神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白9在胰腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

吳鐵龍， 薛麗莉， 戴圓圓， 盛穎玥， 王文遠(yuǎn)， 薛育政

(無錫市第三人民醫(yī)院 消化科， 江蘇 無錫 214000)

神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白9在胰腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

吳鐵龍， 薛麗莉， 戴圓圓， 盛穎玥， 王文遠(yuǎn)， 薛育政

(無錫市第三人民醫(yī)院 消化科， 江蘇 無錫 214000)

目的 檢測(cè)神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白(NEDD)9在胰腺癌和癌旁組織的表達(dá)情況，分析其與胰腺癌進(jìn)展、預(yù)后的關(guān)系。方法 收集2005年8月-2010年12月于無錫市第三人民醫(yī)院治療的98例胰腺癌患者的癌和癌旁組織樣本，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)患者胰腺癌和癌旁組織中NEDD9的表達(dá)，并對(duì)NEDD9表達(dá)與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。結(jié)果 胰腺癌組織中NEDD9的高表達(dá)率明顯高于癌旁組織(57.1% vs 41.8%，χ2=4.592，P=0.032)。胰腺癌組織NEDD9的表達(dá)與患者TNM分期、分化程度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(χ2值分別為45.02、20.41、36.21，P值均<0.001)；與性別、年齡、腫瘤部位、有無肝轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P值均>0.05)。結(jié)論 NEDD9可能在胰腺癌的發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移中起著一定的作用，有可能作為評(píng)估胰腺癌預(yù)后的分子指標(biāo)和治療靶點(diǎn)。

胰腺腫瘤； 神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白9； 病理狀態(tài)， 體征和癥狀

胰腺癌是我國常見的消化系統(tǒng)惡性疾病，具有惡性程度高、早期診斷困難、有效治療手段缺乏、預(yù)后差等特點(diǎn)[1-2]。因此，探索新的有效的分子生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo)和新的治療靶點(diǎn)十分必要。神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白(neural precursor cell expressed developmen-tally down-regulated，NEDD)9是一種骨架蛋白分子，參與調(diào)控細(xì)胞遷移、分裂及凋亡，在多種惡性腫瘤如乳腺癌[3]、黑色素瘤[4]中均呈高表達(dá)，并與腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。目前，關(guān)于NEDD9在胰腺癌中的表達(dá)情況了解甚少，故本研究檢測(cè)NEDD9在胰腺癌和癌旁組織中的表達(dá)情況，并探討NEDD9的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2005年8月-2010年12月于本院行手術(shù)治療的98例胰腺癌患者的癌和癌旁組織樣本，所有患者術(shù)前未經(jīng)過放、化療及免疫治療等，術(shù)后病理確診為胰腺癌。腫瘤分期及臨床病理分級(jí)參考《胰腺癌診治指南(2014)》[5]。定義Ⅰ期和Ⅱ期胰腺癌患者為早期,Ⅲ期和Ⅳ期患者為晚期。

1.2 研究方法 采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化技術(shù)，按免疫組化試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)說明書進(jìn)行操作。NEDD9 多克隆一抗稀釋度為1∶300。二抗采用過氧化物酶標(biāo)記，以DAB顯色。常規(guī)石蠟包埋，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，微波抗原修復(fù)，PBS 代替一抗作為陰性對(duì)照。根據(jù)細(xì)胞不同部位著色深淺判斷細(xì)胞染色的數(shù)量和強(qiáng)度。每個(gè)樣本顯微鏡下觀察10 個(gè)400倍放大視野，每次觀察其中100個(gè)細(xì)胞。若陽性細(xì)胞<5%，則記為0分;陽性細(xì)胞占觀察細(xì)胞總數(shù)的5%～25%,記為1 分，26%～50%記為2分；>50%記為3分。顯微鏡下觀察染色強(qiáng)度：陽性細(xì)胞染色呈黃色為1分；棕黃色為2分； 棕褐色為3 分。采用乘法計(jì)算陽性細(xì)胞所占總觀察細(xì)胞的比值和陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度的交集以確定最終觀察結(jié)果： 0分為陰性，1～4分為弱陽性，5～8分為中陽性，9～12分為強(qiáng)陽性；前兩者為低表達(dá)，后兩者為高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NEDD9 在胰腺癌和癌旁組織中的表達(dá)情況 免疫組化結(jié)果顯示，NEDD9主要在細(xì)胞漿著色。NEDD9在胰腺癌組織中高表達(dá)56例(57.1%)，低表達(dá)42例(42.9%)；在癌旁組織中高表達(dá)4l例(41.8%)，低表達(dá)57例(58.2%)。NEDD9在胰腺癌組織中與癌旁組織中的表達(dá)程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.592，P=0.032)(圖1)。

圖1 NEDD9在胰腺癌和癌旁組織中的表達(dá)(×200)a：胰腺癌組織；b：癌旁組織

2.2 NEDD9的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 胰腺癌組織NEDD9表達(dá)高低與患者臨床分期、腫瘤分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(χ2值分別為45.02、20.41、36.21，P值均<0.001)，與患者年齡、性別、腫瘤部位、有無肝轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P值均>0.05)(表1)。

表1 NEDD9的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例)

3 討論

NEDD9作為一種細(xì)胞骨架蛋白分子，主要包括SH3 結(jié)構(gòu)域、底物結(jié)構(gòu)域、富含絲氨酸的序列及進(jìn)化非常保守的C末端結(jié)構(gòu)域，能與多種功能性蛋白相互作用，在細(xì)胞黏附、趨化、遷移和侵襲、浸潤、凋亡和細(xì)胞周期以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中發(fā)揮著重要的作用[6]。NEDD9在胃癌[7]、宮頸癌[8]、肝癌[9]等惡性腫瘤中均有高表達(dá)且與腫瘤的遷移、浸潤密切相關(guān)。然而，NEDD9在胰腺癌的表達(dá)情況不是十分清楚。

本研究結(jié)果顯示，NEDD9在胰腺癌組織呈高表達(dá)，在癌旁組織呈低表達(dá)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與Zhang等[7]對(duì)胃癌、Sima等[8]對(duì)宮頸癌及Kozyulina等[10]對(duì)乳腺癌的研究結(jié)果類似。同時(shí)胰腺癌組織中NEDD9的高表達(dá)與腫瘤臨床特征如分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等相關(guān)，提示NEDD9可能參與胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程。關(guān)于NEDD9參與腫瘤遷移和侵襲的機(jī)制，目前研究[11]認(rèn)為，NEDD9被Src和FAK磷酸化后直接與接頭分子Crk相互作用，正向調(diào)節(jié)Src-FAK-Crk遷移開關(guān)，促進(jìn)鈣黏蛋白降解，減慢黏著斑分解，促進(jìn)整合素受體激活和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。體外實(shí)驗(yàn)[12]發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)NEDD9可以促進(jìn)細(xì)胞的遷移，細(xì)胞隨機(jī)遷移的速度和趨向性反應(yīng)都有所增強(qiáng)；降低NEDD9的表達(dá)可以導(dǎo)致細(xì)胞化學(xué)趨向性降低。Sima等[8]研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)NEDD9能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞遷移和侵襲；張思森等[13]研究發(fā)現(xiàn)，RNA干擾沉默NEDD9能夠抑制胃癌細(xì)胞遷移和侵襲，誘導(dǎo)其凋亡。另外，盡管本研究顯示NEDD9表達(dá)與有無肝轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性，但未來仍需要大量標(biāo)本證實(shí)。

綜上所述，NEDD9 在胰腺癌組織中高表達(dá)，可能與胰腺癌浸潤、侵襲相關(guān)。NEDD9的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，臨床易于操作，有可能成為評(píng)估胰腺癌患者預(yù)后的分子生物學(xué)指標(biāo)和新的分子靶向治療靶點(diǎn)。此外，NEDD9參與胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的具體機(jī)制還需要進(jìn)一步探討。

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引證本文：WU TL, XUE LL, DAI YY, et al. Expression of NEDD9 and its clinical significance in pancreatic cancer[J]. J Clin Hepatol, 2017, 33(1): 130-132. (in Chinese) 吳鐵龍， 薛麗莉， 戴圓圓， 等. 神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)下調(diào)蛋白9在胰腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J]. 臨床肝膽病雜志, 2017, 33(1): 130-132.

(本文編輯：葛 俊)

Expression of NEDD9 and its clinical significance in pancreatic cancer

WUTielong,XUELili,DAIYuanyuan,etal.

(DepartmentofGastroenterology,TheThirdPeople′sHospitalofWuxi,Wuxi,Jiangsu214000,China)

Objective To investigate the expression of neural precursor cell-expressed, developmentally down-regulated 9 (NEDD9) in pancreatic cancer tissues and adjacent tissues and its association with the progression and prognosis of pancreatic cancer. Methods A total of 98 patients with pancreatic cancer who were treated in The Third People′s Hospital of Wuxi from August 2005 to December 2010 were enrolled, and the samples of pancreatic cancer tissues and adjacent tissues were collected. Immunohistochemistry was used to measure the expression of NEDD9 in pancreatic cancer tissues and adjacent tissues. The chi-square test was used for comparison of categorical data between groups. Results The high expression rate of NEDD9 in pancreatic cancer tissues was significantly higher than that in adjacent tissues (57.1% vs 41.8%,χ2=4.592,P=0.032). The expression of NEDD9 in pancreatic cancer tissues was significantly associated with TNM stage, degree of tumor differentiation, and lymph node metastasis (χ2=45.02, 20.41, and 36.21, allP<0.001) and not associated with sex, age, tumor location, or presence or absence of liver metastasis (allP>0.05). Conclusion NEDD9 may play a role in the progression and invasion/metastasis of pancreatic cancer and can be used as a prognostic marker and a therapeutic target for pancreatic cancer.

pancreatic neoplasms； NEDD9； pathological conditions, signs and symptoms

10.3969/j.issn.1001-5256.2017.01.028

2016-08-09；

2016-08-20。

江蘇省“六大人才高峰”基金(WSN-066)；江蘇省“333工程”科研項(xiàng)目(CAE01101-06)；無錫市醫(yī)院管理中心科研項(xiàng)目(YGZXQ1310)；無錫市社會(huì)發(fā)展科技支撐項(xiàng)目(CSE31N1415)

吳鐵龍(1990-)，男，主要從事胰腺癌侵襲浸潤的分子機(jī)制研究。

薛育政，電子信箱：xueyz001@163.com。

R735.9

A

1001-5256(2017)01-0130-03