溫海蔚，劉燕霏，楊建德

衣原體嚴(yán)格在細(xì)胞內(nèi)寄生，經(jīng)過特殊的生長周期以二等分裂繁殖原核細(xì)胞型微生物，現(xiàn)普遍認(rèn)為是介于立克次體和病毒之間的生命體。牛衣原體病在世界各地均有發(fā)生，在我國新疆、內(nèi)蒙及西北等地多發(fā)，給畜牧業(yè)及公共衛(wèi)生造成不同程度的影響[1-3]。在目前已有資料中，1985至2015年間我國一共檢測了22個地區(qū)的牛衣原體病的感染情況。僅有上海市沒有檢測到牛衣原體病的感染，其余21個地區(qū)都存在有牛衣原體感染的相關(guān)報道[4-6]。國內(nèi)已有李永琴等報道寧夏回族自治區(qū)牛衣原體抗體陽性率為25.8%（61/224）[7]。洪尼寧等報道貴州省牛衣原體陽性率為2.86%（24/838）[8]。在青海省也已有關(guān)于牛衣原體的相關(guān)調(diào)查，祁小英等報道青海省樂都縣牛衣原體抗體檢測陽性率為2.16%（5/232）[9]?；诒镜貐^(qū)防疫需求，本項目對青?；ブh開展了牛衣原體病的血清學(xué)調(diào)查，以期闡明該病在這些地區(qū)的流行情況，為防制本病提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 待檢血清

青海省互助縣部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)及兩個規(guī)?；B(yǎng)殖場牛血清765份，其中巴扎鄉(xiāng)、松多鄉(xiāng)、加定鎮(zhèn)為牦牛血清，共62份，其余為乳牛血清703份。由所需要地區(qū)的獸醫(yī)站以及養(yǎng)殖場駐場獸醫(yī)輔助無菌采血，凝固后分離血清，冷凍保存待檢。

1.2 診斷液

衣原體間接血凝抗原、稀釋液、陰性血清、陽性血清購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號150430。

2 方法

2.1 稀釋血清

96孔板每孔加稀釋液75 μL，取待檢血清25 μL加入第1孔，以4倍稀釋，從第1孔稀釋至第3孔（即 1∶4、1∶16、1∶64），第 3孔棄去 25 μL，孔內(nèi)液體量仍為75 μL。同一時間，在同一板上設(shè)陽性對照2孔，陰性對照2孔，空白對照2孔。

2.2 加抗原

在每個孔中加入稀釋好的抗原25 μL，放在微型振蕩器上，振蕩2 min后蓋上一次性封口膜，然后在37℃下作用2 h判定結(jié)果。

2.3 結(jié)果判定

對照各孔均成立，則被檢血清1∶16孔出現(xiàn)“++”以上者為陽性；1∶4孔出現(xiàn)“+”以下者為陰性；1∶4孔“++”至1∶16孔“+”以下者為可疑[10-12]。

3 結(jié)果與分析

經(jīng)過對765份送檢血清檢測衣原體抗體，衣原體抗體陽性檢出率為26.1%（200/765）。松多鄉(xiāng)、巴扎鄉(xiāng)、加定鎮(zhèn)3個牦牛血清采集點中均檢測到衣原體抗體，采集點陽性檢出率為100.0%；其余9個乳牛送檢點中6個檢測到衣原體抗體，采集點陽性檢出率66.7%。檢測結(jié)果顯示，衣原體在各采集點中存在不同程度的感染。對不同種類的牛、不同送檢點衣原體抗體陽性檢出率進(jìn)行了分析（表 1）。

表1 不同種類牛衣原體抗體陽性檢出率統(tǒng)計表

由表1可知，乳牛送檢樣品陽性檢出率為25.6%（180/703），牦牛送檢樣品陽性檢出率為32.3%（20/62）。牦牛送檢樣品陽性檢出率高于乳牛送檢樣品陽性率。經(jīng)過卡方檢驗p＝1.31（2.71≤p≤3.84，差異顯著），對乳牛和牦牛衣原體抗體陽性檢出率比較差異不顯著。

通過圖1對不同采集點進(jìn)行分類統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)五十鎮(zhèn)與東溝陽性檢出率居高，分別有71.4%（10/14）和66.7%（4/6）；南門峽鎮(zhèn)、五峰鎮(zhèn)以及威遠(yuǎn)鎮(zhèn)未檢測出衣原體抗體陽性；松多鄉(xiāng)、加定鎮(zhèn)及巴扎鄉(xiāng)所采集的血清為牦牛血清。

圖1 不同采集點牛衣原體抗體陽性檢出率

4 討論

本次調(diào)查包含12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集點，其中另有兩個規(guī)?；B(yǎng)殖場，調(diào)查結(jié)果具有一定的代表性。在對765份送檢血清進(jìn)行檢測后，衣原體抗體陽性檢出率為26.1%（200/765）。其中五十鎮(zhèn)、東溝陽性檢出率較高，分別為71.4%（10/14）和66.7%（4/6）。南門峽鎮(zhèn)、五峰鎮(zhèn)以及威遠(yuǎn)鎮(zhèn)未檢測出衣原體抗體陽性，結(jié)果相差較大。分析其原因，五十鎮(zhèn)和東溝鄉(xiāng)地理位置位于較偏遠(yuǎn)山區(qū)，牛均為本地牛且養(yǎng)殖方式多以農(nóng)戶放養(yǎng)為主，放養(yǎng)較為集中，牛衣原體發(fā)病后會迅速感染一些抵抗力較弱的牛，導(dǎo)致感染現(xiàn)狀比較嚴(yán)重。南門峽鎮(zhèn)、五峰鎮(zhèn)、威遠(yuǎn)鎮(zhèn)在近幾年以購買外地牛為主，購買的外地牛多數(shù)經(jīng)過衣原體病免疫。本次調(diào)查對乳牛和牦牛進(jìn)行了分類統(tǒng)計，其中乳牛和牦牛陽性檢出率為25.6%（180/703）和32.3%（20/62）。乳牛的衣原體抗體陽性檢出率與馬怡雋[12]等報道的青海省26.4%（60/227）的檢測結(jié)果相近。牦牛的衣原體陽性檢出率與馬德禮[13]等報道的青海省門源縣牦牛衣原體陽性檢出8.0%（16/200）差別較大。

5 結(jié)論

本次通過對青海省互助縣牛衣原體病的調(diào)查，我們了解到青海省互助縣牛衣原體病感染現(xiàn)狀較為嚴(yán)重，有部分地區(qū)陽性檢出率很高，針對這些鄉(xiāng)鎮(zhèn)可采取加強免疫措施；但其他一些地區(qū)未檢測出陽性抗體，地區(qū)之間存在較大差異，這為該縣的牛衣原體病防治工作提供了科學(xué)依據(jù)。

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