薛文宇+曾艷+韋星呈

[摘要]目的 研究人類重組激活基因2（RAG2）5′近端染色質(zhì)可接近區(qū)域調(diào)控RAG2表達(dá)的分子機(jī)制。方法 采用染色質(zhì)可接近性實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（CHART-PCR）分析RAG2基因5′近端區(qū)域的DNase Ⅰ超敏位點(diǎn)（DHS），比較RAG陽(yáng)性和陰性淋巴細(xì)胞以及非淋巴細(xì)胞的染色質(zhì)開(kāi)放狀態(tài)變化。采用雙熒光素酶報(bào)告基因分析DHS的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性，采用膠遷徙試驗(yàn)和染色質(zhì)免疫沉淀試驗(yàn)證實(shí)GATA3的體外（in vitro）和在體（in vivo）結(jié)合，采用PCR定點(diǎn)突變和顯性負(fù)突變體技術(shù)證實(shí)GATA3對(duì)RAG2基因的調(diào)控作用。結(jié)果 人RAG2基因5′上游近端區(qū)域染色質(zhì)在T與B細(xì)胞中處于不同的開(kāi)放狀態(tài)，RAG陽(yáng)性T細(xì)胞的核心啟動(dòng)子活性與其特異性DHS相吻合。T細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA3結(jié)合于T細(xì)胞特異性DHS的高度保守區(qū)域，特異性上調(diào)報(bào)告基因及在體RAG2 mRNA在T細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)論 RAG2基因5′近端區(qū)域通過(guò)染色質(zhì)開(kāi)放狀態(tài)變化調(diào)控基因表達(dá)的特異性。GATA3與高度保守的DHS區(qū)域結(jié)合，上調(diào)內(nèi)源性人RAG2在T細(xì)胞中的表達(dá)。

[關(guān)鍵詞]重組激活基因；染色質(zhì)可接近性；啟動(dòng)子；順式作用元件；轉(zhuǎn)錄因子；T淋巴細(xì)胞

[中圖分類號(hào)] R-33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2017）01（c）-0007-07

[Abstract]Objective To study molecular mechanism of the regulation of RAG2 expression regulated the human recombination activating gene 2 （RAG2） 5′proximal chromatin accessible areas.Methods To compare the open states change of chromatin of RAG positive and negative lymphocytes as well as non lymphocyte chromatin，chromatin accessibility by real-time polymerase chain reaction （CHART-PCR） was used for DNase Ⅰ analysis of RAG2 gene 5′proximal regions of hypersensitive sites （DHS）.Double luciferases reporter assay was used to examine the transcriptional regulation effects of the DHS regions.Electrophoresis mobility shift assay and chromatin immunoprecipitation assays were used to detect the binding of GATA3 in vitro or in vivo.PCR site-directed mutant assay and dominant-negative mutant assay were used to identify the regulatory effects of GATA3 on the reporter gene （in vitro），as well as on RAG2 gene （in vivo）.Results In T and B cells，the chromatin structures of 5′ proximal region of human RAG2 were in distinct open states.In RAG positive T cells，the activity of RAG2 core promoter corresponded to its specific DHS.GATA3，a T-cell specific transfactor，bound to a highly conserved sequence within the specific DHS，and increased the expression of the reporter genes as well as RAG2 mRNA of the T cells in vivo.Conclusion RAG2 gene 5′proximal area through open states change of chromatin regulate the specificity of the gene expression，GATA3 regulates the expression of endogenous RAG2 in T cells by binding to highly conserved DHS regions.

[Key words]Recombination activating gene；Chromatin accessibility；Promoter；Cis-acting element；Transcription factor；T lymphocyte

重組激活基因（recombination activating gene，RAG）編碼的重組激活酶RAG1和RAG2介導(dǎo)抗原受體基因V（D）J重排，在抗原受體多樣性細(xì)胞庫(kù)的形成以及淋巴細(xì)胞分化發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[1]。任一RAG基因的無(wú)效突變，將阻斷T和B淋巴細(xì)胞發(fā)育，導(dǎo)致嚴(yán)重免疫缺陷病[2-3]。

在T和B細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中，RAG1和RAG2表達(dá)具有嚴(yán)格的組織、階段特異性。以往的研究者對(duì)調(diào)控小鼠RAG1和RAG2轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子及增強(qiáng)子、其他類型的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的研究結(jié)果進(jìn)行了報(bào)道[1，4-6]，還報(bào)道了小鼠RAG2啟動(dòng)子、淋巴細(xì)胞特異性增強(qiáng)子（D3）、B細(xì)胞特異性增強(qiáng)子（Ep）、以及轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合與調(diào)控功能研究結(jié)果[7-10]，但是目前對(duì)人RAG轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的報(bào)道十分有限，尤其是缺乏在體（in vivo）的研究證據(jù)。

本研究將通過(guò)CHART-PCR（chromatin accessibility by real-time PCR）方法對(duì)人RAG2基因5′近端區(qū)域的DNase Ⅰ 超敏位點(diǎn)（DNase Ⅰ hypersensitivity site，DHS）進(jìn)行定量分析，比較RAG陽(yáng)性（RAG+）T和B淋巴細(xì)胞、RAG陰性（RAG-）淋巴細(xì)胞以及非淋巴細(xì)胞的染色質(zhì)開(kāi)放狀態(tài)變化；研究T細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor，TF）與DHS在體外（in vitro）和在體（in vivo）的特異性結(jié)合對(duì)報(bào)告基因的調(diào)控作用以及TF顯性負(fù)突變體（dominant-negative mutant，DNM）對(duì)內(nèi)源性RAG2表達(dá)的直接影響。

1材料與方法

1.1細(xì)胞

Reh（RAG+人pre-B細(xì)胞）由ATCC提供，Daudi（RAG-人B細(xì)胞）、CCRF-CEM（RAG+人pre-T細(xì)胞）、Jurkat（RAG+人胸腺T細(xì)胞）、Hut78（RAG-人T細(xì)胞）、K562（RAG-人紅細(xì)胞系）均由中科院細(xì)胞庫(kù)提供。上述細(xì)胞使用RPMI 1640（GIBCO），加入10% FCS、100 U/ml氨芐青霉素、0.1 mg/ml鏈霉素以及5% CO2、37℃培養(yǎng)。

1.2 CHART-PCR鑒定DHS

1.2.1 DNase I處理 方法參考Ling等[11]的方法略作改良，1.5×107細(xì)胞核經(jīng)0～2 U/μl DNase Ⅰ（TakaRa）作用，10 mmol/L Proteinase K終止反應(yīng)后，提取基因組DNA。

1.2.2 CHART-PCR分析 引物設(shè)計(jì)使擴(kuò)增產(chǎn)物為80～250 bp的連續(xù)或部分重疊的目的基因片段（表1）。使用Primer 3和Oligo 7.58進(jìn)行引物評(píng)價(jià)，Primer-Blast做特異性分析。基因組DNA經(jīng)5倍稀釋（0、0.8、4.0、20.0、100.0、500.0 ng）做標(biāo)準(zhǔn)曲線。目的DNA模板加入量為50 ng，SYBR？誖Premix Ex TaqⅡ（TaKaRa），ABI 7500（applied biosystems），每個(gè)反應(yīng)設(shè)3次重復(fù)。

1.3報(bào)告基因、TF過(guò)表達(dá)及DNM表達(dá)載體

1.3.1 pGLhR2報(bào)告基因 使用pGL4.10[Luc2]（Promega）載體，將人RAG2轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（TSS）5′上游（-1746、-789、-323、-157、-129、-108、-70、-9 bp）至+104 bp區(qū)域連接至Sac Ⅰ/Xho Ⅰ位點(diǎn)。

1.3.2 pGLhR2G3m（GATA3結(jié)合位點(diǎn)突變載體） 將pGLhR2-108/+104的GATA3位點(diǎn)突變（TAAATC→TAAAAG）。

1.3.3 GATA3表達(dá)載體pEF1-hGATA3 將含CDS（GeneBank Accession：NM001002295）區(qū)域的2.4 kb片段從全長(zhǎng)GATA3 cDNA克隆（GENECHEM）中切出（EcoR Ⅰ/Xba Ⅰ），插入pEF1載體（Invitrogen）的相同位點(diǎn)。

1.3.4 pEF1-hG3KRR（GATA3DNM表達(dá)載體） 按照Smith等[12]的方法，將GATA3鋅指結(jié)構(gòu)中的KRR突變?yōu)锳AA。引入KRR突變的寡核苷酸序列為5′-CTCATTAAGCCCGCGGGCAGCGCTGTCTGCAGCC-3′和5′-GGCTGCAGACAGCGCTGCCGCGGGCTTAATG ？鄄AG-3′。各克隆經(jīng)DNA測(cè)序驗(yàn)證。

1.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和TF過(guò)表達(dá)及DNM表達(dá)

1.4.1轉(zhuǎn)染試驗(yàn) 使用DEAE（diethylaminoethyl）-葡聚糖方法和雙熒光素酶（Luc2/hRLuc）報(bào)告基因系統(tǒng)（Pro？鄄mega），轉(zhuǎn)染效率內(nèi)控使用pGL 4.74[hRLuc/TK]載體[7]。

1.4.2 TF過(guò)表達(dá) 與pGLhR2報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染，不同劑量的GATA3表達(dá)載體用pEF1載體調(diào)節(jié)為相同的DNA總量。

1.4.3 DNM表達(dá) 轉(zhuǎn)染pEF1-hKRRG3，DNA總量的調(diào)節(jié)方法同上。結(jié)果以3次試驗(yàn)值的均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差表示。

1.5膠遷徙試驗(yàn)

細(xì)胞核蛋白提取方法如前所述[8]。凝膠遷徙試驗(yàn)（electrophoresis mobility shift assay，EMSA）采用LightShift Chemiluminescent EMSA kit（PIERCE），按照kit標(biāo)準(zhǔn)流程操作。超遷徙（supershift）試驗(yàn)：在加入探針之前，預(yù)先將核蛋白與1 g抗人GATA3多克隆抗體（Santa Cruz）或?qū)φ誌gG混合。細(xì)胞核蛋白結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)：含有GATA3共有結(jié)合序列（consensus sequence）或突變的GATA3結(jié)合序列的寡核苷酸序列分別為5′-GAAGTGAAAGAGTTAAATCCTGAGGGTAAC-3′和5′-GAAGTGAAAGAGTTAAAAGCTGAGGGTAAC-3′。

1.6染色質(zhì)免疫沉淀

染色質(zhì)免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation，ChIP）試驗(yàn)按照Hao等[13]的方法稍作調(diào)整。將5×106 細(xì)胞用1%甲醛交聯(lián)。采用超聲破碎儀（SONICS）將染色質(zhì)DNA斷裂為200～1000 bp片段，采用Protein A+G Agarose/Salmon Sperm DNA（Beyotime）清洗、回收DNA。加入2 g鼠抗人GATA3抗體（Santa Cruz）或?qū)φ沼檬驣gG，Protein A+G Agarose/Salmon Sperm DNA沉淀，同時(shí)設(shè)未加抗體對(duì)照組用。免疫沉淀物經(jīng)清洗、解除交聯(lián)、脫蛋白及回收DNA后，進(jìn)行PCR檢測(cè)。人RAG2啟動(dòng)子特異性引物序列為5′-TCAAGTTTTGCCCAGAT？鄄TTC-3′和5′-CCCTCAGGAT？鄄TTAACTCTTTCAC-3′。

1.7 qRT-PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)

RNAiso Plus（TaKaRa）純化的總RNA，采用OrimeScript RT reagent kit（TaKaRa）反轉(zhuǎn)錄cDNA。qRT-PCR測(cè)定mRNA表達(dá)時(shí)，用SYBR Premix Ex TaqⅡ（TaKaRa）。以人Acin為管家基因，各樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行3～6次重復(fù)試驗(yàn)，通過(guò)2-ΔΔCT方法計(jì)算目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1人RAG表達(dá)時(shí)，RAG2基因5′上游近端區(qū)域的染色質(zhì)在T與B細(xì)胞中處于不同的開(kāi)放狀態(tài)

染色質(zhì)特異性開(kāi)放往往與順式轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件的存在相關(guān)[11，14]。將RAG+、RAG-淋巴細(xì)胞以及非淋巴細(xì)胞的RAG2 5′上游區(qū)域的DHS進(jìn)行比較分析，結(jié)果如圖1和圖2A所示，在RAG+T細(xì)胞中，RAG2 TSS/-140 bp區(qū)域?qū)Nase Ⅰ高度敏感（敏感性>90%），-257 bp區(qū)域降至40%～60%，-337/-456 bp區(qū)域進(jìn)一步下降至10%～20%。而-458/-695 bp區(qū)域再次升高至90%。-730 bp以上區(qū)域敏感性消失。RAG+B細(xì)胞的開(kāi)放區(qū)更大（TSS/-257 bp），其他區(qū)域與RAG+T細(xì)胞相同，而上述區(qū)域在RAG-淋巴細(xì)胞及非淋巴細(xì)胞中均未檢測(cè)到DHS，提示染色質(zhì)結(jié)構(gòu)水平的調(diào)控對(duì)于RAG2表達(dá)的特異性具有重要作用，人T、B細(xì)胞RAG2啟動(dòng)子范圍明顯不同，分別在TSS至-140 bp和-257 bp區(qū)域內(nèi)。

2.2 RAG+T細(xì)胞的核心啟動(dòng)子活性與DHS相吻合

為了分析T細(xì)胞DHS與轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性的關(guān)系，本研究進(jìn)行了報(bào)告基因轉(zhuǎn)染試驗(yàn)（圖2B）。pGLhR2報(bào)告基因被轉(zhuǎn)染于RAG+T淋巴細(xì)胞（CCRF-CEM或Jurkat），結(jié)果如圖2B所示，-1746/+104 bp的轉(zhuǎn)錄活性由5′端刪除至-157 bp未受影響，而逐步刪除至-129、-108、和-70 bp時(shí)，活性依次明顯下降，至-9 bp時(shí)完全消失，提示在RAG+T細(xì)胞中，人RAG2啟動(dòng)子的核心區(qū)域?yàn)門SS/-129 bp，與T細(xì)胞特異性DHS所在區(qū)域相吻合，而-458/-695 bp的DHS對(duì)活性無(wú)影響，可能屬于無(wú)核小體區(qū)域。

2.3 T細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA3結(jié)合于DHS中的高度保守區(qū)域

以往發(fā)現(xiàn)的順式轉(zhuǎn)錄元件多屬于生物進(jìn)化過(guò)程中高度保守的同源序列[15]，因此，本研究使用ENCODE[16]對(duì)T細(xì)胞DHS區(qū)域進(jìn)行同源性分析，結(jié)果顯示DHS中的-85 bp/-77 bp在人與其他6種不同科目哺乳動(dòng)物之間同源性為100%（圖3A）。使用JASPAR數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)該區(qū)域進(jìn)行TF結(jié)合序列預(yù)測(cè)，結(jié)果顯示，該區(qū)域存在T細(xì)胞特異性TF GATA3的共結(jié)合序列（82-DGATWD-77）（圖3B）。為研究GATA3是否能夠結(jié)合于該82/77位點(diǎn)，采用CCRF-CEM（RAG+人pre-T）提取的核蛋白和-96/-66探針做EMSA，結(jié)果如圖3C，2個(gè)核蛋白-DNA復(fù)合體被檢測(cè)出，并且都能夠被過(guò)量（200倍）的-96/-66寡核苷酸競(jìng)爭(zhēng)掉，即兩者均為核蛋白-DNA探針的特異性結(jié)合產(chǎn)物。其中1個(gè)復(fù)合體（C）能夠被100或200倍過(guò)量的人GATA3共結(jié)合序列特異性競(jìng)爭(zhēng)，而GATA3結(jié)合位點(diǎn)突變體（mGATA3）的競(jìng)爭(zhēng)作用消失。此外，抗人GATA3抗體（-GATA3）能夠與復(fù)合體中的GATA3特異性結(jié)合，形成超遷徙復(fù)合體，而陰性對(duì)照抗體（IgG）無(wú)超遷徙作用，提示RAG+人T細(xì)胞表達(dá)的GATA3能夠特異性結(jié)合于高度保守的-82/-77位點(diǎn)。

為進(jìn)一步探討GATA3在染色質(zhì)水平的結(jié)合，本研究進(jìn)行了Chip試驗(yàn)，結(jié)果如圖3D所示，在RAG+T細(xì)胞（CCRF-CEM）中，抗人GATA3抗體（GATA3）而非對(duì)照IgG，能夠?qū)⒔Y(jié)合于-157/-69 bp區(qū)域的GATA3沉淀，提示當(dāng)人T細(xì)胞表達(dá)RAG時(shí)，GATA3特異性的結(jié)合處于開(kāi)放狀態(tài)的RAG2啟動(dòng)子核心區(qū)域。

2.4 GATA3特異性上調(diào)RAG2在人T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)

為探明GATA3的調(diào)控作用，本研究使用TF結(jié)合位點(diǎn)突變和TF過(guò)表達(dá)方法研究GATA3對(duì)報(bào)告基因中RAG2啟動(dòng)子活性的影響，并且使用TF共顯性負(fù)突變方法研究GATA3對(duì)RAG2表達(dá)的直接調(diào)控作用，結(jié)果如圖4A所示，將GATA3結(jié)合位點(diǎn)突變（pGLhR2 G3m）后，在CCRF-CEM細(xì)胞中的Luc相對(duì)活性下降 >40%（P<0.01），而在K562非淋巴細(xì)胞無(wú)明顯改變；將不同劑量的人GATA3（pEF1-hGATA3）與pGLhR2-108/-104共轉(zhuǎn)染于K562細(xì)胞后，Luc相對(duì)活性隨GATA3劑量的提高而逐步上升至1.8倍以上（圖4B）；將GATA3DNM轉(zhuǎn)染至CCRF-CEM T細(xì)胞后，由于對(duì)野生型GATA3的競(jìng)爭(zhēng)作用，使RAG2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量（與Acin管家基因比較）下調(diào)至約70%（圖4C）。上述結(jié)果提示，GTAT3的結(jié)合能夠明顯提高人RAG2啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而驅(qū)動(dòng)內(nèi)源性RAG2的表達(dá)。

3討論

RAG1至今仍未發(fā)現(xiàn)任何特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件，人們均傾向于RAG1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件缺乏特異性功能，而RAG2的調(diào)控元件不僅對(duì)RAG2自身，而且能夠調(diào)控RAG1基因的特異性轉(zhuǎn)錄[17]，本研究也是基于這一被普遍接受的推論。盡管小鼠的研究較為深入[4-10]，但目前人類RAG表達(dá)的特異性調(diào)控機(jī)制仍不清楚，因此對(duì)其開(kāi)展研究十分必要。

真核細(xì)胞的基因組DNA以組蛋白為核心纏繞形成核小體，進(jìn)而包裝成染色質(zhì)，并通過(guò)控制調(diào)節(jié)分子與DNA的結(jié)合，在關(guān)鍵的細(xì)胞核生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，包括基因調(diào)控、DNA修復(fù)和復(fù)制[18]。當(dāng)基因表達(dá)時(shí)，使用DNase Ⅰ酶檢測(cè)其DHS，是對(duì)順式轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件進(jìn)行定位的重要手段[11，14]。本研究使用更精確的CHART-PCR技術(shù)，對(duì)人RAG2基因5′上游近端區(qū)域的DHS范圍進(jìn)行定量分析。通過(guò)對(duì)不同細(xì)胞的比較分析發(fā)現(xiàn)，當(dāng)人RAG表達(dá)時(shí)，RAG2啟動(dòng)子核心區(qū)域的染色質(zhì)特異性開(kāi)放，而且T與B細(xì)胞的特異性DHS區(qū)域范圍差異明顯，提示T和B細(xì)胞分別受不同轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件控制，這一觀察應(yīng)該能夠?qū)窈蟮难芯刻峁┯幸饬x的借鑒。此外，本研究觀察到的一個(gè)有趣現(xiàn)象是，在表達(dá)RAG的淋巴細(xì)胞中，RAG2基因上游稍遠(yuǎn)端（-458～-695 bp）的DHS特異性出現(xiàn)，該區(qū)域在T和B細(xì)胞之間沒(méi)有區(qū)別，也未能證實(shí)其對(duì)T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能的影響。類似的現(xiàn)象也在一項(xiàng)關(guān)于IL-12 p40啟動(dòng)子的研究中被報(bào)道[19]。至于這一RAG表達(dá)特異性的無(wú)核小體區(qū)域是否參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控以外的其他細(xì)胞核生物學(xué)過(guò)程，例如通過(guò)募集核蛋白分子影響基因表達(dá)特異性染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變，尚需進(jìn)一步研究。

GATA3是調(diào)控T細(xì)胞分化發(fā)育的關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子之一，從胸腺中早期祖T細(xì)胞（early T lineage progenitor，ETP）延續(xù)到外周成熟T細(xì)胞的終末階段（Th2 CD4+ T細(xì)胞）均發(fā)揮重要作用[20]。值得注意的是，GATA3對(duì)TCR、TCR和TCR啟動(dòng)子或增強(qiáng)子的結(jié)合是驅(qū)動(dòng)這些基因在胸腺T細(xì)胞中表達(dá)的最重要環(huán)節(jié)[21]，而此時(shí)也正是RAG表達(dá)的高峰階段。雖然曾經(jīng)在小鼠細(xì)胞的體外試驗(yàn)中證實(shí)GATA3能夠結(jié)合于RAG2啟動(dòng)子[7]，但是對(duì)于在體（in vivo）環(huán)境下GATA3的結(jié)合及調(diào)控作用仍未闡明。

本研究從基因表達(dá)特異性染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析入手，發(fā)現(xiàn)了DHS中新的GATA3結(jié)合位點(diǎn)，并通過(guò)同源序列分析揭示該GATA3結(jié)合序列在人類及多種不同哺乳動(dòng)物之間高度同源，提示其為嚴(yán)酷的進(jìn)化選擇過(guò)程中保留下來(lái)的重要序列。進(jìn)一步的EMSA和Chip試驗(yàn)證實(shí)了GATA3與該位點(diǎn)以及染色質(zhì)環(huán)境中DHS的結(jié)合，并且使用過(guò)量表達(dá)、結(jié)合位點(diǎn)突變體和GATA3DNM試驗(yàn)證實(shí)了GATA3對(duì)人RAG2在T細(xì)胞中表達(dá)的特異性調(diào)控作用結(jié)果，因而對(duì)RAG2的T細(xì)胞特異性調(diào)控提供了初步試驗(yàn)資料。進(jìn)一步對(duì)其他轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件及TF的研究，特別是B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究將在后續(xù)報(bào)告中闡述。

致謝：衷心感謝Atsushi Muraguchi教授（Toyama Medical and Pharmaceutical University，Toyama，Japan）對(duì)本研究的指導(dǎo)性意見(jiàn)和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)術(shù)探討及批評(píng)。

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（收稿日期：2016-12-07 本文編輯：祁海文）