張麗萍

(張家港市中醫(yī)醫(yī)院藥學部，江蘇 張家港 215600)

?

小檗堿生物黏附緩釋片的制備及體外評價

張麗萍

(張家港市中醫(yī)醫(yī)院藥學部，江蘇 張家港 215600)

目的 測定小檗堿生物黏附緩釋片和大鼠離體胃組織的黏附力，探究其體外釋藥作用，制備小檗堿生物黏附緩釋片。方法 以羥丙基甲基纖維素(HPMC)和卡波姆(carbopol,CP)為生物黏附材料，通過正交試驗對輔料用量進行優(yōu)化。測定生物黏附緩釋片的釋放度，溶出介質(zhì)為人工胃液(pH=1.2)。通過自制黏附力測定裝置測定、比較小檗堿生物黏附緩釋片和鹽酸小檗堿片對大鼠離體胃組織的黏附力。結(jié)果 每片生物黏附緩釋片中974P/971P為1/3，卡波姆用量為20 mg，羥丙基甲基纖維素為15 mg。生物黏附緩釋片的體外釋放達到緩釋制劑要求，與普通片劑相比其對大鼠離體胃組織的黏附力更大。結(jié)論 小檗堿生物黏附緩釋片的處方和工藝能夠達到設計要求。

小檗堿；生物黏附性；緩釋片

小檗堿是一種常見的異喹啉類生物堿，有較強的抗菌和抗感染作用，臨床上主要治療胃腸道感染性疾病[1]。近年來，藥學研究學者發(fā)現(xiàn)了小檗堿在其它方面的藥理作用，如降血脂[2]、抗腫瘤[3]、降血糖、心腦血管系統(tǒng)[4]等。但是，小檗堿生物利用度低、溶解性差、刺激性大、味道苦澀[5]等因素的限制，使其不能得到廣泛應用。

近幾年，有藥學研究者將小檗堿制成小檗堿脂質(zhì)體，采用的方法有薄膜分散法[6]、超臨界CO2技術(shù)[7]和pH梯度法[8]等，但其工業(yè)化生產(chǎn)不易實現(xiàn)。相比普通制劑，胃腸道生物黏附制劑有明顯的優(yōu)勢，其在胃腸道內(nèi)停留時間延長，且能增加藥物與胃腸道黏膜的接觸。所以，胃腸道生物黏附制劑能夠促進藥物在體內(nèi)的吸收，從而提高生物利用度[9-10]。實驗通過生物黏附技術(shù)，制備小檗堿生物黏附緩釋片，并全面考察了對大鼠離體胃組織的黏附力和釋藥行為。

1 材料

1.1 儀器 DP/30 單沖壓片機(北京國藥龍立科技有限公司)，D-800LS智能藥物溶出儀(天津大學無線電廠制造)，T6新世紀-紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)，JA1203N電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司)，DHG-9123A恒溫鼓風干燥箱(上海一恒科技有限公司)，自制的生物黏附力測定裝置。

1.2 藥品與試劑 小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110713-201212)；小檗堿生物黏附緩釋片(自制，批號為 20150305,20150308,20150310)，卡波姆(carbopol,CP、974P、971P)(上海榕柏生物技術(shù)有限公司)，羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯吡咯烷酮K30、硬脂酸鎂、淀粉、乳糖(國藥集團化學試劑有限公司)，濃鹽酸和無水乙醇(分析純)。

2 方法

2.1 小檗堿生物黏附緩釋片的處方 主藥含量確定為60 mg，對處方中主要輔料的用量進行正交優(yōu)化。評價指標為2、8、16、24 h的釋放度，考察因素為卡波姆用量、HPMC用量、卡波姆974P/971P，各因素取3個水平，采用L9(34)進行正交設計試驗。采用正交分析軟件和SPSS16.0統(tǒng)計學軟件，分析試驗結(jié)果。因素水平見表1。

表1 因素水平表

四個點的最佳累計釋放度分別為20%、45%、70%、90%，采用綜合評分法，對其累計釋放度進行評分，將結(jié)果加權(quán)加相后得出評價指標Y。Y值越小，表明緩釋效果越好。將各點的權(quán)重定為1，則Y的計算公式為

Y=|Q2h-20|×100%+|Q8h-45|×100%+|Q16h-70|×100%+|Q24h-90|×100%

式中Q2h、Q8h、Q16h和Q24h分別為生物黏附緩釋片中小檗堿在2、8、16和24 h的釋放度。

2.2 制備方法 按照處方量將主藥和輔料過80目篩，混合均勻后，加入適量的5%聚維酮(PVP)乙醇，制成軟材，過30目篩制粒，在50 ℃下干燥25 min后，過24目篩整粒，加1%硬脂酸鎂，混合均勻后，用沖模為100 mm淺凹沖的單沖壓片機制成約0.2 g的緩釋片。

2.3 釋放度測定方法的建立

2.3.1 波長的選擇 以人工胃液為空白對照，精密稱定小檗堿對照品適量，紫外掃描200～500 nm波長范圍，發(fā)現(xiàn)最大吸收在350 nm處，輔料沒有產(chǎn)生干擾。因此，確定紫外檢測波長為350 nm。

2.3.2 標準曲線的繪制 精密稱定鹽酸小檗堿對照品10.06 mg，置于10 mL容量瓶，加適量甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1.006 g·L-1的母液。精密量取1 mL，置于50 mL容量瓶，加適量人工胃液(pH=1.2的鹽酸溶液)稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為20.12 mg·L-1的溶液。分別精密量取0.5、1、2、3、4、5、6、7 mL置10 mL容量瓶中，加適量人工胃液稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1.01、2.01、4.02、6.04、8.05、10.06、12.07、14.08 mg·L-1的系列對照溶液。以人工胃液為空白對照，按紫外分光光度法于350 nm處測定系列對照品溶液的吸光度。以對照品濃度(mg·L-1)為橫坐標(X)，吸光度為縱坐標(Y)，制作標準曲線，即為Y=0.066 3X+0.000 5，r= 1.000 0；在1.01～14.08 mg·L-1范圍內(nèi)，鹽酸小檗堿濃度與吸光度線性關(guān)系良好。

2.3.3 回收率試驗 分別精密量取濃度20.12 mg·L-1的溶液1、4、7 mL各3份，置于10 mL容量瓶，加入相當于處方中一片主藥量的空白輔料適量，加適量人工胃液溶解并稀釋至刻度，搖勻，以0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，在波長350 nm處測定吸光度，代入標準曲線求得濃度，計算回收率(回收率=測得濃度/己知濃度×100%)，結(jié)果見表2。實驗結(jié)果表明，低、中、高三個濃度的回收率分別為101.33%±2.55%，99.63%±0.69%，99.24%±0.36%，RSD<5%，符合樣品回收率的相關(guān)要求。

表2 小檗堿回收率試驗

2.3.4 精密度和穩(wěn)定性試驗 分別取“2.3.3”項下的低、中、高濃度的供試液，于波長350 nm處測定其吸光度，連續(xù)測定5次，低、中、高濃度的RSD值分別為1.42%、0.63%、0.29%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。分別在時間點0、2、4、8、12、24 h，測定吸光度，實驗結(jié)果表明，樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 釋放度的測定 按照《中國藥典》2010版中 “槳法”測定釋放度，轉(zhuǎn)速為100 r·min-1，溫度為(37±0.5)℃，溶出介質(zhì)為濃度0.1 mol·L-1的鹽酸溶液，體積為900 mL。精密稱定自制的小檗堿生物黏附緩釋片，置于溶出杯，樣品接觸到溶出介質(zhì)時立即計時，至規(guī)定時間(1、2、4、6、8、12、18、24 h)取樣5 mL(每次取樣后補充介質(zhì)5 mL)，0.45 μm微孔濾膜濾過，以溶出介質(zhì)作為空白對照，測定吸光度，計算累計釋放百分率。

2.5 體外組織黏附力的測定 SD大鼠禁食不禁水12 h，腹腔注射10%水合氯醛，解剖取出胃，沿大彎側(cè)剪開，在不破壞胃黏膜的前體下，用 0.1 mol·L-1鹽酸溶液輕輕的將胃壁上的內(nèi)容物沖洗干凈，剪成大小約為1 cm2的小塊，用502膠固定在玻璃片2上。取生物黏附緩釋片和鹽酸小檗堿片，研成細粉，分別用0.1 mol·L-1鹽酸溶液制成10%的混懸液，涂在玻璃片1上，厚度0.1 cm，55 ℃烘干，備用。將涂有藥物的玻璃片1以0.1 mol·L-1鹽酸溶液潤濕，置相對濕度(RH)92.5%的(飽和氯化鈉溶液)密閉容器中，潤濕20 min，將玻璃片1上的藥物覆蓋在玻璃片2上的胃壁上，在玻璃片1上用砝碼均勻施加100 g 壓力，15 min后撤掉外力，分別將1和 2懸掛在鐵架臺，向玻璃片2下塑料袋中加水，用輸液器控制流速為10 mL·min-1，至藥物與胃黏膜分離為止，分別稱取玻璃片2、塑料袋和水的重量，平行測定3次，取平均值，即黏附力的大小。裝置見圖1。

圖1 體外組織黏附力測定裝置示意圖

3 結(jié)果

3.1 處方篩選結(jié)果 對小檗堿生物黏附緩釋片進行處方篩選，結(jié)果表明，各個因素對體外釋放度影響的強弱順序為：B>C>A，優(yōu)化的最佳處方為A3B1C2，即每片中含CD20 mg、HPMC15 mg 、974P/971P為1∶3。結(jié)果見表3、表4。

表4 正交設計各處方釋放度方差分析表

3.2 優(yōu)化處方的驗證 處方優(yōu)化后，制成的小檗堿生物黏附緩釋片外觀圓整、硬度均一，且片重差異達到緩釋片要求。為進一步驗證與預期的差別程度，測定處方優(yōu)化后三批生物黏附緩釋片的體外黏附力、釋放度，釋放度的測定結(jié)果見表5和圖2，黏附力的測定結(jié)果見表6。

驗證結(jié)果說明，處方優(yōu)化后生物黏附緩釋片的緩釋效果和黏附力相近，其質(zhì)量穩(wěn)定，能夠達到預期效果。

表3 處方篩選正交試驗結(jié)果

表5 釋放度測定結(jié)果/%

圖2 生物黏附緩釋片與鹽酸小檗堿片的釋藥曲線圖

實驗樣品實驗次數(shù)123平均值RSD/%鹽酸小檗堿片8.509.307.908.578.20黏附片2015030535.3029.5033.4032.73a9.03黏附片2015030834.6028.9030.4031.30a9.44黏附片2015031036.7029.3032.5032.83a11.30

注：與鹽酸小檗堿片比較,aP<0.01。

4 討論

Carbopol和HPMC是生物黏附性能較好的高分子材料，也是緩釋制劑常用的骨架材料。胃腸道的蠕動對藥物有推動作用，縮短其在胃腸道的停留時間，而胃腸道組織與這兩種高分子材料間的黏附力能夠減少這種作用，增加藥物的滯留時間，使其更充分地釋放，最終提高生物利用度。

按照24 h緩釋片要求，本實驗選擇2、8、16、24 h的釋放度標準為20%、45%、70%、90%。自制小檗堿生物黏附緩釋片的釋放度與標準的相似因子(f2)為72，在50～100范圍內(nèi)，表明處方和工藝基本能夠達到緩釋制劑釋放度的標準。

實驗通過自制的黏附力測定裝置，測定小檗堿生物黏附緩釋片對大鼠離體胃組織的黏附力，方法不僅簡單，而且易于操作。結(jié)果表明，自制的小檗堿生物黏附緩釋片對大鼠離體胃組織有較強黏附力，說明可將Carbopol和HPMC作為生物黏附材料。

[1] 劉仁紅，肖毅，陳虹余，等.鹽酸小檗堿灌腸治療小兒細菌性腸炎的臨床應用[J].西部醫(yī)學，2014，26(12)：1635-1640.

[2] 沈?qū)帲畈誓?，環(huán)奕，等.小檗堿調(diào)節(jié)血糖血脂代謝紊亂機制研究進展[J].藥學學報，2010， 45(6)：699-704.

[3] 張娟.小檗堿抗腫瘤作用機制的研究進展[J].醫(yī)學綜述，2014，20(4)：634-637.

[4] 吳林根.黃連素干預對代謝綜合征及心腦血管疾病影響[J].心臟雜志，2015，27(3)：348-352.

[5] 陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學[M].17版,北京:人民衛(wèi)生出版社，2011:113.

[6] 金青，趙文英，張國雨，等.注射用鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備[J].醫(yī)藥導報，2011，30(3)：353-355.

[7] 程泓波，劉為為，張少華，等.超臨界CO2微乳法制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體工藝的考察與優(yōu)化[J].安徽醫(yī)藥，2015，19(1)：18-22.

[8] 牟琳琳，徐洋，蔣宮平，等.改良pH梯度法制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體[J].中國藥學雜志，2013，48(1)：49-53.

[9] 陳思，丁平田.生物黏附制劑的研究進展[J].沈陽藥科大學學報，2012，29(2)：165-170.

[10] 孫有麗，馬晉隆，倪睿，等.生物黏附藥物傳遞系統(tǒng)的評價方法與應用[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2015，46(6)：631-638.

Preparation of berberine bioadhesive sustained release tablets and the valuation in vitro

ZHANG Liping

(PharmacyDepartment,ZhangjiagangHospitalofTraditionalChineseMedicine，Zhangjiagang，Jiangsu215600，China)

Objective To prepare berberine bioadhesive sustained-release tablets,to study its release in vitro and to measure its adhesion with gastric tissue of rats.Methods HPMC and carbopol were used as the bioadhesive material of bioadhesive sustained release tablets,and dosage of excipients had gone through orthogonal design optimization in formulation.Release rate of bioadhesive sustained release tablets was measured with artificial gastric juice(pH =1.2)as the dissolution medium.Homemade adhesion measuring instrument was used in measuring and comparing the adhesion to rat gastric tissue between that of berberine bioadhesive sustained release tablets and of berberine hydrochloride tablets.Results In each piece of bioadhesive sustained release tablet 974P/971P was 1/3,the amount of carbopol was 20 mg,and HPMC was 15 mg.Release in vitro of bioadhesive release tablets was in line with sustained-release formulation of claim,and the rat gastric tissue adhesion was significantly greater than the conventional tablets.Conclusion Prescription and process of berberine bioadhesive sustained release tablets can meet the design requirements.

berberine；bioadhesive；sustained release tablets

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.11.007

2016-05-12，

2016-08-07)