李強(qiáng)

摘要 為了研究枸杞葉片中類黃酮含量的變化規(guī)律，確定枸杞葉片的最佳采收時(shí)期，采用超聲波輔助法提取不同采收期枸杞葉片中的類黃酮，在291.5 nm處測(cè)定其吸光度，計(jì)算出不同采收時(shí)期枸杞葉片中類黃酮的含量。結(jié)果表明：5月中旬前后枸杞葉片中的類黃酮含量最高，6月、 7月以后葉片中的類黃酮含量緩慢減少。直到8月、9月采收的枸杞葉片的黃酮含量又會(huì)顯著增加，最高點(diǎn)在5月采收的枸杞葉片中，類黃酮含量達(dá)到61.32 mg/g，因此這段時(shí)間的葉片最適宜采收。

關(guān)鍵詞 采收期；枸杞葉片；類黃酮；含量

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2016）22-0059-02

Abstract The changes of flavonoids content of Lycium barbaruml leaves in different picking periods was researched in order to find out the best picking periods of Lycium barbaruml leaves.Ultrasonic assisted extraction was used to extract total flavonoids in Lycium barbaruml leaves with different picking periods，mearsuring the absorbance at 291.5 nm，the total flavonoids in different picking periods was calculated and the changing rule of flavonoids content was obtained.The results showed that the total flavonoids content from June to July picking period was decreasing.after July，the total flavonoids content began to increase，until the end of September.f.The total flavonoids content on May 15 reached the high point which was 61.32 mg/g.Thus，the best picking period of Lycium barbaruml leaves was in May.

Key words picking periods；Lycium barbaruml Leaves；total flavonoids；content

枸杞作為寧夏富民強(qiáng)區(qū)的優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)，近年來(lái)發(fā)展勢(shì)頭迅猛，到“十三五”末時(shí)，寧夏枸杞種植面積將穩(wěn)定在6.67萬(wàn)hm2左右，總產(chǎn)值達(dá)到300億元以上。近些年來(lái)，隨著百姓生活水平提高，對(duì)健康的越發(fā)重視，保健食品的消費(fèi)量急劇增加。一直以來(lái)枸杞子都是重要的保健食品，是日常保健消費(fèi)的主流，而對(duì)于寧夏枸杞葉的基礎(chǔ)性研究和開發(fā)卻相對(duì)較少。據(jù)《本草綱目》記載，枸杞葉又名“天精草”，祛五勞七傷?，F(xiàn)代科學(xué)研究證明枸杞葉具有養(yǎng)肝明目、軟化血管、清除體內(nèi)自由基和抗衰老之效用[1-2]。目前，在寧夏當(dāng)?shù)匾呀?jīng)開發(fā)出枸杞葉茶和保健蔬菜，但是與其枸杞的種植面積相比，開發(fā)的比例還很低。因此，加強(qiáng)對(duì)枸杞葉的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究是十分必要的。

查閱相關(guān)文獻(xiàn)[3-5]，枸杞葉富含天然抗氧化成分類黃酮化合物，枸杞是中國(guó)特有樹種，主要在中國(guó)西北地區(qū)種植，國(guó)內(nèi)外對(duì)枸杞葉本身研究較少。超聲波技術(shù)是利用超聲波在液體中的空化作用來(lái)加速植物有效成分的浸出提取，具有時(shí)間短、適應(yīng)性廣等特點(diǎn)。本研究采用超聲波法提取寧夏枸杞葉片中抗氧化活性成分的類黃酮，確定提取類黃酮的工藝參數(shù)并測(cè)定不同采收期枸杞葉片中的類黃酮含量，比較不同采收期枸杞葉片中類黃酮含量的變化規(guī)律，確定枸杞葉最佳的采收時(shí)期。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

研究材料：采收不同時(shí)期的寧夏枸杞鮮葉（采摘時(shí)間定在5月、6月、7月、8月、9月中旬進(jìn)行），采自寧夏銀川南梁農(nóng)場(chǎng)枸杞種植基地。

供試儀器與設(shè)備：U410超低溫冰柜（英國(guó)NEW BRUN-SWICK SCI-ENTIFIC）、索氏脂肪提取器（上海洪紀(jì)儀器設(shè)備有限公司）、電子天平（鄭州長(zhǎng)城工貿(mào)有限公司）、722E 型可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）、 RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、JY92-Ⅱ 超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)、DHG-9140A 電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海佳勝實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、DK-S28 型電熱恒溫水浴鍋（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、FDV DVTOUT-2HD 超微粉碎機(jī)（專利第115669號(hào)佑崎有限公司）、真空泵布氏漏斗以及安全實(shí)驗(yàn)室常用儀器。

供試試劑：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品；乙醇、石油醚、AlCl3、甲醇，均為分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 枸杞葉片中總黃酮的提取[6-8]。將枸杞鮮葉放置在自然光下晾曬5 d，然后置于烘箱中干燥2 h（保持105 ℃）后再粉碎至1 mm成枸杞葉粉末，待用。精確稱量10 g枸杞粉末，將其置于索氏脂肪提取器內(nèi)，加入200 mL石油醚90 ℃回流浸提脫脂約2 h至無(wú)色，取出包有樣品的濾紙置于烘箱中烘干。按固液比1∶50（g/mL）加入70%乙醇，在420 W、55 ℃的條件下于超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)中處理60 min。再用真空抽濾，上清液用95%乙醇定容至100 mL備用[9]。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。將蘆丁充分干燥至恒重，再用電子天平準(zhǔn)確稱量10.000 mg（120 ℃干燥至恒重）的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，加入甲醇溶解并定容于100 mL的容量瓶中，得到質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的蘆丁對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)液。準(zhǔn)確吸取上述蘆丁對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于10 mL容量瓶中，分別加入1% AlCl3顯色劑1 mL，加入95%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，配制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以第一管溶液作空白，在500 nm處分別測(cè)定吸光度[10]，以吸光度為橫坐標(biāo)，樣品濃度為縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線[11]，得到線性回歸方程，得吸光度A-質(zhì)量濃度C的標(biāo)準(zhǔn)曲線（表1、圖1），求得回歸方程C=22.039A+0.002 4（R2=0.999 6）。

由標(biāo)準(zhǔn)曲線求出試樣中類黃酮提取液的濃度，再計(jì)算樣品中類黃酮的含量，計(jì)算公式如下：

m=C×10×10/W

式中：C為根據(jù)回歸方程計(jì)算出類黃酮提取液的質(zhì)量濃度（mg/mL）；10為提取液定容時(shí)的體積（mL）；10為顯色反應(yīng)時(shí)稀釋的倍數(shù)；W為樣品的質(zhì)量（g）。

2 結(jié)果與分析

將不同采收時(shí)期枸杞葉片的吸光度，濃度值及類黃酮含量整理成表2。

為了對(duì)比方便，再將5—9月不同采收時(shí)期枸杞葉片中類黃酮含量的平均值繪制成柱形圖來(lái)進(jìn)行比較，結(jié)果見圖2。

由圖2可以看出，在5—9月采摘的枸杞葉片中類黃酮含量以5月最高，6月、7月開始降低，到8月、9月又顯著增加的一個(gè)趨勢(shì)，其中5月采摘的枸杞葉片中類黃酮含量高達(dá)61.32 mg/g，而到6月則降低到35.12 mg/g。

3 結(jié)論與討論

該試驗(yàn)結(jié)果表明，5月中旬前后枸杞葉片中的類黃酮的含量最高，6月、 7月以后葉片中的類黃酮含量緩慢減少。直到8月、9月采收的枸杞葉片的黃酮含量又會(huì)顯著增加，最高點(diǎn)在5月采收的枸杞葉片中，類黃酮含量達(dá)到61.32 mg/g，因此5月是最適宜采收枸杞葉片的時(shí)間。

5月采摘的枸杞葉片中的類黃酮物質(zhì)處于最高值，即此時(shí)的枸杞葉片最嫩也最適宜采收，而到了8月、9月雖然類黃酮的含量也較高，但是此時(shí)葉片纖維化嚴(yán)重，并不適宜加工利用。出現(xiàn)這種情況的原因主要有2個(gè)方面：一是氣候影響。寧夏位于中國(guó)西北，屬于內(nèi)陸干旱沙漠型氣候，少雨、多風(fēng)、光照充足、冬季漫長(zhǎng)，每年的5月以后氣溫迅速回升、日照相對(duì)較強(qiáng)，農(nóng)作物依靠黃河補(bǔ)水較足，枸杞植株喜熱需水，在這個(gè)階段生長(zhǎng)最為旺盛，類黃酮物質(zhì)也容易積累；二是5月的寧夏枸杞正處于春季萌芽期，而8月、9月初枸杞采果基本結(jié)束，葉片急劇老化，因而處于組織正在快速生長(zhǎng)的嫩葉和逐漸纖維化的老葉對(duì)類似于類黃酮物質(zhì)這樣的功效成分積累量也有增加。

類黃酮化合物是一類天然產(chǎn)物，廣泛存在于各種植物組織中，是許多天熱產(chǎn)物中的有效成分。多種方法均可以測(cè)定枸杞葉片中的類黃酮含量，如熱水浸提法、乙醇提取法、分光光度法、高效液相色譜法、二氧化碳超臨界流體萃取法、離子交換法、大孔吸附樹脂法、微波提取法等。該研究結(jié)果表明，超聲波輔助提取法時(shí)間少、提取率高、成本較低、污染最小、實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化也較為容易。從保健及新資源食品開發(fā)角度來(lái)看，該結(jié)果可以指導(dǎo)研發(fā)人員在適宜的時(shí)間采收枸杞葉片來(lái)提取類黃酮化合物，達(dá)到事半功倍的效果，為枸杞葉的深度研究和產(chǎn)業(yè)開發(fā)起到基礎(chǔ)性作用。

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