陳生熬??+姚娜??+王帥??+宋勇+謝從新??+任道全??+范鎮(zhèn)明

摘要：采用急性毒理學(xué)試驗(yàn)方法，探討6個(gè)鹽度0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%對(duì)葉爾羌高原鰍受精卵孵化率、仔魚成活率等的影響。結(jié)果顯示，在不同鹽度梯度下，葉爾羌高原鰍受精卵的孵化時(shí)間、孵化率、畸形率均表現(xiàn)出顯著差異（P<0.05）。不同鹽度下的孵化時(shí)間差異不顯著，而在0.2%～0.6%之間孵化率較高，3個(gè)梯度差異不顯著（P>0.05）?；温试?.4%、0.6%鹽度下較低，在0.4%鹽度下最低，低至2.67%。葉爾羌高原鰍仔魚不投喂存活系數(shù)（SAI）的測(cè)定分析表明，仔魚在48 h內(nèi)死亡數(shù)量較大，但鹽度對(duì)其影響極大，適宜鹽度為02%～0.8%，最適鹽度則為0.4%，SAI值較高，且差異不顯著（P>0.05）。鹽度與SAI相關(guān)性較高，關(guān)系式為Y=-1.146 8X2+11.231X+5.236 4（r2=0.959 8）。在0.2%～0.6%鹽度梯度之間，SAI與孵化率存在直線相關(guān)，關(guān)系式為Y=0.007 5X+0.703 5（r2=0.937 1）；SAI與畸形率的關(guān)系式為Y=-0.005 3X2+0.302 7X-3.394 7（r2=1）。研究表明，在葉爾羌高原鰍資源早期發(fā)育過程中，鹽度脅迫至關(guān)重要，對(duì)其鹽度的選擇將直接影響其生長(zhǎng)和發(fā)育。

關(guān)鍵詞：葉爾羌高原鰍；鹽度；受精卵；仔魚；存活數(shù)量

中圖分類號(hào)： S917.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼：

文章編號(hào)：1002-1302（2016）08-0303-03

葉爾羌高原鰍[Triplophysa （Hedinichthys） yarkandensis （Day）]別稱狗頭魚、小大頭，屬于鯉形目（Cyprinidformes）鰍科（Cobitidae）條鰍亞科（Nemachilinae）高原鰍屬（Triplophysa）鼓鰾亞屬（Hedinichthys）塔里木河水系土著魚類[1-3]。關(guān)于塔里木河水系漁業(yè)的研究多集中在漁業(yè)環(huán)境調(diào)查、外來(lái)物種、裂腹魚類及鰍科魚類生物學(xué)[3-7]，對(duì)于該水系高原鰍的研究?jī)H為新種報(bào)道、形態(tài)特征、攝食與生長(zhǎng)等，對(duì)于葉爾羌高原鰍也僅有生物學(xué)特征、生長(zhǎng)與攝食、繁殖習(xí)性等方面的研究[3-4，8-10]。

近年來(lái)，塔里木河干流水量日益減少，鹽堿加劇，環(huán)境因子對(duì)漁業(yè)資源的影響頗大，導(dǎo)致葉爾羌高原鰍資源銳減，其前景令人堪憂，可能成為塔里木河水系繼扁吻魚（Aspiorhynchus laticeps）和塔里木裂腹魚（Schizothorax biddulphi）之后的第3種瀕危魚類[2-3]。鑒于此，開展鹽堿化對(duì)葉爾羌高原鰍生長(zhǎng)和發(fā)育脅迫的研究已迫在眉睫。已有關(guān)于塔里木河鹽堿化防治等水利方面的研究[5-7]，但關(guān)于鹽堿化對(duì)塔里木河流域水生生物的影響，尤其對(duì)于葉爾羌高原鰍等土著魚類鹽堿脅迫的研究尚未見報(bào)道。

在人工繁殖成功的基礎(chǔ)上，采用鹽度脅迫和存活率研究方法，系統(tǒng)總結(jié)葉爾羌高原鰍受精卵和仔魚在鹽度影響下的變化情況，以期為孵化率及育苗成活率的提高、半咸水人工馴養(yǎng)、增殖保護(hù)、苗種生產(chǎn)提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

供試受精卵和仔魚由塔里木大學(xué)水產(chǎn)試驗(yàn)基地提供。葉爾羌高原鰍親魚經(jīng)人工催產(chǎn)后自然產(chǎn)卵，受精卵在50 L塑料桶改裝的孵化桶內(nèi)流水孵化。孵化及仔魚養(yǎng)殖均采用曝氣48 h以上的自來(lái)水，pH值為6.5～7.5，溶解氧保持在 8.0 mg/L 以上，水溫控制在（20±1） ℃。仔魚孵出后，挑選肉眼觀察無(wú)畸形的正常仔魚，用于不投餌存活系數(shù)的試驗(yàn)。

1.2方法

鹽度設(shè)置分別為0%（自來(lái)水）、0.2%、0.4%、0.6%、08%、1.0%共6個(gè)梯度，采用速溶海水晶（上海海業(yè)生物科技有限公司產(chǎn)品）配置，并采用HANNAHI931101型鹽度計(jì)矯正鹽度，每個(gè)組合設(shè)置3個(gè)平行和1個(gè)對(duì)照。采用1 000 mL 燒杯作為試驗(yàn)容器，每個(gè)燒杯放100粒。采用 ACO-004型電磁式空氣泵（功率為0.75～1.10 kW）進(jìn)行微充氣。

1.3取樣和觀察

在孵化過程中嚴(yán)格記錄48 h內(nèi)葉爾羌高原鰍受精卵（原腸胚后期）的孵化時(shí)間、周期、孵化率、畸形率、存活率等。孵化時(shí)間以50%的個(gè)體出膜為準(zhǔn)，畸形率以尾部彎曲、個(gè)體脊椎彎曲、卵黃囊短小等為標(biāo)準(zhǔn)[13-17]。

仔魚活力以不投餌存活系數(shù)（survival activity index，SAI）作為衡量指標(biāo)[15-17]。仔魚孵出后，挑選健康仔魚作為試驗(yàn)用魚，采用2 000 mL燒杯作為試驗(yàn)容器，每個(gè)燒杯放50尾，微充氣，不投餌。發(fā)現(xiàn)死亡及時(shí)撈出，每天按時(shí)統(tǒng)計(jì)死亡尾數(shù)，直至全部死亡，計(jì)算平均值比較其SAI值。SAI值計(jì)算公式為：

[JZ]SAI=∑[DD（]k〖〗i=1[DD）]（N-hi）×i/N。

式中：N為起始的仔魚數(shù)，k為仔魚全部死亡所需時(shí)間，d，hi為第i天時(shí)仔魚的累計(jì)死亡數(shù)，尾。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用多重比較法進(jìn)行組間差異顯著性檢驗(yàn)，以P<0.05為差異顯著。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”（x[TX-5]±s）表示。

2結(jié)果與分析

2.1不同鹽度下葉爾羌高原鰍受精卵的孵化情況

葉爾羌高原鰍受精卵在不同鹽度梯度下孵化情況見表1。采用原腸胚后期受精卵發(fā)育，已完全經(jīng)過20 h以上，從此時(shí)開始計(jì)時(shí)。從3批受精卵的孵化時(shí)間可知，孵化時(shí)間在不同鹽度下沒有顯著差異（P>0.05），基本一致，但鹽度升高則縮減了孵化時(shí)間。孵化率隨著鹽度梯度的升高先升高，從06%開始直線下降，孵化率的變化幅度隨鹽度的變化差異顯著（P<0.05）?；温士傮w變化幅度不大，但表現(xiàn)特征與孵化率相反，差異極顯著（P<0.01）。葉爾羌高原鰍受精卵 12 h 的存活率在0%～0.6%梯度之間，表現(xiàn)為差異不顯著，尤其在0%與0.6%、0.2%與0.4%差異不顯著（P>0.05）。在24 h時(shí)，0.2%與0.4%、0.6%與0.8%差異不顯著，但二者間差異顯著（P<0.05）；鹽度為1.0%時(shí)，同批次比較差異極顯著，存活率嚴(yán)重下降，期間下降明顯的鹽度梯度為02%、1.0%。在48 h時(shí)表現(xiàn)尤為凸出，鹽度為0%、1%則存活率直線下降，達(dá)到最低點(diǎn)1.67%，仔魚基本無(wú)法存活；鹽度為0.2%～0.6%時(shí)雖然下降，但趨勢(shì)不明顯，差異不顯著（P>0.05）；鹽度為0.8%時(shí)持續(xù)下降至60.17%，但總體仍保持一定的存活率。本試驗(yàn)中，鹽度0.2%和0.6%可作為葉爾羌高原鰍孵化和仔魚培育中的鹽度關(guān)鍵點(diǎn)或臨界點(diǎn)，超出范圍孵化率和存活率均會(huì)受到影響，出現(xiàn)下降趨勢(shì)；雖然鹽度為1.0%時(shí)孵化率下降至一半，但此鹽度嚴(yán)重影響后期存活率，應(yīng)舍棄此梯度。鹽度的大小不僅影響孵化時(shí)間、孵化率、畸形率，對(duì)于不同時(shí)間段受精卵的存活率也起到關(guān)鍵作用，直接影響葉爾羌高原鰍的生長(zhǎng)和發(fā)育。

2.2不同鹽度下葉爾羌高原鰍的仔魚存活系數(shù)

仔魚存活系數(shù)指不投餌存活系數(shù)，本試驗(yàn)中依據(jù)仔魚存活率和個(gè)數(shù)對(duì)其SAI進(jìn)行測(cè)定。由表2可知，鹽度為0.4%、0.6%時(shí)SAI較高，且表現(xiàn)為差異不顯著（P>0.05）；鹽度為0.2%、0.8%時(shí)表現(xiàn)為差異不顯著（P>0.05）；兩組相比差異顯著（P<0.05）；鹽度為0%、1%時(shí)兩組相比差異顯著，與其他鹽度組相比差異極顯著（P<0.01）。由表2還可知，鹽度為04%、0.6%[JP3]時(shí)仔魚存活時(shí)間最長(zhǎng)，可達(dá)10 d；在其他鹽度梯度下，最短存活時(shí)間為2 d，這與上述48 h存活的研究結(jié)果相一致。

由葉爾羌高原鰍仔魚鹽度和SAI關(guān)系式可知，SAI值隨著鹽度的升高呈拋物線趨勢(shì)，先上升后下降，回落差異顯著。鹽度中單一0.4%梯度顯示，標(biāo)準(zhǔn)差幅度較大，其他雖然不及0.4%梯度，但鹽度總值影響其存活。由表1、表2還可知，鹽度升高會(huì)影響其存活時(shí)間，鹽度為0.4%～0.6%時(shí)存活系數(shù)較高，且半致死時(shí)間延長(zhǎng)至4～5 d，表明此梯度對(duì)葉爾羌高原鰍仔魚存活起到關(guān)鍵作用。

由表1的孵化率、畸形率指標(biāo)結(jié)合表2可知，在0.2%～0.6%的鹽度梯度之間，其指標(biāo)表現(xiàn)為最高和最低，這與本節(jié)闡述仔魚存活鹽度在0.4%～0.6%之間相一致?？梢姡邴}度梯度試驗(yàn)中，鹽度梯度0.4%是葉爾羌高原鰍早期發(fā)育中的臨界關(guān)鍵點(diǎn)。

在葉爾羌高原鰍的仔魚存活系數(shù)中，鹽度與SAI的相關(guān)性表現(xiàn)為二項(xiàng)式的關(guān)系式，相關(guān)性較高。在 0.2%～0.6%鹽度梯度之間，SAI與孵化率之間存在直線相關(guān)，關(guān)系式為Y=0.007 5X+0.703 5（r2=0.937 1）；SAI與畸形率則表現(xiàn)為二項(xiàng)式的關(guān)系式，即Y=-0.005 3X2+0.302 7X-3.394 7（r2=1.000 0）。

3結(jié)論與討論

3.1鹽度對(duì)葉爾羌高原鰍受精卵孵化的影響

對(duì)于魚類的繁衍生息，繁殖成敗取決于其棲息中形成的繁殖策略，這也是決定子代成活的關(guān)鍵，與魚類的繁殖時(shí)間、繁殖地點(diǎn)、孕育子代機(jī)體能量資源分配密切相關(guān)。繁殖行為必須在有效的水體中進(jìn)行，水體中鹽堿等離子過高或過低均會(huì)影響其生殖[11-14]。

在鹽度脅迫試驗(yàn)中，鹽度過高或過低均會(huì)影響諸多魚類受精卵的孵化和成活，海水魚類對(duì)鹽度的適應(yīng)性較高。已有研究表明，豹紋鰓棘鱸（Plectropomus leopardus）受精卵孵化的適宜鹽度范圍為2.2%～4.2%，最適鹽度范圍為1.6%～34%[15]。趙明等研究七帶石斑魚（Epinephelus septemfasciatus）受精卵的孵化周期、孵化率、畸形率以及卵黃囊仔魚的畸形率表明，受精卵孵化的最適鹽度范圍為3.0%～3.5%，鹽度高于3.5%時(shí)孵化率隨著鹽度的升高而降低，仔魚畸形率隨之升高；鹽度低于2.5%時(shí)孵化率隨鹽度降低而降低[16]。淡水魚類胚胎發(fā)育的適宜鹽度通常較低，且它們之間存在差異[17]。郭永軍等研究表明，在鹽度為0.1%～1.2%的條件下，鯉魚（Cyprinuscarpio）胚胎孵化率與鹽度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，鯉魚胚胎及前期仔魚發(fā)育的最佳孵化鹽度為01%左右[18-19]。王杰等研究發(fā)現(xiàn)，烏鱧（Ophiocephalus argus Cantor）的最佳孵化鹽度為0.150%～0.712%[17]。王茂元等研究表明，新吉富羅非魚（NEW GIFT Nile Tilapia Oreochromis niloticus）受精卵在鹽度為0.6%～1.5%時(shí)孵化率較高，達(dá)到8.90%～9.27%，比較接近于本試驗(yàn)中的9.467%；鹽度低于0.3%、高于1.8%時(shí)孵化率較低[20]。對(duì)于咸淡水魚類而言，趙俊等報(bào)道尖鰭鯉（Cyprinus acutidorsalis Wang）在鹽度0%～1.25%下發(fā)育正常，超過此范圍則發(fā)育不完全；最佳受精卵孵化梯度為0.5%，范圍在0.25%～0.75%之間[21]。海水魚類的鹽度遠(yuǎn)大于塔里木河葉爾羌高原鰍的生存極限，這與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。葉爾羌高原鰍受精卵的最佳孵化鹽度梯度為0.4%，范圍為0.2%～0.6%，高于淡水且棲息水域符合咸淡水，這與塔里木河的水質(zhì)特點(diǎn)[5-7]密切相關(guān)，鹽度在0.1%～0.5%范圍內(nèi)。

3.2鹽度對(duì)葉爾羌高原鰍仔魚成活率的影響

鹽度對(duì)仔魚存活率的影響比較顯著，當(dāng)鹽度超出一定范圍時(shí)，孵化培育周期縮短、畸形率升高，影響胚胎發(fā)育的正常進(jìn)行，造成仔魚存活率低、對(duì)環(huán)境變化的耐受性差。魚類機(jī)體過弱、發(fā)育不完全，尤其是滲透壓調(diào)節(jié)不完善將導(dǎo)致仔魚死亡率過高，當(dāng)環(huán)境鹽度較低時(shí)，仔魚為維持體內(nèi)滲透壓穩(wěn)定而消耗的能量也減少[13-14，17]。

趙明等對(duì)七帶石斑魚（Epinephelus septemfasciatus）仔魚的最適生存研究發(fā)現(xiàn)，此魚類在鹽度為3.0%～3.5%時(shí)仔魚存活系數(shù)為24.70、23.27[16]。王貴寧等對(duì)卵形鯧鲹（Trachinotus ovatus）初孵仔魚的存活和發(fā)育研究發(fā)現(xiàn)，鹽度為2.8%～3.6%時(shí)仔魚存活率較高，均大于5.0%；在最適溫度24 ℃下，最佳鹽度為3.2%，此時(shí)仔魚存活系數(shù)最高[22]。王涵生等觀察比較發(fā)現(xiàn)，在鹽度為3.8%～4.1%、2.1%～2.4%的2個(gè)鹽度梯度內(nèi)，赤點(diǎn)石斑魚（Epinephelus akaara）仔魚的SAI值為3.19～12.42[23]。如果只有SAI值大于5的仔魚才可能被進(jìn)一步培育成苗，則本試驗(yàn)中除了1%鹽度梯度以外基本都可以，但最佳范圍鹽度梯度較小。

強(qiáng)俊等研究發(fā)現(xiàn)，在不同鹽度下，奧尼羅非魚（Oreochromis mossambicus）仔魚24 h的死亡率顯著不同，鹽度越高則畸形率越高、死亡個(gè)體越多、仔魚存活系數(shù)越低[24]。本試驗(yàn)中，在鹽度0.4%、0.6%時(shí)葉爾羌高原鰍仔魚存活時(shí)間最長(zhǎng)，可達(dá)10 d；1%梯度下僅能存活48 h，隨著鹽度的升高死亡數(shù)顯著上升，SAI值直線下降。

王杰等、易祖盛等研究發(fā)現(xiàn)，鹽度對(duì)初孵仔魚SAI值的影響主要通過對(duì)滲透調(diào)節(jié)的影響來(lái)實(shí)現(xiàn)；在不同鹽度下，仔魚需要消耗能量調(diào)節(jié)其滲透壓，初孵仔魚能夠在鹽度范圍較廣的水體中存活，機(jī)體結(jié)構(gòu)與組分使其保持了一定滲透，并有能力維護(hù)其滲透，可主動(dòng)調(diào)節(jié)滲透壓以保持平衡[17，25]。本試驗(yàn)的結(jié)論與之一致，內(nèi)陸水域咸淡水棲息的高原鰍魚類具有不同的滲透調(diào)節(jié)，仔魚在一定鹽度范圍內(nèi)存活，鹽度范圍內(nèi)SAI值呈拋物線趨勢(shì)，先上升后下降，回落差異顯著。

致謝：在鹽度分析和文章修訂中得到了中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所馬寶珊博士的大力協(xié)助，謹(jǐn)致謝忱！

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