位置由HMBC確定：δH3.28 (3H)與δC85.8 (d)相關(guān)以及δH4.52 (1H)與δC56.6 (q)，δC103.4 (d)，δC109.1 (d)，δC116.7 (t)，δC139.9 (d) 相關(guān)說(shuō)明烯丙基的γ位有甲氧基取代，且苯環(huán)上烯丙基取代基的鄰位均無(wú)取代。甲氧基信號(hào)δH3.82 (3H)與δC154.2 (s)相關(guān)，葡萄糖端基質(zhì)子信號(hào)δH4.66 (1H)與δC134.5相關(guān)，為兩個(gè)基團(tuán)各自相連的芳環(huán)碳信號(hào)。芳基質(zhì)子信號(hào)δH6.50與δC85.8，δC109.1，δC134.5，δC154.2相關(guān)，而δH6.49與δC85.8，δC103.4，δC134.5，δC151.8相關(guān)，說(shuō)明苯環(huán)3位上為甲氧基取代，5位上有游離羥基取代，而4位羥基則與β-葡萄糖成苷。因此，確定該化合物的結(jié)構(gòu)如圖2所示，命名為Wahlenoside D。

圖 1 急性肝損傷小鼠肝臟病理組織圖 (放大倍數(shù)20 ×)Fig. 1 Liver pathology of mice with acute liver injury (Magnification 20 ×)

圖 2 化合物1-5的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig. 2 Structures of compounds 1-5

化合物2 無(wú)色膠狀物，分子式C16H22O9；negative ESI-MS m/z：357 [M-H]-；1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ：6.60 (1H，d，J = 1.8Hz，H-2)，6.58 (1H，d，J = 1.8Hz，H-6)，4.20 (2H，dd，J = 5.6, 1.5 Hz，H-α)，6.23 (1H，dt，J = 15.8, 5.6 Hz，H-β)，6.49 (1H，d，J = 15.8 Hz，H-γ)，3.84 (3H，s，3-OCH3)，4.66 (1H，d，J = 7.6 Hz，H-1′)。13C-NMR (125 MHz，CD3OD) δ：135.8 (C-1)，108.6 (C-2)，154.2 (C-3)，134.8 (C-4)，151.9 (C-5)，106.8 (C-6)，63.6 (C-α)，129.9 (C-β)，131.3 (C-γ)，103.2 (C-1′)，75.3 (C-2′)，78.3 (C-3′)，70.8 (C-4′)，77.6 (C-5′)，62.0 (C-6′)，56.7 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與Tan et al(1998)報(bào)道的化合物demethyl syringin基本一致。

化合物3 無(wú)定型粉末，分子式C14H20O8；positive ESI-MS m/z：339 [M+Na]+；1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ：7.07 (1H，d，J = 1.8Hz，H-2)，6.77(1H，d，J = 1.8Hz，H-6)，6.74 (1H，brs，H-4)，4.74 (1H，d，J = 7.5 Hz，H-1′)，3.70 (2H，t，J = 7.1 Hz，H-8)，2.71 (2H，t，J =7.1Hz，H-7)。13C-NMR (125 MHz，CD3OD) δ：132.1 (C-1)，119.5 (C-2)，146.6 (C-3)，116.9 (C-4)，146.7 (C-5)，125.2 (C-6)，39.5 (C-7)，64.3 (C-8)，104.4 (C-1′)，74.9 (C-2′)，78.3 (C-3′)，71.4 (C-4′)，77.6 (C-5′)，62.5 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與Saracoglu et al(2004)報(bào)道的化合物3,5-dihydroxyphenethyl alcohol 3-O-β-D-glucopyranoside基本一致。

化合物4 黃色針狀結(jié)晶，分子式C27H30O16；positive ESI-MS m/z 633 [M+Na]+；1H-NMR (500 MHz，DMSO-d6) δ：7.51 (1H，dd，J = 8.2, 1.8 Hz，H-6′)，7.50 (1H，brs，H-2′)，6.83 (1H，d，J = 8.2 Hz，H-5′)，6.37 (1H，d，J = 2.0 Hz，H-8)，6.17 (1H，d，J = 2.0 Hz，H-6)，5.33 (1H，d，J = 7.5 Hz，H-1″)，5.11 (1H，d，J = 6.8 Hz，H-1?)，0.98 (3H，d，J = 6.2 Hz，H-6?)。13C-NMR (125 MHz，DMSO-d6) δ：156.6 (C-2)，133.3 (C-3)，177.4 (C-4)，161.2 (C-5)，98.7 (C-6)，164.1 (C-7)，93.6 (C-8)，156.4 (C-9)，104.0 (C-10)，121.6 (C-1′)，115.2 (C-2′)，144.8 (C-3′)，148.4 (C-4′)，116.2 (C-5′)，121.2 (C-6′)，101.2 (C-1″)，74.1 (C-2″，76.4 (C-3″)，70.0 (C-4″)，75.9 (C-5″)，67.0 (C-6″)，100.8 (C-1?)，70.4 (C-2?)，70.5 (C-3?)，71.8 (C-4?)，68.3 (C-5?)，17.7 (C-6?)。以上數(shù)據(jù)與周應(yīng)軍等(2007)報(bào)道的化合物蘆丁基本一致。

化合物5 黃色粉末，分子式C21H20O10；negative ESI-MS m/z：431 [M-H]-；1H-NMR (500 MHz，CD3OD) δ：7.83 (2H，d，J = 8.8 Hz，H-2′，6′)，6.92 (2H，d，J = 8.8 Hz，H-3′，5′)，6.59 (1H，s，H-8)，6.49 (1H，s，H-3)，4.90 (1H，d，overlapped by OH，H-1″)。13C-NMR (125 MHz，CD3OD) δ：166.2 (C-2)，103.9 (C-3)，184.0 (C-4)，158.7 (C-5)，109.2 (C-6)，165.0 (C-7)，95.2 (C-8)，162.8 (C-9)，105.2 (C-10)，123.1 (C-1′)，129.4 (C-2′)，117.0 (C-3′)，162.1 (C-4′)，117.0 (C-5′)，129.4 (C-6′)，80.1 (C-1″)，75.3 (C-2″)，72.5 (C-3″)，71.8 (C-4″)，82.6 (C-5″)，62.9(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與林勵(lì)等(1999)報(bào)道的化合物異牡荊素基本一致。

4 討論

免疫性肝炎是肝纖維化、肝硬化乃至肝臟腫瘤等終末病變發(fā)生發(fā)展的重要因素之一。Con A 是一種常用的肝毒物，能特異性結(jié)合肝細(xì)胞膜，招募并激活大量T淋巴細(xì)胞，促進(jìn)釋放多種細(xì)胞因子，引起免疫性肝損傷(Kaneko et al，2000)。Con A誘導(dǎo)的急性肝損傷模型和人類(lèi)病毒性肝炎、自身免疫性肝炎等的病理特點(diǎn)非常相似，因此常用于這兩類(lèi)肝病的機(jī)制研究和藥物篩選等(邱金鵬等，2014)。血清ALT、AST為氨基酸代謝中的重要酶，存在于肝細(xì)胞內(nèi)。肝細(xì)胞損傷時(shí)，ALT和AST可逸出細(xì)胞外而進(jìn)入血循環(huán)，故血清ALT、AST含量測(cè)定是反映肝損傷的靈敏指標(biāo)(陳衛(wèi)華和郭松超，2007)。本研究給予小鼠尾靜脈注射Con A誘導(dǎo)典型的肝損傷，表現(xiàn)為肝功能指標(biāo)(ALT、AST)異常升高，并伴有明顯的組織病理學(xué)改變。經(jīng)藍(lán)花參干預(yù)后血清ALT和AST水平顯著降低，肝細(xì)胞損傷程度及范圍明顯減輕。提示藍(lán)花參對(duì)Con A誘導(dǎo)的小鼠肝損傷具有顯著的保護(hù)作用，這與臨床上使用藥材藍(lán)花參治療肝病有一定的相符性。我們目前所得到的化合物中，已有較多研究表明黃酮類(lèi)化合物蘆丁有較好的肝損傷保護(hù)作用(郭菁菁和楊秀芬，2008)，而苯丙烯類(lèi)化合物的藥理研究較少。我們將繼續(xù)探索藍(lán)花參對(duì)肝損傷保護(hù)作用機(jī)制，同時(shí)進(jìn)一步分離化合物，以明確藍(lán)花參肝臟保護(hù)作用的有效成分，為其臨床應(yīng)用及開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

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Hepatoprotective activity and chemical constituents of the aqueous methanol extract ofWahlenbergiamarginata

ZHOU Xiang-Wen1, QI Yan2, TAN Wen-Hong3, YANG Zhu-Ya1,ZHOU Zhi-Hong1, MA Xiao-Xia1*

( 1.CollegeofTraditionalChineseMedicine,YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine, Kunming 650500, China;2.CentralLaboratory,No.1AffiliatedHospitalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine, Kunming 650021, China;3.CollegeofEthnopharmacology,YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine, Kunming 650500, China )

Lanhuashenis the roots or herbs ofWahlenbergiamarginata(Campanulaceae). This medicinal plant is useful in clinic for the treatment of heptatis, but there was no report about its hepatoprotective activity. The objective of this study is to explore the active components ofW.marginataand to investigate the effects of its aqueous methanol extract against acute liver injury of mice. The whole plant ofW.marginatawas extracted by aqueous methanol (80%) at room temperature, and the concentrate was freeze-dried to afford a solid extract. An acute liver injury model of mice induced by Concanavalin A was established. The model mice were given bifendatatum and the extract ofW.marginatarespectively. The ALT/AST in blood serum were determined，and the morphology changes of hepatic tissue were observed by HE. The results showed that the extract ofW.marginatareduced the activity of ALT/AST in blood serum of acute liver injury of mice, and relieved the damage of liver pathological tissue. In order to find out the active components, the water-soluble part of the extract was studied primarily, and five compounds were obtained by repeated column chromatography over silica gel, RP-C18, MCI and Sephadex LH-20. Their structures were elucidated on the basis of extensive spectral analysis including 1D and 2D NMR spectrum, as well as comparison with literature data. Compound 1 was elucidated to be a new natural product and named wahlenoside D. The known compounds were identified as demethyl syringin (2), 3,5-dihydroxyphenethyl alcohol 3-O-β-D-glucopyranoside (3)，rutin (4) and isovitexin (5), in which, compounds 3-5 were isolated from this plant for the first time. This work provides a scientific evidence for the hepatoprotective activity ofW.marginata, and the mechanism would be studied further in future.

Wahlenbergiamarginata, aqueous methanol extract, acute liver injury, hepatoprotective activity, chemical constituents, Wahlenoside D

10.11931/guihaia.gxzw201509016

2015-11-27

2016-01-08

國(guó)家自然科學(xué)基金(81260626) [Supported by the National Natural Science Foundation of China (81260626)]。

周向文(1990-)，女，陜西寶雞人，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)，(E-mail)1026600191@qq.com。

*通訊作者： 馬曉霞，博士，助理研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué),(E-mail)13708763980@163.com。

Q946

A

1000-3142(2016)11-1376-06

周向文， 祁燕， 譚文紅， 等. 藍(lán)花參甲醇提取物保肝作用及化學(xué)成分 [J]. 廣西植物， 2016， 36(11):1376-1381

ZHOU XW, QI Y, TAN WH， et al. Hepatoprotective activity and chemical constituents of the aqueous methanol extract ofWahlenbergiamarginata[J]. Guihaia， 2016， 36(11):1376-1381