AEG-1基因在NSCLC中的表達(dá)及其臨床病理意義

高建華 曹 華 李 萱 虞春華 宋曉東

(江西醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，上饒334000)

AEG-1基因在NSCLC中的表達(dá)及其臨床病理意義

高建華 曹 華 李 萱 虞春華 宋曉東

(江西醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，上饒334000)

目的：探討非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中星型膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因1(AEG-1)的表達(dá)及其臨床意義。方法：選取本院心胸外科手術(shù)切除治療的83例NSCLC患者的術(shù)后癌組織標(biāo)本及20例癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行研究，采用免疫組化染色法檢測(cè)兩組AEG-1蛋白的表達(dá)水平，并分析AEG-1蛋白與NSCLC患者的臨床病理學(xué)關(guān)系。結(jié)果：AEG-1 NSCLC組織中的AEG-1 蛋白高表達(dá)46例(55.42%)顯著高于癌旁組織的2例(10.00%)(P<0.05)；NSCLC組織中的AEG-1 蛋白高表達(dá)與患者的T分期、N分期及發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有顯著的相關(guān)性(P<0.05)，與患者年齡、性別、分化程度關(guān)系不顯著(P>0.05)。 AEG-1高表達(dá)NSCLC患者的中位生存時(shí)間15.0個(gè)月顯著低于AEG-1低表達(dá)患者的19.0個(gè)月(log-rankχ2=4.119，P<0.05)。結(jié)論：NSCLC組織中AEG-1基因表達(dá)上調(diào)，并且與患者的臨床分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)。

非小細(xì)胞肺癌；星型膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因1；基因表達(dá)；免疫組化

非小細(xì)胞肺癌(Non-small-cell lung cancer，NSCLC)發(fā)病率約占整體肺癌的80%[1]，已成為最主要的肺癌病理分型，且約60%的NSCLC患者被確診時(shí)，已處于Ⅲ或Ⅳ期[2]，故其患者預(yù)后差、死亡率高。臨床中，治療NSCLC的方式以手術(shù)聯(lián)合放化療及分子靶向療法為主，但患者五年生存率仍≤20%[3]，因此，尋找更高效的新型NSCLC治療方式仍十分必要。目前，研究者致力于探查NSCLC發(fā)病的分子機(jī)制，并發(fā)現(xiàn)新的分子靶點(diǎn)，從而為治療NSCLC創(chuàng)造新方向。文獻(xiàn)稱，星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因1(AEG-1)顯著高表達(dá)于多類組織及臟器腫瘤內(nèi)[4]，其表達(dá)水平和腫瘤生長(zhǎng)、侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，但關(guān)于AEG-1在NSCLC發(fā)展過(guò)程中的具體作用，仍未探查清楚。本文通過(guò)檢測(cè)NSCLC腫瘤組織內(nèi)AEG-1表達(dá)水平，旨在探討其在NSCLC發(fā)病過(guò)程中的作用及其表達(dá)水平對(duì)NSCLC治療的指導(dǎo)作用，現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取本院心胸外科手術(shù)切除治療的83例NSCLC患者的術(shù)后癌組織標(biāo)本及20例癌旁組標(biāo)本進(jìn)行研究。NSCLC患者83例，男54例、女29例，年齡41～78歲，平均(64.9±10.3)歲，分化程度：高分化21例、中分化23例、低分化39例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移29例，吸煙36例，病理類型：鱗癌37例、腺癌43例、其他類型3例。癌旁組織20例，男13例、女7例，年齡43～72歲，平均(62.8±9.7)歲，吸煙9例。兩組患者的年齡、性別及吸煙率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)NSCLC標(biāo)本來(lái)源于本院心胸外科手術(shù)后標(biāo)本并經(jīng)過(guò)病理學(xué)證實(shí)；(2)NSCLC患者術(shù)前未接受放療或者化療[5]；(3)患者的各項(xiàng)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)前接受放化療治療的患者；(2)資料不完整的患者。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色法 取肺癌組織及癌旁組織切片甲醛固定、脫水、石蠟包埋及連續(xù)切片，片厚4 μm，切片65℃下烤2 h ，脫蠟后蒸餾水洗 2次。置于3%H2O2室溫下孵育20 min，蒸餾水洗5 min，PBS 內(nèi)泡5 min。將切片浸于枸櫞酸鹽緩沖液內(nèi)，不銹鋼壓力鍋修復(fù)抗原2～3 min ，PBS洗3次，5 min/次。滴入1∶400稀疏AEG-1兔抗人多克隆抗體(上海信裕生物科技有限公司)一抗，4℃下孵育過(guò)夜；次日PBS洗3次，5 min/次；滴HRP標(biāo)記二抗50 μl，室溫孵育1 h；PBS洗3次，5 min /次，DAB顯色，DAB顯色試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，待5 min后蒸餾水洗滌中止顯色，蘇木素復(fù)染、1%酒精鹽酸分化，自來(lái)水洗滌返藍(lán)，蒸餾水再洗滌，分別行脫水、透明后封片，置于顯微鏡觀察切片染色情況。

1.2.2 免疫組化結(jié)果判斷 免疫組化結(jié)果判定AEG-1蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色顆粒表達(dá)。(1)根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無(wú)色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；(2)根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例<10%為1分、陽(yáng)性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽(yáng)性。(-)為總分<3分，陰性表達(dá)；(+)為3～5分，弱陽(yáng)性表達(dá)；(++)為6～9分，中陽(yáng)性表達(dá)；(+++)為>9分，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。(++)及(+++)為高表達(dá)，(-)及(+)為低表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1 AEG-1基因在NSCLC組織中的表達(dá)情況 AEG-1 NSCLC組織中的AEG-1 蛋白高表達(dá)46例(55.42%)顯著高于癌旁組織的2例(10.00%)(P<0.05)，見表1。免疫組化染色可見NSCLC組織中棕黃色著色強(qiáng)度顯著高于癌旁組織，細(xì)胞質(zhì)中大量黃色、棕黃色顆粒(圖1)。

2.2 AEG-1蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 NSCLC組織中的AEG-1 蛋白高表達(dá)與患者的T分期、N分期及發(fā)送遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有顯著的相關(guān)性(P<0.05)，與患者年齡、性別、分化程度關(guān)系不顯著(P>0.05)，見表2。

2.3 AEG-1蛋白表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系 AEG-1高表達(dá)NSCLC患者的中位生存時(shí)間15.0個(gè)月顯著低于AEG-1低表達(dá)患者的19.0個(gè)月(log-rankχ2=4.119，P<0.05)，見圖2。

表1 AEG-1蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)情況

Tab.1 In NSCLC protein expression of AEG-1

Groupsn-++++++Highlyexpressed(%)NSCLCtissue831126252146(5542)Paracancer20153202(1000)χ213362P<0001

圖1 免疫組化染色結(jié)果(SP×400)Fig.1 Immunohistochemical staining(SP×400)Note:A.NSCLC tissue；B.Adjacent tissues.

表2 AEG-1蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

Tab.2 Relationship between AEG-1 protein expression in NSCLC tissues and clinical pathological characteristics[n(%)]

Clinicopath?ologicalfactorsHighlyexpre?ssed(n=46)Lowexpre?ssed(n=37)χ2PAge(years)02210638<6020(4348)18(4865)≥6026(5652)19(5135)Sex09210337Male32(6957)22(5946)Female14(3043)15(4054)Tstage74320006T1-T216(3478)24(6216)T3-T430(6522)13(3514)Nstage97930002T1-T214(3043)23(6216)T3-T432(6957)14(3784)Differentiation22440134High+moderatelydifferentiated21(4565)23(6216)Lowdegreeofdifferentiation25(5435)14(3784)Distantmetastasis52090022Yes21(4565)8(2162)No25(5435)29(7839)Pathologicaltype02450885Squamouscellcarcinoma21(4565)16(4324)Adenocarcinoma23(5000)20(5405)Othertypes2(435)1(270)

圖2 生存函數(shù)圖Fig.2 Survival function

3 討論

NSCLC具有腫瘤惡性程度高、進(jìn)展速度快和易向遠(yuǎn)處組織器官轉(zhuǎn)移、侵潤(rùn)等特點(diǎn)，因此，其治療難度較高，患者預(yù)后差、病死率高。NSCLC發(fā)病分子機(jī)制較復(fù)雜，但初步研究顯示，人體多種變異基因參與其發(fā)病過(guò)程，并造成腫瘤細(xì)胞無(wú)限制增殖及細(xì)胞凋亡異常，從而促使腫瘤發(fā)展、惡化[6]，因此，研究者認(rèn)為通過(guò)探查NSCLC產(chǎn)生及發(fā)展的分子機(jī)制，以尋找關(guān)鍵靶向基因有效治療該惡性腫瘤。

AEG-1是廣泛表達(dá)于人體內(nèi)的腫瘤促進(jìn)基因之一，其最早在HIV-1感染者血細(xì)胞內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，隨著研究深入，其也被測(cè)定高表達(dá)于腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)的胚胎星形細(xì)胞內(nèi)。AEG-1 基因是一個(gè)遺傳上高度保守的癌基因，位于人類染色體 8q22，全長(zhǎng)包含3 611 bp，由12 個(gè)外顯子和 11 個(gè)內(nèi)含子組成。人AEG-1的啟動(dòng)子(-2710～+49)缺少啟動(dòng)子共同的 TATA 或 CAAT 盒，但有多個(gè)Spl 基序和高含量的GC。AEG-1 啟動(dòng)子有正調(diào)控區(qū)(459～302)和負(fù)調(diào)控區(qū)(-738～-460)。正調(diào)控區(qū) 356～302內(nèi)有結(jié)合激活Ha-ras 轉(zhuǎn)錄因子的位點(diǎn)。該基因均高表達(dá)于乳腺癌、惡性膠質(zhì)瘤及黑色素瘤等腫瘤細(xì)胞內(nèi)[7]，并可和原癌基因H-ras結(jié)合，刺激非致癌永生化黑色素細(xì)胞向惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)變。有文獻(xiàn)稱，AEG-1還可和其上游基因Ha-Ras相互作用，并在其調(diào)控下進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，共同促進(jìn)腫瘤生成及生長(zhǎng)[8]。AEG-1基因常高表達(dá)于乳腺、肝臟、胃、食管等臟器癌癥及神經(jīng)惡性腫瘤、膠質(zhì)惡性腫瘤內(nèi)，并明顯增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移性，而人工干預(yù)方式刺激其表達(dá)降低后，可顯著抑制癌細(xì)胞侵襲性?；谝陨衔墨I(xiàn)，筆者認(rèn)為AEG-1基因可能和NSCLC等肺癌腫瘤的產(chǎn)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移、侵襲具有相關(guān)性。

在本研究中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NSCLC組織中的AEG-1蛋白高表達(dá)水平顯著高于癌旁組織(P<0.05)，這表明AEG-1在NSCLC腫瘤內(nèi)表達(dá)亦處于顯著高表達(dá)水平，可能在一定程度上影響其腫瘤細(xì)胞發(fā)展及侵襲。為進(jìn)一步掌握AEG-1病理性特點(diǎn)，筆者選擇對(duì)NSCLC腫瘤組織及癌旁組織進(jìn)行免疫化染色，結(jié)果顯示腫瘤組織內(nèi)棕黃色著色強(qiáng)度顯著高于癌旁組織，而AEG-1免疫染色結(jié)果呈現(xiàn)黃色、棕黃色大顆粒，這進(jìn)一步證明了AEG-1在NSCLC 組織具有明顯高表達(dá)特異性，因此筆者推斷該基因可作為判斷NSCLC發(fā)病的特異性分子標(biāo)志指標(biāo)。

在臨床中，選擇合適的檢測(cè)指標(biāo)評(píng)估NSCLC腫瘤不同分化程度和臨床分期，對(duì)制訂針對(duì)性治療方案具有十分重要的指導(dǎo)意義，AEG-1表達(dá)水平會(huì)隨臨床分期及腫瘤分化程度發(fā)展而逐漸升高。筆者在本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)NSCLC病情進(jìn)展程度和AEG-1表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析可得，NSCLC組織中的AEG-1蛋白高表達(dá)與癌癥T分期、N分期及發(fā)送遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有顯著的相關(guān)性(P<0.05)，這與他人研究相一致[9]，證明AEG-1高表達(dá)不僅可以促進(jìn)NSCLC產(chǎn)生，而其表達(dá)水平持續(xù)增高也可顯著刺激癌癥發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)AEG-1表達(dá)水平和患者年齡、性別、腫瘤分化和轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。這與前人報(bào)道的AEG-1與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)不盡相同[10]，這可能與肺癌組織樣本量偏小有關(guān)，另一個(gè)可能原因是轉(zhuǎn)移性肺癌多不選擇手術(shù)治療，導(dǎo)致研究對(duì)象中轉(zhuǎn)移性肺癌例數(shù)較少，未能發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

在本研究也發(fā)現(xiàn)部分NSCLC患者的AEG-1蛋白表達(dá)和腫瘤分化和轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性，這可能因?yàn)槠銷SCLC的發(fā)展受到多種基因分子影響，單AEG-1不能完全決定該類癌癥惡化、侵襲及轉(zhuǎn)移走向。但總體而言，高表達(dá)AEG-1在NSCLC產(chǎn)生過(guò)程中可能起著重要的促進(jìn)作用，其參與腫瘤產(chǎn)生及發(fā)展，且表達(dá)水平可以評(píng)估腫瘤T分期、N分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況，因此，AEG-1能夠作為預(yù)防和治療NSCLC新的分子靶向標(biāo)識(shí)之一，從而為研發(fā)基于該基因新型靶向藥物創(chuàng)造理論依據(jù)。

綜上所述， AEG-1基因表達(dá)在NSCLC組織顯著上調(diào)，其表達(dá)水平可影響甚至決定患者臨床分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，但本文未針對(duì)AEG-1進(jìn)行關(guān)于NSCLC治療的研究，因此，AEG-1與NSCLC治療及預(yù)后的相關(guān)性仍需進(jìn)一步研究以完善。

[1] 黃梅香,梁藝華,任寧毅,等.胃泌素釋放肽前體在小細(xì)胞肺癌診斷及治療中應(yīng)用[J].現(xiàn)代儀器與醫(yī)療，2015,21(3):82-84.

[2] Nikpour Mahnaz,Nikpour Modjtaba,Emadi Ute,etal.MTDH/AEG-1 contributes to central features of the neoplastic phenotype in bladder cancer[J].Urologic Oncol,2014,32(5):670-677.

[3] 甘梅富,徐 鋮,張玲娜,等.星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因-1和程序性細(xì)胞死亡因子4表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理學(xué)的關(guān)系[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2015,32(10):2566-2568.

[4] Zheng J,Li C,Wu X,etal.Astrocyte elevated gene-1 (AEG-1) shRNA sensitizes Huaier polysaccharide (HP)-induced anti-metastatic potency via inactivating downstream P13K/Akt pathway as well as augmenting cell-mediated immune response[J].Tumour Biol,2014,35(5):4219-4224.

[5] 李記彬，胡秀芬，劉 放，等.細(xì)胞角蛋白19mRNA檢測(cè)在大腸癌患者外周血轉(zhuǎn)移檢測(cè)中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代儀器與醫(yī)療,2015,21(1):55-56.

[6] 王 冰,田亞平.非小細(xì)胞肺癌患者外周血AEG-1 mRNA的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2014,22(4):823-826.

[7] 黃美金,吳雪銘,王春芳,等.A EG-1基因在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其意義[J].重慶醫(yī)學(xué),2014,43(5):545-547.

[8] Wu F,Guo Li J,Zhang W,etal.Astrocyte elevated gene-1 overexpression in histologically favorable Wilms tumor is related to poor prognosis[J].J Pediat Urol,2014,10(2):317-323.

[9] 王 冰,田亞平.AEG-1表達(dá)下調(diào)對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖和對(duì)順鉑敏感性的影響[J].軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào),2012,33(11):1156-1159.

[10] 劉 言,李雙齊,劉景波.星形細(xì)胞上調(diào)基因-1及Girdin在乳腺癌組織中的表達(dá)[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2015,32(11):2818-2819.

[收稿2016-02-19 修回2016-04-08]

(編輯 張曉舟)

Expression of AEG-1 gene in NSCLC and its clinical significance

GAO Jian-Hua,CAO Hua,LI Xuan,YU Chun-Hua,SONG Xiao-Dong.

Jiangxi Medical College,Shangrao 334000,China

Objective:To investigate the expression of AEG-1 gene in NSCLC and its clinical significance.Methods:Selected our hospital cardiothoracic surgical resection of 83 cases of postoperative cancer tissues of NSCLC patients and 20 paracancer to study，immunohistochemical staining was used to detect the expression level of AEG-1 protein in two groups，the clinical and pathological of AEG-1 protein in patients with NSCLC was analyzed.Results:NSCLC tissues AEG-1 protein expression 46 cases (55.42%) was significantly higher than 2 cases (10.00%) of paracancer (P<0.05).The high expression of AEG-1 protein in NSCLC tissue was significantly correlated with T stage,N stage and distant metastasis (P<0.05),the relationship of AEG-1 between the age,sex,and differentiation degree of the patients was not significant (P>0.05).AEG-1 high expression of NSCLC in patients with a median survival time of 15.0 months was significantly lower than that of 19.0 months (log-rankχ2=4.119P<0.05,) in patients with low expression of AEG-1.Conclusion:AEG-1 gene expression has been up-regulated in NSCLC tissue,which was related to the clinical stage and distant metastasis of the patients.

Non-small cell lung cancer;Star-shaped limb mesenchymal cells up-regulated gene 1；Gene expression;Immunohistochemical analysis

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.12.024

高建華(1978年-)，男，碩士，講師，主要從事生物遺傳學(xué)方面的研究。

R734.2

A

1000-484X(2016)12-1833-04