關(guān)春林+石玉星

摘要：采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了7種復(fù)配劑（30%醚菌酯和95.2%百菌清按照不同體積混配，其濃度梯度均為0微克/毫升、0.1微克/毫升、1微克/毫升、5微克/毫升、10微克/毫升、50微克/毫升）對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌進(jìn)行毒力測(cè)定。結(jié)果表明：相對(duì)于醚菌酯或百菌清單劑，混配后均表現(xiàn)出增效作用，其中醚菌酯和百菌清按照體積比為3∶1的增效作用最為明顯，EC50為1.4716微克/毫升，共毒系數(shù)為410.12。因此在對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的防治中，建議使用醚菌酯與百菌清混配藥劑防治效果最佳。

關(guān)鍵詞：蘋果斑點(diǎn)落葉病菌；殺菌劑；混配；增效作用

基金項(xiàng)目：國(guó)家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201203030）

中圖分類號(hào)： S436.611 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A DOI編號(hào)： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.01.018

蘋果斑點(diǎn)落葉病又稱為褐紋病，褐色葉枯病，褐色斑點(diǎn)病及大星病。該病最早于1956年報(bào)道于日本巖手縣，之后成為日本蘋果樹上僅次腐爛病的第二大病害。自20世紀(jì)70年代末在我國(guó)各蘋果產(chǎn)區(qū)都時(shí)有發(fā)生，以渤海灣和黃河古道地區(qū)受害較重。主要為害葉片，造成早落，也為害新梢和果實(shí)，影響樹勢(shì)和產(chǎn)量。葉片染病初期出現(xiàn)褐色圓點(diǎn)，其后逐漸擴(kuò)大為紅褐色，邊緣紫褐色，病部中央常具一深色小點(diǎn)或同心輪紋。天氣潮濕時(shí)，病部正反面均可長(zhǎng)出墨綠色至黑色霉?fàn)钗?，即病菌的分生孢子梗和分生孢子。夏、秋季高溫高濕，病菌繁殖量大，發(fā)病周期縮短，秋梢部位葉片病斑迅速增多，一片病葉上常有病斑10～20個(gè)，多斑融合成不規(guī)則大斑，葉即穿孔或破碎，生長(zhǎng)停滯，枯焦脫落。葉柄、1年生枝和徒長(zhǎng)枝上，出現(xiàn)褐至灰褐色病斑，邊緣有裂縫。幼果出現(xiàn)1～2毫米的小圓斑，有紅暈，后期變黑褐色小點(diǎn)或成瘡痂狀。影響葉片正常生長(zhǎng)，常造成葉片扭曲和皺縮，病部焦枯，易被風(fēng)吹斷，殘缺不全。果實(shí)染病，在幼果果面上產(chǎn)生黑色發(fā)亮的小斑點(diǎn)或銹斑。病部有時(shí)呈灰褐色瘡痂狀斑塊，病健交界處有龜裂，病斑不剝離，僅限于病果表皮，但有時(shí)皮下淺層果肉可呈干腐狀木栓化。蘋果斑點(diǎn)落葉病，造成蘋果早期落葉，引起樹勢(shì)衰弱，果品產(chǎn)量和質(zhì)量降低，貯藏期還容易感染其他病菌造成腐爛，是造成蘋果減少的重要病害。

蘋果斑點(diǎn)落葉病病原菌主要以菌絲和分生孢子在落葉上、 一年生枝的葉芽和花芽以及枝條病斑上越冬。目前防治該病的藥劑品種種類繁多，但防治效果參差不齊，從眾多藥劑中篩選出高效低毒的藥劑對(duì)防治該病具有重要意義。我們選出了百菌清、醚菌酯兩種藥劑將其用于混配實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)出最佳的配比來抑制蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的生長(zhǎng)從而達(dá)到防治蘋果斑點(diǎn)落葉病的目的。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

室內(nèi)毒力測(cè)定所采用的蘋果斑點(diǎn)落葉病菌由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

30%醚菌酯可溶粉劑（陜西恒田化工有限公司）。

95.2%百菌清可溶粉劑（江蘇利民化工股份有限公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 PDA營(yíng)養(yǎng)液的配制 將馬鈴薯200克洗凈去皮切成小塊，加1000毫升水煮沸30分鐘左右，撈起用多層紗布過濾去渣，過濾后在溶液內(nèi)加入瓊脂20克和葡萄糖粉20克，小火煮至瓊脂完全溶解，補(bǔ)水至足量即可。然后趁熱將其分裝于三角瓶?jī)?nèi)，瓶口塞好棉塞。然后置于高壓消毒鍋內(nèi)滅菌30分鐘，并趁熱排成斜面，保存好待用。

1.2.2 單劑及復(fù)配劑的配制

單劑：先用蒸餾水將醚菌酯和百菌清原藥稀釋，配制成1000微克/毫升的母液，試驗(yàn)時(shí)再將母液按照濃度梯度稀釋，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取6個(gè)不同濃度梯度（0微克/毫升 0.1微克/毫升、1微克/毫升、5微克/毫升、10微克/毫升、50微克/毫升）。

復(fù)配劑：將醚菌酯與百菌清按照體積比為（1∶1、1∶3 3∶1、1∶4、4∶1、1∶7、7∶1）設(shè)置配比組合，每個(gè)配比設(shè)6個(gè)不同濃度（0微克/毫升、 0.1微克/毫升、1微克/毫升、5微克/毫升、10微克/毫升、50微克/毫升）。

1.2.3室內(nèi)毒力測(cè)定 本實(shí)驗(yàn)采用的是菌絲生長(zhǎng)速率法，來測(cè)定醚菌酯與百菌清復(fù)配劑對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的毒力。取某一復(fù)配劑稀釋成一系列濃度梯度的藥液，在無菌操作條件下，吸取1毫升藥液倒入的滅菌培養(yǎng)皿中，然后往其中倒入9毫升40℃～50℃滅菌培養(yǎng)基，制成不同濃度的含藥平板，以不含藥劑的滅菌培養(yǎng)皿做空白對(duì)照。每個(gè)濃度重復(fù)3次。用打孔器在已培養(yǎng)好的蘋果斑點(diǎn)落葉病病原菌菌落邊緣往中央一圈圈切取菌餅，用接種針將切取好的菌餅接種于已冷卻凝固的培養(yǎng)皿中央，蓋上皿蓋，然后將培養(yǎng)皿堆放整齊置于25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待空白對(duì)照的病原菌菌落即將擴(kuò)展到全皿時(shí)，用十字交叉法測(cè)量各不同濃度藥液菌落直徑。

1.3數(shù)據(jù)處理

統(tǒng)計(jì)菌落擴(kuò)展直徑并計(jì)算出抑制率，然后運(yùn)用DPS軟件計(jì)算出復(fù)配劑的毒力回歸方程及EC50值。菌絲生長(zhǎng)抑制率（%）=[1-（處理菌落平均直徑-菌餅直徑）/（空白對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑）]×100。

采用孫云沛公式（Sun法）求出共毒系數(shù)（CTC）設(shè)復(fù)配劑為M，構(gòu)成M的單劑分別作為A、B，毒理指數(shù)設(shè)為TI，百分含量為P，以A作為標(biāo)準(zhǔn)藥劑。其中增效作用判斷：CTC≥120為增效作用；80≤CTC<120為相加作用；CTC<80為拮抗作用。

2 結(jié)果與分析

測(cè)定醚菌酯、百菌清及兩者不同比例混配后對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的毒力，計(jì)算EC50和95%置信區(qū)限，見表1。

由表1可以看出，兩種單劑對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的毒力以醚菌酯較高，其EC50為5.1921微克/毫升，百菌清較低，其EC50為11.77微克/毫升。

由表1可知，醚菌酯EC50為5.1921微克/毫升，百菌清EC50為11.77，醚菌酯與百菌清混配后EC50依次為5.1645微克/毫升 ，3.6014微克/毫升，7.8639微克/毫升，4.5708微克/毫升，4.8218微克/毫升，3.6272微克/毫升，1.4716微克/毫升。經(jīng)孫沛云公式計(jì)算得出各體積比復(fù)配劑的共毒系數(shù)（CTC）依次為181.82，342.77，74.33，222.29，115.77，246.44，

410.12。

根據(jù)判斷標(biāo)準(zhǔn)可知：醚菌酯和百菌清復(fù)配3（4∶1）的CTC<80，表現(xiàn)為拮抗作用，復(fù)配劑5（7∶1）的CTC在80～120之間，表現(xiàn)為相加作用，復(fù)配劑1（1∶4）、復(fù)配劑2（1∶1）、復(fù)配劑4（1∶7）、復(fù)配劑6（1∶3）和復(fù)配劑7（3∶1）的CTC>120，表現(xiàn)為增效作用。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)測(cè)得了醚菌酯、百菌清及其7種比例復(fù)配對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的毒力，結(jié)果表明兩種殺菌劑按照不同比例復(fù)配，表現(xiàn)增效效果的配比分別為1∶4、1∶1、1∶7、1∶3、3∶1，其共毒系數(shù)（CTC）分別為181.82、342.77、222.29、246.44、410.12。表現(xiàn)為相加作用的配比為7∶1，其共毒系數(shù)（CTC）為115.77。表現(xiàn)為拮抗作用的配比為4：1，其共毒系數(shù)（CTC）為74.33。

根據(jù)制劑的增效配比、成本核算、用藥量等因素的影響，確定共毒系數(shù)為410.12的3：1醚菌酯和百菌清配比為最佳增效配比。室內(nèi)試驗(yàn)表明，醚菌酯和百菌清的混配，有明顯的增效作用，同時(shí)兼具兩種殺菌劑的作用特點(diǎn)，是防治蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的較好配比，并且如今的殺菌劑合理混配不僅能夠提高殺菌劑的藥效、擴(kuò)大防治范圍、節(jié)約勞動(dòng)力、減少殺菌劑用量、降低農(nóng)業(yè)成本、減少環(huán)境的污染等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)能夠有效延緩蘋果斑點(diǎn)落葉病菌抗藥性的產(chǎn)生和發(fā)展。為了延緩蘋果斑點(diǎn)落葉病菌抗藥性的發(fā)展，應(yīng)展開各種殺菌劑的混配深入研究，以便找出高效合理的復(fù)配藥劑。

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作者簡(jiǎn)介：關(guān)春林，碩士，助理研究員，研究方向：旱作農(nóng)業(yè)研究。