• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    白念珠菌與生物膜相關(guān)的耐藥機(jī)制

    2017-01-22 15:10:42孟玲寧劉錦燕李文靜趙悅項(xiàng)明潔
    中國真菌學(xué)雜志 2017年2期
    關(guān)鍵詞:外排氟康唑葡聚糖

    孟玲寧 劉錦燕 李文靜 趙悅 項(xiàng)明潔

    (1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院檢驗(yàn)科,上海 200025;2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院放免檢驗(yàn)科,上海 200020)

    ·綜述·

    白念珠菌與生物膜相關(guān)的耐藥機(jī)制

    孟玲寧1,2劉錦燕2李文靜1,2趙悅1,2項(xiàng)明潔1,2

    (1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院檢驗(yàn)科,上海 200025;2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院放免檢驗(yàn)科,上海 200020)

    白念珠菌在醫(yī)療植入材料上形成生物膜,導(dǎo)致高死亡率感染。成熟的生物膜具有強(qiáng)耐藥性,使得生物膜相關(guān)感染難以治愈。文章主要從白念珠菌生物膜外排泵基因、細(xì)胞外基質(zhì)以及壓力應(yīng)答等3個(gè)方面探討白念珠菌生物膜的耐藥機(jī)制,綜述該研究方向的最新進(jìn)展,為白念珠菌的臨床防治策略制定提供參考。

    白念珠菌;生物膜;耐藥機(jī)制;細(xì)胞外基質(zhì)

    白念珠菌是最常見的院內(nèi)條件致病菌且經(jīng)常導(dǎo)致血液感染,侵襲性念珠菌病最常見的危險(xiǎn)因素是醫(yī)用材料的植入[1]。常用于白念珠菌的抗真菌藥物有唑類、多烯類、嘧啶類和棘白菌素類。近年來,臨床抗真菌治療失敗的病例屢見不鮮,究其原因主要是白念珠菌對藥物的耐藥率增多和耐藥性增強(qiáng)。

    有研究發(fā)現(xiàn),能夠形成生物膜的白念珠菌,可以更有效地抵御抗真菌藥物,使治療更加困難。生物膜是由包裹在細(xì)胞外基質(zhì)中的真菌細(xì)胞和假菌絲黏附于載體或者有機(jī)體表面而構(gòu)成的立體結(jié)構(gòu),其作為一種屏障,可以避免內(nèi)部菌落受到免疫系統(tǒng)的攻擊,躲避抗真菌藥物的殺傷作用,導(dǎo)致真菌耐藥性的產(chǎn)生[2]?,F(xiàn)就白念珠菌的生物膜對抗真菌藥物的耐藥機(jī)制作簡單歸納。

    1 外排泵基因

    臨床發(fā)現(xiàn)的唑類耐藥分離株常常高表達(dá)相關(guān)外排泵基因CDR1、CDR2、MDR1,所以早期時(shí)研究者推測生物膜耐藥表型是否也和外排泵活性增強(qiáng)有關(guān)。Mukherjee等[3]將早期、中期和成熟生物膜的耐藥性進(jìn)行了對比,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),和親本菌株相比,敲除了外排泵基因的突變株在成熟生物膜存在的情況下對于氟康唑的敏感性沒有明顯的變化,但在早期生物膜存在的情況下藥物敏感性明顯增強(qiáng)。劉東妹等[4]研究了在白念珠菌生物膜形成的不同時(shí)期,鋅族轉(zhuǎn)錄因子TAC1以及外排泵基因MDR1、CDR1、CDR2與白念珠菌生物膜耐藥的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)TAC1和外排泵基因可能在白念珠菌生物膜形成的早中期對氟康唑的耐藥發(fā)揮了一定作用。近年來發(fā)現(xiàn)FLU1基因編碼的外排泵與人富組蛋白 (Hst5)的外排有關(guān),Hst5是對白念珠菌有毒性作用的抗菌肽,最新研究發(fā)現(xiàn),flu△/△突變株在Hst5存在的情況下生物膜的生成量明顯減少,從而對藥物的敏感性增加,但其中的機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究[5]。

    2 環(huán)境壓力

    在白念珠菌黏附以及生物膜生長的過程中激活了一些應(yīng)激反應(yīng),從而提高了真菌的耐藥性。最早研究的是應(yīng)對細(xì)胞壁壓力而激活的信號轉(zhuǎn)化通路MAPK。實(shí)驗(yàn)表明黏蛋白Msb2可以調(diào)控Cek1 MAPK通路,msb2△/△菌株能夠形成正常的菌絲但是卻有生物膜缺陷[6]。章珍珍等[7]發(fā)現(xiàn)Ras1是MAPK通路中重要的結(jié)合蛋白,RAS1基因缺陷株形成菌絲的能力下降,從而影響了生物膜群體的發(fā)展。隨后的研究關(guān)注了細(xì)胞壓力調(diào)節(jié)通路對生物膜耐藥的影響,鈣調(diào)磷酸酶屬于Ca2+-鈣調(diào)蛋白活化蛋白磷酸酶,有研究發(fā)現(xiàn),環(huán)孢霉素A作為鈣調(diào)磷酸酶的抑制劑,作用于含有生物膜的白念珠菌后,可以提高菌株對氟康唑的敏感性,由此可以猜測鈣調(diào)磷酸酶在生物膜耐藥的過程中發(fā)揮了一定作用[8]。白念珠菌壓力應(yīng)答通路中的成分熱休克蛋白90 (Hsp90),被認(rèn)為是生物膜分散和耐藥的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。Robbins等[9]通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)無論是體外還是動(dòng)物模型中,通過基因或者藥理水平破壞Hsp90的功能都能使生物膜由氟康唑耐藥轉(zhuǎn)變?yōu)槊舾校荋sp90功能破壞后只是在很小的程度上影響生物膜的成熟,并不會(huì)破壞生物膜的形成。此外,Hsp90基因敲除會(huì)減少細(xì)胞外基質(zhì)中葡聚糖的生成,主要通過影響β-1,3-葡聚糖合酶Fks1來調(diào)節(jié)葡聚糖的水平。Hsp90可以選擇性地影響Zap1或者它下游的Gca1和Gca2從而調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的生成。

    3 細(xì)胞外基質(zhì)

    生物膜內(nèi)的細(xì)胞被包裹在自身產(chǎn)生的細(xì)胞外基質(zhì)中,這是和浮游細(xì)胞的主要區(qū)別。細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分是碳水化合物、蛋白質(zhì)和核酸[10]。雖然細(xì)胞外基質(zhì)的作用還沒有研究透徹,但先前的研究表明它在維持細(xì)胞環(huán)境穩(wěn)態(tài)、防止生物膜分散以及逃避抗真菌藥物等方面發(fā)揮了一定作用[11]。

    有研究表明,細(xì)胞外DNA (eDNA)是細(xì)胞外基質(zhì)中的一個(gè)重要組成部分,且隨著時(shí)間總量在增加,使用脫氧核糖核酸酶I (DNAse)治療后,生物膜總量隨著時(shí)間在下降[12]。中性粒細(xì)胞針對浮游的白念珠菌可以分泌一些毒性物質(zhì)NETs,如DNA、組蛋白來阻止白念珠菌的生長與擴(kuò)散,Joohnson等[13]研究表明生物膜可以很大程度上抑制NETs的釋放從而導(dǎo)致耐藥,通過構(gòu)建老鼠導(dǎo)管模型,發(fā)現(xiàn)編碼細(xì)胞外基質(zhì)甘露聚糖的基因PMR1的敲除可以引起NETs的大量釋放,所以能夠推測白念珠菌的生物膜可以通過細(xì)胞外基質(zhì)抑制中性粒細(xì)胞釋放毒性物質(zhì),從而介導(dǎo)多重耐藥。

    Nett等[14]研究表明,β-1,3-葡聚糖不僅存在于細(xì)胞壁中,也存在于細(xì)胞外基質(zhì)中,同時(shí)總量會(huì)隨著生物膜的成熟而增多。β-1,3-葡聚糖可以和氟康唑結(jié)合,從而阻止藥物作用于生物膜相關(guān)的細(xì)胞。Nett等發(fā)現(xiàn)1 000 μg/mL氟康唑和1.25 U/mL溶細(xì)胞酶 (一種葡聚糖酶)混合作用于白念珠菌后可以降低生物膜的生存能力,而兩者單獨(dú)作用卻沒有這種效果。之后發(fā)現(xiàn)β-1,3-葡聚糖也可以和兩性霉素B特異性結(jié)合而產(chǎn)生耐藥。基于這些發(fā)現(xiàn),此過程中的相關(guān)基因也受到了關(guān)注。首先是編碼β-1,3-葡聚糖合酶的基因FKS1,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),F(xiàn)KS1基因的雜合缺失突變株中β-1,3-葡聚糖的含量減少了30%,在經(jīng)過250 μg/mL的氟康唑治療48 h后,生物膜內(nèi)細(xì)胞的生存能力下降了80%,而在浮游細(xì)胞中觀察不到相關(guān)現(xiàn)象。Nett等[15]對FKS1基因進(jìn)行調(diào)節(jié),發(fā)現(xiàn)不論是抑制表達(dá)還是過度表達(dá),都會(huì)影響生物膜對兩性霉素B、棘白霉素和氟胞嘧啶的藥物敏感性,聯(lián)系之前FKS1基因與氟康唑的耐藥關(guān)系,推測生物膜細(xì)胞中FKS1基因?qū)τ诟黝惪拐婢愃幬锏淖饔脵C(jī)制是相同的,且此耐藥機(jī)制可能是生物膜所特有的,因?yàn)槠茐母∮渭?xì)胞的FKS1基因?qū)δ退帥]有任何影響。此外,控制細(xì)胞壁葡聚糖含量的PKC通路中的兩個(gè)相關(guān)基因SMI1和RLM1,也被證實(shí)與細(xì)胞外基質(zhì)中葡聚糖的含量有關(guān),Smi1p調(diào)節(jié)FKS1的表達(dá)很可能是通過上游的轉(zhuǎn)錄因子Rlm1p[16]。Taff等[17]發(fā)現(xiàn)存在于細(xì)胞外基質(zhì)中的兩種葡聚糖轉(zhuǎn)移酶 (分別為BGL2和PHR1基因編碼)以及一種外切葡聚糖酶 (為XOG1基因編碼)對于傳遞β-1,3-葡聚糖至基質(zhì)中以及在基質(zhì)中的聚集非常重要,缺少這些基因的生物膜相關(guān)突變株對于氟康唑的敏感性明顯增加,而類似的現(xiàn)象卻沒有在浮游細(xì)胞中發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)觀察到,bgl2△/△、xog1△/△、phr1△/△缺陷株和對照株相比,阻止放射性氟康唑進(jìn)入的能力明顯下降,這之中phr1△/△缺陷株對于氟康唑的藥物敏感性增加最為明顯 (近4倍增加),這些缺陷株出現(xiàn)不同藥物敏感性的原因還不是很清楚,仍需要進(jìn)一步的研究。最新的研究表明,細(xì)胞外基質(zhì)中的β-1,3-葡聚糖除了可以調(diào)控白念珠菌的耐藥,還可以在大腸桿菌/白念珠菌聯(lián)合的生物膜中使得大腸桿菌對于氧氟沙星的耐藥性大幅度增加,而其中具體的機(jī)制還在研究中[18]。

    4 其他機(jī)制

    最新研究表明,凝集素樣序列 (agglutinin-like sequence ALS)基因家族在生物膜早期形成和黏附中發(fā)揮重要作用,其中ALS1、ALS3基因的過表達(dá)可以使白念珠菌對氟康唑耐藥性增加,但具體的機(jī)制仍需進(jìn)一步研究[19]。Truong等[1]發(fā)現(xiàn)AHP1基因可以通過持續(xù)性的抗氧化作用來介導(dǎo)白念珠菌對兩性霉素B的耐藥,在二倍體的白念珠菌菌株中敲除AHP1基因后可以增加其對兩性霉素B的藥物敏感性。Mathe等[20]在研究中發(fā)現(xiàn),白念珠菌在游離階段對標(biāo)準(zhǔn)劑量藥物反應(yīng)敏感,但在附著和生物膜形成階段對藥物敏感性降低,在生物膜形成后,用PCR檢測超氧化物歧化酶1 (SOD1)和過氧化氫酶1 (CAT1)的表達(dá)量都較之前增高,所以推測生物膜的耐藥性與高抗氧化能力有關(guān)。Nobile等[21]現(xiàn)組蛋白脫乙酰酶復(fù)合物中的核心組成部分Set3復(fù)合物與白念珠菌生物膜耐藥有關(guān),Set3復(fù)合物突變株耐藥機(jī)制既不是細(xì)胞膜完整性的改變,也不是上調(diào)了ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族的表達(dá),可能是生物膜內(nèi)一些特有物質(zhì)作用而產(chǎn)生的,特別是β-1,3-葡聚糖,但具體機(jī)制還沒有被證實(shí),需要進(jìn)一步的研究。近幾年的研究表明,免疫系統(tǒng)和生物膜相關(guān)白念珠菌細(xì)胞的關(guān)系與浮游細(xì)胞大有不同。Xie等[22]提出生物膜相關(guān)細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制是由成熟生物膜完成的。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),形成3 h的生物膜暴露于HL-60細(xì)胞 (一種人類中性粒細(xì)胞相似的細(xì)胞株)時(shí),會(huì)失去80%的活性,而形成24 h和48 h的生物膜活性僅僅降低不到30%,與此同時(shí),成熟生物膜的存在會(huì)抑制機(jī)體發(fā)生強(qiáng)烈的氧化應(yīng)激反應(yīng),這通常是中性粒細(xì)胞殺傷致病菌的主要機(jī)制,而培養(yǎng)3 h的生物膜則相反,分散的生物膜也會(huì)產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng),引發(fā)人們對于細(xì)胞外基質(zhì)在免疫系統(tǒng)中作用的研究。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),細(xì)胞外基質(zhì)并不會(huì)單獨(dú)觸發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng),而葡聚酶作用后,細(xì)胞外基質(zhì)抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)的作用就消失了,而熱滅活的葡聚酶以及DNA酶則不會(huì)出現(xiàn)此現(xiàn)象,這些結(jié)果提示白念珠菌細(xì)胞外基質(zhì)中的β-1,3-葡聚糖在削減氧化應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮一定的作用。

    白念珠菌生物膜是臨床上醫(yī)療植入物發(fā)生血源性感染傳播的主要誘因,也是真菌耐藥形成的重要因素,它的形成和耐藥機(jī)制的復(fù)雜性決定了生物膜相關(guān)性感染的治療極為困難。相對于其他耐藥機(jī)制研究,生物膜相關(guān)研究起步較晚,仍然存在很多問題有待解決?;蛐酒头肿由飳W(xué)為其進(jìn)一步研究提供了新的研究方法,為徹底治療難治性感染和醫(yī)院內(nèi)感染帶來新希望。

    [1] Truong T,Zeng G,Qingsong L,et al.Comparative ploidy proteomics ofCandidaalbicansbiofilms unraveled the role of the AHP1 gene in the biofilm persistence against amphotericin B[J].Mol Cell Proteomics,2016,15(11):3488-3500.

    [2] 張慧,孫紅英.生物膜中白念珠菌的耐藥性研究[J].中國感染與化療雜志,2014,14(4):361-364.

    [3] Mukherjee PK,Chandra J,Kuhn DM,et al.Mechanism of fluconazole resistance inCandidaalbicansbiofilms:phase-specific role of efflux pumps and membrane sterols[J].Infect Immun,2003,71(8):4333-4340.

    [4] 劉東妹,滿旭,李春莉,等.TAC1與外排泵基因?qū)Π啄钪榫锬ば纬傻挠绊慬J].中國皮膚性病學(xué)雜志,2014,28(5):467-471.

    [5] Li R,Kumar R,Tati S,et al.Candidaalbicansflu1-mediated efflux of salivary histatin 5 reduces its cytosolic concentration and fungicidal activity[J].Antimicrob Agents Chemother,2013,57(4):1832-1839.

    [6] Puri S,Kumar R,Chadha S,et al.Secreted aspartic protease cleavage ofCandidaalbicansMsb2 activates Cek1 MAPK signaling affecting biofilm formation and oropharyngeal candidiasis[J].PLoS One,2012,7(11):e46020.

    [7] 章珍珍,夏金萍,馬鳴,等.白念珠菌RAS1基因高表達(dá)菌株的構(gòu)建及鑒定[J].口腔生物醫(yī)學(xué),2016,7(2):72-75.

    [8] Shinde RB,Chauhan NM,Raut JS,et al.Sensitization ofCandidaalbicansbiofilms to various antifungal drugs by cyclosporine A[J].Ann Clin Microbiol Antimicrob,2012,11:27.

    [9] Robbins N,Uppuluri P,Nett J,et al.Hsp90 governs dispersion and drug resistance of fungal biofilms[J].PLoS Pathog,2011,7(9):e1002257.

    [10] Borghi E,Borgo F,Morace G.Fungal biofilms:update on resistance[J].Adv Exp Med Biol,2016,931:37-47.

    [11] Mitchell KF,Zarnowski R,Sanchez H,et al.Community participation in biofilm matrix assembly and function[J].Proc Natl Acad Sci USA,2015,112(13):4092-4097.

    [12] Martins M,Uppuluri P,Thomas DP,et al.Presence of extracellular DNA in theCandidaalbicansbiofilm matrix and its contribution to biofilms[J].Mycopathologia,2010,169(5):323-331.

    [13] Johnson CJ,Cabezas-Olcoz J,Kernien JF,et al.The extracellular matrix ofCandidaalbicansbiofilms impairs formation of neutrophil extracellular traps[J].PLoS Pathog,2016,12(9):e1005884.

    [14] Nett J,Lincoln L,Marchillo K,et al.Putative role of beta-1,3 glucans inCandidaalbicansbiofilm resistance[J].Antimicrob Agents Chemother,2007,51(2):510-520.

    [15] Nett JE,Crawford K,Marchillo K,et al.Role of Fks1p and matrix glucan inCandidaalbicansbiofilm resistance to an echinocandin,pyrimidine,and polyene[J].Antimicrob Agents Chemother,2010,54(8):3505-3508.

    [16] Nett JE,Sanchez H,Cain MT,et al.Interface ofCandidaalbicansbiofilm matrix-associated drug resistance and cell wall integrity regulation[J].Eukaryot Cell,2011,10(12):1660-1669.

    [17] Taff HT,Nett JE,Zarnowski R,et al.A Candida biofilm-induced pathway for matrix glucan delivery:implications for drug resistance[J].PLoS Pathog,2012,8(8):e1002848.

    [18] De Brucker K,Tan Y,Vints K,et al.Fungal beta-1,3-glucan increases ofloxacin tolerance ofEscherichiacoliin a polymicrobialE.coli/Candidaalbicansbiofilm[J].Antimicrob Agents Chemother,2015,59(6):3052-3058.

    [19] Roudbarmohammadi S,Roudbary M,Bakhshi B,et al.ALS1 and ALS3 gene expression and biofilm formation inCandidaalbicansisolated from vulvovaginal candidiasis[J].Adv Biomed Res,2016,5:105.

    [20] Mathé L,Van Dijck P.Recent insights intoCandidaalbicansbiofilm resistance mechanisms[J].Curr Genet,2013,59(4):251-264.

    [21] Nobile CJ,Fox EP,Hartooni N,et al.A histone deacetylase complex mediates biofilm dispersal and drug resistance inCandidaalbicans[J].MBio,2014,5(3):e01201-e012014.

    [22] Xie Z,Thompson A,Sobue T,et al.Candidaalbicansbiofilms do not trigger reactive oxygen species and evade neutrophil killing[J].J Infect Dis,2012,206(12):1936-1945.

    [本文編輯] 衛(wèi)鳳蓮

    The resistance mechanisms of the biofilm relatedCandidaalbicans

    MENG Ling-ning1,2,LIU Jin-yan2,LI Wen-jing1,2,ZHAO Yue1,2,XIANG Ming-jie1,2

    (1.DepartmentofClinicalLaboratory,RuijinHospital,ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai200025,China;2.RadioimmunologyandClinicalLaboratory,LuwanBranch,RuijinHospital,ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai200020,China)

    Candidaalbicanscan form biofilms on medical implant materials,leading to high mortality infection.Mature biofilm relatedC.albicansinfections are difficult to cure because of multi-drug resistance.This review discusses the resistance mechanisms of biofilm relatedC.albicansfrom efflux pump genes and matrix and stress response,summarizing the research advance of the mechanism and providing reference for clinical prevention strategies.

    Candidaalbicans;biofilm;resistance mechanism;matrix

    124-127]

    上海市科委基金 (15ZR1426900);上海市醫(yī)學(xué)重點(diǎn)???(ZK2012A21);上海市黃浦區(qū)優(yōu)秀青年人才 (RCPY1407)

    孟玲寧,女 (漢族),碩士研究生在讀.E-mail:yimln16@163.com

    項(xiàng)明潔,E-mail:mjxiang123456@126.com

    R 379.4

    A

    1673-3827(2017)12-0124-04

    2016-11-15

    猜你喜歡
    外排氟康唑葡聚糖
    膠東國際機(jī)場1、4號外排渠開挖支護(hù)方案研究
    外排體促進(jìn)骨再生的研究進(jìn)展
    三排式吻合器中的雙吻合釘推進(jìn)器對
    葡聚糖類抗病誘導(dǎo)劑在水稻上的試驗(yàn)初報(bào)
    氟康唑氯化鈉注射液聯(lián)合低功率激光治療外耳道真菌病106例
    伊曲康唑與氟康唑治療念珠菌性陰道炎臨床療效觀察
    伏立康唑與氟康唑治療肝移植患者術(shù)后真菌感染的安全性比較
    伊曲康唑與氟康唑治療馬拉色菌毛囊炎的療效對比
    小麥麩皮中β-葡聚糖的分離純化及組成研究
    (1,3)-β-D葡聚糖檢測對侵襲性真菌感染早期診斷的意義
    亚洲欧美日韩高清在线视频| 日韩中字成人| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品嫩草影院av在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 国产成年人精品一区二区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 成年免费大片在线观看| 内射极品少妇av片p| 成人av一区二区三区在线看| 国产一区二区激情短视频| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品永久免费网站| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 男人舔女人下体高潮全视频| 我要搜黄色片| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲无线观看免费| 久久国产乱子免费精品| 两个人视频免费观看高清| 国产亚洲欧美98| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 一级毛片久久久久久久久女| 女人被狂操c到高潮| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 国产亚洲91精品色在线| 在线免费十八禁| 天堂网av新在线| 久久精品91蜜桃| 日日撸夜夜添| 亚洲欧美日韩高清专用| 日韩大尺度精品在线看网址| 成人av一区二区三区在线看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产美女午夜福利| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩欧美 国产精品| 深夜精品福利| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 麻豆一二三区av精品| 一区二区三区高清视频在线| 露出奶头的视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲成人久久性| 一级a爱片免费观看的视频| 午夜福利18| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久久久久久久久成人| 亚洲欧美精品自产自拍| 寂寞人妻少妇视频99o| 在线观看一区二区三区| 我要看日韩黄色一级片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品一二三区在线看| 亚洲图色成人| 又黄又爽又免费观看的视频| 精品人妻偷拍中文字幕| www日本黄色视频网| 少妇的逼好多水| 午夜亚洲福利在线播放| 午夜激情欧美在线| 国产av一区在线观看免费| 一级毛片aaaaaa免费看小| 日韩精品中文字幕看吧| 搞女人的毛片| 成人特级黄色片久久久久久久| 免费看a级黄色片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 99在线人妻在线中文字幕| 午夜亚洲福利在线播放| 毛片女人毛片| 欧美中文日本在线观看视频| 日韩欧美国产在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 看十八女毛片水多多多| 久久精品综合一区二区三区| 国产亚洲欧美98| 日韩国内少妇激情av| 婷婷色综合大香蕉| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 真人做人爱边吃奶动态| 精品人妻视频免费看| 精品免费久久久久久久清纯| 直男gayav资源| 插逼视频在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 久久精品国产亚洲网站| 婷婷亚洲欧美| 久久人人爽人人爽人人片va| 性欧美人与动物交配| 日本熟妇午夜| 日韩欧美三级三区| 国产美女午夜福利| 少妇高潮的动态图| 99热精品在线国产| 欧美日韩在线观看h| 欧美zozozo另类| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩精品中文字幕看吧| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲国产色片| 国产免费男女视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 午夜精品在线福利| 成人永久免费在线观看视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 热99re8久久精品国产| 色5月婷婷丁香| 五月伊人婷婷丁香| 一区二区三区免费毛片| 久久久欧美国产精品| 国产av在哪里看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 成熟少妇高潮喷水视频| 身体一侧抽搐| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 在线观看66精品国产| 国产精品人妻久久久影院| 一进一出抽搐动态| 亚洲经典国产精华液单| 床上黄色一级片| 99热全是精品| 日本成人三级电影网站| 91久久精品国产一区二区三区| 日本黄色片子视频| h日本视频在线播放| 免费电影在线观看免费观看| 国产美女午夜福利| 国产精品1区2区在线观看.| 国产一区亚洲一区在线观看| 成人二区视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久久精品94久久精品| 免费黄网站久久成人精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | www.色视频.com| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品乱码一区二三区的特点| 我的女老师完整版在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 丰满乱子伦码专区| 亚洲精品456在线播放app| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 在线播放国产精品三级| 久久热精品热| 日韩av在线大香蕉| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 69人妻影院| 亚洲第一电影网av| 亚洲精品亚洲一区二区| 两个人视频免费观看高清| av在线老鸭窝| 亚洲精品一区av在线观看| 免费搜索国产男女视频| 中文字幕av在线有码专区| 国产精品无大码| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产伦在线观看视频一区| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 成人美女网站在线观看视频| 国产三级在线视频| 69人妻影院| 欧美3d第一页| 亚洲国产精品久久男人天堂| 69人妻影院| 久久久色成人| 国产大屁股一区二区在线视频| 在线国产一区二区在线| 国产伦在线观看视频一区| 久久热精品热| 国产精品一区二区三区四区久久| 在线观看午夜福利视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美又色又爽又黄视频| 九九热线精品视视频播放| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 99热精品在线国产| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 99久国产av精品| 天天一区二区日本电影三级| 久久久久久国产a免费观看| 如何舔出高潮| 欧美又色又爽又黄视频| 在现免费观看毛片| 免费看光身美女| 亚洲18禁久久av| 欧美中文日本在线观看视频| 中文字幕av成人在线电影| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 欧美+亚洲+日韩+国产| 色播亚洲综合网| 免费观看精品视频网站| 婷婷六月久久综合丁香| 国产单亲对白刺激| 老熟妇仑乱视频hdxx| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| h日本视频在线播放| 久久久精品94久久精品| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲专区国产一区二区| 日本免费a在线| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美日韩在线观看h| 日本欧美国产在线视频| 国产高清不卡午夜福利| а√天堂www在线а√下载| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲av免费高清在线观看| 国产探花极品一区二区| 久久久久久久午夜电影| 国产 一区 欧美 日韩| 最好的美女福利视频网| 成人av在线播放网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 18禁在线播放成人免费| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲综合色惰| 亚洲精品456在线播放app| 免费在线观看影片大全网站| 性色avwww在线观看| 伦精品一区二区三区| 国产精品一及| 美女高潮的动态| 亚洲中文字幕日韩| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 亚洲真实伦在线观看| 久久午夜福利片| 欧美日本视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产色爽女视频免费观看| 色在线成人网| 一进一出抽搐动态| 亚洲成人久久性| 亚洲高清免费不卡视频| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 91av网一区二区| 在现免费观看毛片| 国产精品国产高清国产av| 长腿黑丝高跟| 国产精品一区二区免费欧美| 国内揄拍国产精品人妻在线| 免费看日本二区| 国产免费一级a男人的天堂| 成人午夜高清在线视频| 欧美+日韩+精品| 亚洲熟妇熟女久久| 中文在线观看免费www的网站| 久久国产乱子免费精品| 久久99热6这里只有精品| 国产成人精品久久久久久| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 久久人人精品亚洲av| 亚洲精品国产av成人精品 | 中国美女看黄片| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美又色又爽又黄视频| 熟女人妻精品中文字幕| 91久久精品电影网| 好男人在线观看高清免费视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产精品女同一区二区软件| 联通29元200g的流量卡| 黑人高潮一二区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产老妇女一区| 国产高清有码在线观看视频| 不卡视频在线观看欧美| 一个人免费在线观看电影| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久久久久国产a免费观看| av在线老鸭窝| 国产精品免费一区二区三区在线| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 一级a爱片免费观看的视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 不卡一级毛片| 久久久色成人| 精品一区二区三区人妻视频| 久久久色成人| 插逼视频在线观看| 99riav亚洲国产免费| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 狠狠狠狠99中文字幕| 中文资源天堂在线| 久久久精品欧美日韩精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 天堂√8在线中文| 老女人水多毛片| 久久这里只有精品中国| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美丝袜亚洲另类| 午夜福利在线在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 日韩一本色道免费dvd| 毛片女人毛片| 国内精品美女久久久久久| videossex国产| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 亚洲av中文av极速乱| 狠狠狠狠99中文字幕| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日韩精品青青久久久久久| 欧美一区二区亚洲| 男女那种视频在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲内射少妇av| 久久久a久久爽久久v久久| 日本 av在线| 国产v大片淫在线免费观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲人与动物交配视频| 波多野结衣高清无吗| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 一个人看的www免费观看视频| 日本爱情动作片www.在线观看 | 久久久久国内视频| 九九在线视频观看精品| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 99久久九九国产精品国产免费| 超碰av人人做人人爽久久| 赤兔流量卡办理| 有码 亚洲区| 青春草视频在线免费观看| 美女黄网站色视频| 久久久精品大字幕| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲在线观看片| 日日撸夜夜添| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费高清视频大片| 国产av麻豆久久久久久久| 国产成人福利小说| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久久精品大字幕| 色哟哟·www| 免费人成在线观看视频色| 久久精品影院6| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 五月玫瑰六月丁香| 国产91av在线免费观看| 国产黄片美女视频| 91久久精品电影网| 日本免费a在线| 国产av麻豆久久久久久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美色视频一区免费| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲美女黄片视频| 日本一二三区视频观看| 亚洲无线观看免费| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 日日摸夜夜添夜夜爱| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 两个人的视频大全免费| 一区二区三区四区激情视频 | 尾随美女入室| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 高清午夜精品一区二区三区 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 女人被狂操c到高潮| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 性色avwww在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲真实伦在线观看| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲欧美日韩无卡精品| 精品久久久久久成人av| 色吧在线观看| 成人欧美大片| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美日本视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 九九在线视频观看精品| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产三级中文精品| 在线观看午夜福利视频| 两个人的视频大全免费| 欧美色欧美亚洲另类二区| 男人舔奶头视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 最好的美女福利视频网| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久99热这里只有精品18| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲18禁久久av| 国产av麻豆久久久久久久| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美+日韩+精品| 丝袜美腿在线中文| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久久色成人| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产精品一二三区在线看| 精华霜和精华液先用哪个| 免费黄网站久久成人精品| 久久精品国产清高在天天线| 青春草视频在线免费观看| 久久久久久大精品| 91在线观看av| 成人午夜高清在线视频| 亚洲中文字幕日韩| 最近的中文字幕免费完整| 久久人人精品亚洲av| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 免费av毛片视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 久久久精品94久久精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 九九热线精品视视频播放| 久久久久久伊人网av| 免费黄网站久久成人精品| 我的女老师完整版在线观看| 看片在线看免费视频| 中文字幕熟女人妻在线| 国产精品国产高清国产av| 性色avwww在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久精品国产亚洲网站| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 成人漫画全彩无遮挡| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲五月天丁香| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产真实乱freesex| 国产三级中文精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 波多野结衣高清作品| 日韩在线高清观看一区二区三区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 亚洲国产欧洲综合997久久,| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 校园人妻丝袜中文字幕| av天堂中文字幕网| 成人av在线播放网站| 亚洲乱码一区二区免费版| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 99在线人妻在线中文字幕| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲国产精品成人综合色| 日本-黄色视频高清免费观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 精华霜和精华液先用哪个| 又爽又黄无遮挡网站| 免费看a级黄色片| 嫩草影院入口| 男插女下体视频免费在线播放| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美极品一区二区三区四区| 22中文网久久字幕| 在现免费观看毛片| 国产熟女欧美一区二区| 欧美成人a在线观看| 黄色配什么色好看| 99九九线精品视频在线观看视频| 欧美潮喷喷水| 亚洲18禁久久av| 一本精品99久久精品77| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 午夜精品国产一区二区电影 | a级毛色黄片| 此物有八面人人有两片| av女优亚洲男人天堂| 身体一侧抽搐| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲色图av天堂| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品无大码| 中文在线观看免费www的网站| 欧美性猛交黑人性爽| 伦理电影大哥的女人| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲美女黄片视频| 丝袜喷水一区| 成人漫画全彩无遮挡| 一级黄色大片毛片| 久久人人爽人人片av| 热99在线观看视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产极品精品免费视频能看的| 99热这里只有是精品在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 午夜日韩欧美国产| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 波野结衣二区三区在线| 51国产日韩欧美| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 毛片一级片免费看久久久久| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲图色成人| 亚洲最大成人av| av天堂中文字幕网| 韩国av在线不卡| www.色视频.com| 人人妻人人看人人澡| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美激情久久久久久爽电影| 简卡轻食公司| 日本 av在线| 麻豆一二三区av精品| 亚洲五月天丁香| 男人舔奶头视频| 国产乱人偷精品视频| 激情 狠狠 欧美| 国产视频一区二区在线看| 99热6这里只有精品| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 久久中文看片网| 久久亚洲国产成人精品v| 久久久久九九精品影院| 无遮挡黄片免费观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 麻豆久久精品国产亚洲av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产av不卡久久| 少妇高潮的动态图| 三级毛片av免费| 99热网站在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 精品久久久久久久末码| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产大屁股一区二区在线视频| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲一区二区三区色噜噜| 色av中文字幕| 国国产精品蜜臀av免费| 日本成人三级电影网站| 日本黄色片子视频| 波多野结衣高清作品| 大香蕉久久网| 午夜激情欧美在线| 国产精品一及| 国产成人freesex在线 | 一a级毛片在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 日本与韩国留学比较| 久久久精品大字幕| 色播亚洲综合网| 久久久午夜欧美精品| 十八禁国产超污无遮挡网站| av在线播放精品| 一进一出抽搐gif免费好疼| 99热这里只有精品一区| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美最新免费一区二区三区| 色视频www国产| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 黄色一级大片看看| 国产麻豆成人av免费视频| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲欧美日韩东京热| 最近2019中文字幕mv第一页| 99久久中文字幕三级久久日本| 免费看光身美女| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 少妇人妻精品综合一区二区 | 久久综合国产亚洲精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | av在线观看视频网站免费| 天堂网av新在线| av卡一久久| 蜜臀久久99精品久久宅男| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲国产精品成人综合色| 日本五十路高清| 青春草视频在线免费观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 久久久久九九精品影院| 看非洲黑人一级黄片| 91在线观看av| 国产淫片久久久久久久久| 一进一出好大好爽视频| 国产精品乱码一区二三区的特点|