*

（1.西南大學(xué)植物保護學(xué)院，重慶 400716；2.湖南省煙草公司邵陽市公司，湖南 邵陽 422001）

煙草赤星病室內(nèi)防治藥劑篩選及田間防治效果

陳杰1，李六英1，高敏1，馬冠華1*，陳國康1，于慶濤2

（1.西南大學(xué)植物保護學(xué)院，重慶 400716；2.湖南省煙草公司邵陽市公司，湖南 邵陽 422001）

采用菌絲生長速率法和孢子萌發(fā)法，測定了10種殺菌劑對煙草赤星病菌（Alternaria alternata）的抑菌效果，采用田間小區(qū)試驗對活性較好的4種殺菌劑進行防治效果比較。10種農(nóng)藥室內(nèi)毒力試驗結(jié)果顯示，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、10%多抗霉素可濕性粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑抑制菌絲生長和孢子萌發(fā)的效果好；430 g/L戊唑醇懸浮劑抑制孢子萌發(fā)單一效果好；40%腈菌唑可濕性粉劑、40%菌核凈可濕性粉劑和 6%嘧肽霉素水劑對菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制效果都差。4種農(nóng)藥田間試驗表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和 32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑對煙草赤星病的防效分別為90.60%、88.21%、87.21%和83.84%，均表現(xiàn)出良好的效果，推薦使用此4種殺菌劑用于生產(chǎn)上煙草赤星病的防控。

煙草赤星?。凰巹┖Y選；防治效果

煙草赤星病（Alternaria alternata）是煙草成熟后期重要的葉部真菌病害，嚴(yán)重威脅我國各地?zé)熑~生產(chǎn)[1-3]。該病潛育期短、流行速度快，在煙株打頂后，病菌從下部葉片開始自下而上逐步發(fā)展，環(huán)境適宜時，短期內(nèi)即可造成大流行，給煙葉生產(chǎn)帶來巨大損失[4-5]。

化學(xué)藥劑防治仍是控制煙草赤星病的最主要措施[6-7]，目前國內(nèi)防治該病的化學(xué)藥劑以菌核凈為主。菌核凈為內(nèi)吸性殺菌劑，長期大量使用易產(chǎn)生抗藥性，在部分煙區(qū)已表現(xiàn)出防效降低現(xiàn)象[8-9]。其農(nóng)藥殘留較高，可大大影響煙葉品質(zhì)[10]。為有效控制煙草赤星病的發(fā)生及流行，延緩該病菌的抗藥性發(fā)展，篩選高效輪換藥劑愈加迫切。本研究按照化學(xué)分類選擇10種不同作用機理的藥劑進行室內(nèi)毒力測定，篩選出室內(nèi)毒力活性較好的4種藥劑進行田間小區(qū)防治試驗，擬找出對煙草赤星病防控效果較好可用于交替或輪換的藥劑，為煙草安全生產(chǎn)提供一定依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試病原菌：煙草赤星病菌YN-1由西南大學(xué)植物生態(tài)病理研究所提供。

供試煙草品種：K326，由玉溪中煙種子生產(chǎn)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

供試培養(yǎng)基為馬鈴薯瓊膠培養(yǎng)基(PDA)：馬鈴薯200 g；瓊膠17～20 g；葡萄糖20 g；水1000 mL。

供試藥劑：50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑（美國富美實公司）、430 g/L戊唑醇懸浮劑（拜耳作物科學(xué)中國有限公司）、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（利民化工股份有限公司）、40%腈菌唑可濕性粉劑（美國陶氏益農(nóng)公司）、10%多抗霉素可濕性粉劑（日本科研制藥株式會社）、6%嘧肽霉素水劑（大連奧德植保有限公司）、32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑（青島潤生農(nóng)化有限公司）、40%菌核凈可濕性粉劑（江西禾益化工股份有限公司）、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑（四川國光農(nóng)化股份有限公司）和30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑（天津漢邦植物保護劑有限責(zé)任公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 室內(nèi)藥劑篩選 （1）對病菌菌絲生長的抑制作用測定采用菌絲生長速率法[11-12]。將供試菌株接種于PDA平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，制備直徑為6 mm的菌餅備用。各藥劑稀釋的濃度梯度依次為50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑：0.5、2.5、5、10、50 μg/mL；430 g/L戊唑醇懸浮劑：4.3、17.2、43、86、340 μg/mL；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑：0.01、0.05、0.1、0.5、5 μg/mL；40%腈菌唑可濕性粉劑：5、10、50、100、500 μg/mL；10%多抗霉素可濕性粉劑：0.5、1、5、25、50 μg/mL；6%嘧肽霉素水劑：120、300、600、1500、3000 μg/mL；40%菌核凈可濕性粉劑：1、5、10、50、100 μg/mL；32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑：0.026、0.13、1.3、2.6、6.5 μg/mL；30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑：0.05、0.5、2.5、10、25 μg/mL；30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑：0.45、0.9、1.8、4.5、9 μg/mL；在培養(yǎng)皿中加入1 mL配好的藥液和9 mL培養(yǎng)基，混勻，制成不同含藥濃度的PDA，將直徑為6 mm的菌餅接種于含藥PDA培養(yǎng)基上。設(shè)加1 mL無菌水的PDA培養(yǎng)基為對照，每處理3次重復(fù)。置于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，于7 d后用十字交叉法測量菌落直徑[8]，求出毒力回歸方程，并計算各藥劑對病菌的有效抑制中濃度（EC50）及相關(guān)系數(shù)（R）。

（2）對病菌孢子萌發(fā)的抑制作用測定。用無菌水調(diào)節(jié)孢子濃度（10×20倍下每視野20～30個），配成孢子懸浮液。配制各待測藥劑濃度梯度同上。用移液槍吸取50 μL孢子懸浮液于凹玻片內(nèi)，再分別加入50 μL各濃度梯度的藥液，配成含系列藥劑質(zhì)量濃度的孢子懸浮液。設(shè)不加藥液處理為對照，每處理 3次重復(fù)。將凹玻片置于培養(yǎng)皿內(nèi)保濕培養(yǎng)，24 h后鏡檢孢子萌發(fā)情況，每處理隨機觀察3個視野，共100個孢子。計算孢子萌發(fā)率及藥劑對孢子萌發(fā)的抑制率，求出毒力回歸方程，計算出各藥劑對煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制中濃度(EC50)及相關(guān)系數(shù)(R)[12]。

1.2.2 田間藥效試驗 （1）試驗設(shè)計：試驗地為重慶市涪陵區(qū)焦石鎮(zhèn)，土壤肥力基本一致。設(shè)置4個處理，即A：10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（有效成分用量為150 g/hm2）；B：32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑（有效成分用量為487.5 g/hm2）；C：30%苯醚·丙環(huán)唑懸浮劑（有效成分用量為450 g/hm2）；D：30%肟菌·戊唑醇懸浮劑（有效成分用量為 225 g/hm2）。施用等量清水（CK）作對照，每個處理3次重復(fù)，共15個小區(qū)，采用隨機區(qū)組排列，試驗田四周設(shè)保護行。按照各藥劑要求的濃度，分別于2015年7月13日、7月19日和7月31日施藥，共施藥3次，第1次施藥時未發(fā)生赤星病。

（2）數(shù)據(jù)調(diào)查方法：在第3次用藥后20 d，每個小區(qū)采用5點法取樣，每點調(diào)查5株，以葉片為單位全株調(diào)查。

病害嚴(yán)重度分級標(biāo)準(zhǔn)：0級，全葉無病；1級，病斑面積占葉片面積的1%以下；3級，病斑面積占葉片面積的2%～5%；5級，病斑面積占葉片面積的6%～10%；7級，病斑面積占葉片面積的11%～20%；9級，病斑面積占葉片面積的21%以上。參照文獻[12]計算病情指數(shù)和防治效果。

2 結(jié) 果

2.1 殺菌劑對煙草赤星病菌絲生長的抑制效果

10種殺菌劑對煙草赤星病菌絲的生長都有一定的抑制作用（表1）。不同藥劑的抑制效果有著明顯差異，其中，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑、10%多抗霉素可濕性粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑對煙草赤星病菌菌絲的抑制效果較好，EC50分別是0.1448、0.9947、1.6058、2.2864、4.4691和5.0088 μg/mL；而40%菌核凈可濕性粉劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑和 40%腈菌唑可濕性粉劑的抑制效果較差，EC50分別為26.1781、27.5984和34.4867 μg/mL；6%嘧肽霉素水劑對菌絲的抑制效果最差，EC50為480.8993 μg/mL。

2.2 殺菌劑對煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果

10種殺菌劑對煙草赤星病菌的孢子萌發(fā)都有一定的抑制作用，但各藥劑的抑制效果明顯不同（表 2）。其中，32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑、10%多抗霉素可濕性粉劑、30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑對赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果較好，EC50分別為0.3390、0.5840、0.8613、1.0134、1.2183、4.3815和4.4517 μg/mL；40%腈菌唑可濕性粉劑和 40%菌核凈可濕性粉劑的抑制效果較差，EC50分別為15.4551和16.2605 μg/mL；6%嘧肽霉素水劑的抑制效果最差，EC50為 205.4619 μg/mL。

表1 10種殺菌劑對煙草赤星病菌菌絲生長的抑制效果Table 1 The activities against mycelial growth of Tobacco Brown Spot of ten fungicides

表2 10種殺菌劑對煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果Table 2 The activities against spore germination of Tobacco Brown Spot of ten fungicides

2.3 殺菌劑對煙草赤星病田間小區(qū)防治效果

4種化學(xué)藥劑對煙草赤星病都有較好的防治效果（表3）。10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑和30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑防效分別是90.60%、88.21%和87.21%，3種藥劑對煙草赤星病的防治效果無顯著差異。其中10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑的防效顯著好于32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑，但32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑與 30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑之間防效無顯著差異。

表3 4種殺菌劑對煙草赤星病的田間小區(qū)防治試驗Table 3 The field experiment effect of Tobacco Brown Spot control of four fungicides

3 討 論

煙草赤星病主要為害成熟期煙葉，發(fā)生嚴(yán)重時對產(chǎn)量影響極大，生產(chǎn)上長期使用菌核凈已使得部分地區(qū)病菌抗藥性發(fā)展較快[13]，導(dǎo)致防治效果不理想。本試驗通過對赤星病菌的菌絲生長和孢子萌發(fā)測定表明，40%菌核凈可濕性粉劑對病菌的EC50值遠高于10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑等4種藥劑，表明菌核凈防治效果變差的根本原因是對病菌的抑制作用減弱，這與李梅云等[8]的研究結(jié)果一致。

不同種類的殺菌劑對病原菌的作用機制各有特點，因此，篩選更多種類的有效藥劑是必要的。本研究按化學(xué)分類選擇了常見的殺菌劑作為代表，將各種殺菌劑在相同實驗條件下進行比較分析，便于篩選效果好的殺菌劑。其中，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑為三唑類內(nèi)吸性殺菌劑，咪鮮胺錳鹽為咪唑類殺菌劑，作用機理都為影響甾醇類生物合成，使菌體細胞膜功能受到破壞，導(dǎo)致病原菌死亡。本研究中430 g/L戊唑醇懸浮劑對抑制煙草赤星病孢子萌發(fā)單一效果好，抑制菌絲生長效果比其他幾種三唑類殺菌劑差，盡管三唑類的殺菌劑具有相似的作用機制，但不同的三唑類殺菌劑在抵抗相同的病原菌方面也會表現(xiàn)出不同的抗菌活性和機制，從而防治效果間也會存在差異。趙華等[14]研究表明，戊唑醇對鏈格孢分生孢子萌發(fā)的抑制效果好，對菌絲生長和分生孢子盤形成的抑制作用差。多抗霉素為多氧嘧啶核苷類，作用機理為抑制細胞壁幾丁質(zhì)的合成；嘧菌酯為甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，其作用機理是抑制線粒體呼吸作用；肟菌酯為甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，作用機理為通過阻止病菌細胞ATP的合成，從而抑制其線粒體呼吸來達到抑菌的效果。本研究結(jié)果表明，三唑類苯醚甲環(huán)唑分別與三唑類丙環(huán)唑，甲氧基丙烯酸酯類嘧菌酯復(fù)配，對病菌孢子萌發(fā)和菌絲生長抑制效果好。而菌核凈的作用機制可能是干擾膜上脂質(zhì)的合成[15]，與以上幾種藥劑的抑菌機理有著差異。生產(chǎn)上可以選擇多種防治效果好的殺菌劑輪換使用，從而減輕抗藥性，提高產(chǎn)量。

4 結(jié) 論

10種農(nóng)藥室內(nèi)毒力試驗結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、10%多抗霉素可濕性粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和 30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑對赤星病菌菌絲生長和孢子萌發(fā)均有好的抑制效果；田間試驗結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、30%肟菌酯·戊唑醇懸浮劑、30%苯醚甲環(huán)唑·丙環(huán)唑懸浮劑和32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑4種農(nóng)藥對煙草赤星病有較好的防治效果，可在生產(chǎn)上輪換或交替使用來防治煙草赤星病，提高煙草種植的經(jīng)濟效益。

[1] 譚仲夏，楊龍祥. 煙草赤星病的生物防治研究現(xiàn)狀及展望[J]. 中國煙草學(xué)報，2005，11（3）：34-38．

[2] 劉學(xué)敏，李大壯. 煙草赤星病研究現(xiàn)狀及存在問題[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2000（1）：80-85．

[3] 易龍，肖崇剛. 煙草赤星病防治研究進展[J]. 植物保護，2003（5）：10-14．

[4] SHEW H D, Lucas G B. Compendium of tobacco diseases[M]. American Phytopathological Society, 1991.

[5] 方宇澄. 中國煙草病蟲害彩色圖譜志[M]. 合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，1992．

[6] 成巨龍，陳明山，伊志奇. 防治煙草赤星病的藥劑篩選[J]. 煙草科技，1998（1）：46-47．

[7] 蔡奎男. 煙草赤星病發(fā)生與防治研究[J]. 煙草科技，1992（4）：42-44．

[8] 李梅云，祝明亮. 煙草赤星病菌對菌核凈的抗藥性測定[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2007，20（3）：412-416．

[9] 孟建玉，曹毅，陸寧，等. 貴州省煙草赤星病菌對菌核凈的抗藥性[J]. 植物保護學(xué)報，2013，40（5）：479-480．

[10] 張亞，何可佳，周曙光，等. 六種農(nóng)藥防治煙草赤星病藥效試驗[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2007（2）：37．

[11] 陳年春. 農(nóng)藥生物測定技術(shù)[M]. 北京：北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2001．

[12] 方中達. 植病研究方法[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998．

[13] 劉丹，黎定軍，陳武，等. 8種殺菌劑對煙草赤星病菌的室內(nèi)毒力測定[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（9）：72-74．

[14] 趙華，周天倉，程晶晶，等. 三唑類殺菌劑對蘋果褐斑病菌生長發(fā)育的毒力及其防病作用[J]. 林業(yè)科學(xué)，2009（3）：68-73．

[15] 石志琦，周明國，葉鐘音. 核盤菌對菌核凈的抗藥性機制初探[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2000（2）：47-51．

Indoor Screening and Field Trial of Fungicides against Tobacco Brown Spot

CHEN Jie1, LI Liuying1, GAO Min1, MA Guanhua1*, CHEN Guokang1, YU Qingtao2
(1. College of Plant Protection, Southwest University, Chongqing 400716, China; 2. Shaoyang City Branch of Hunan Provincial Tobacco Corporation, Shaoyang, Hunan 422001, China)

The aims of this investigation were to screen for effective fungicides to control tobacco brown spot. The indoor toxicities of ten fungicides againstA. alternatawere tested by the method of colonial growth-rate and spore germination. The field trial was conducted with four selected fungicides. The results of the indoor experiment showed that the fungicides with strong activities against both mycelia growth and spore germination ofA. alternatawere difenoconazole 10% WG , polyoxin 10% WP, prochloraz-manganese chloride complex 50% WP, difenoconazole·azoxystrobin 32.5% SE, difenoconazole·propicondzole 30% SE and trifloxystrobin·tebuconazole 30% SE. In addition, tebuconazole 430 g/L SC had strong activities against spore germination but not mycelia growth ofA. alternate. The fungicides with weak inhibitory activities were myclobutanil 40% WP, dimetachlone 40% WP and cytosinpeptidemycin 6% AS. The results of the field experiment indicated that the control effect of difenoconazole 10% WG, trifloxystrobin·tebuconazole 30% SE, difenoconazole·propicondzole 30% SE and difenoconazole·azoxystrobin 32.5% SE were 90.60%, 88.21%, 87.21% and 83.84%, respectively. These four fungicides could be used in control of tobacco brown spot.

Alternaria alternata; screening fungicides; control effect

S435.72

1007-5119（2017）01-0073-05

10.13496/j.issn.1007-5119.2017.01.013

重慶市煙草專賣局（公司）項目“重慶煙草有害生物綜合治理專項”（NY20140401070002）

陳 杰（1993-），女，碩士研究生，主要從事植物病原學(xué)研究。E-mail：21616122@zju.edu.cn。*通信作者，E-mail：nikemgh@swu.edu.cn

2016-06-02

2016-11-03