3種不同基質(zhì)對黃連素軟膏體外透皮吸收的影響

時 琳 郭桂明 王 敏

(1 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010； 2 首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，北京，100069)

中藥研究

3種不同基質(zhì)對黃連素軟膏體外透皮吸收的影響

時 琳1郭桂明1王 敏2

(1 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010； 2 首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，北京，100069)

目的：為提高黃連素軟膏中有效成分黃連素的透皮吸收的效果，通過測定3種不同基質(zhì)(油脂型基質(zhì)、乳劑基質(zhì)、水溶性基質(zhì))制成的黃連素軟膏中黃連素的體外透皮吸收情況，尋找適合于外用黃連素的軟膏劑類型。方法：制備3種不同基質(zhì)的黃連素軟膏，以小鼠離體去毛皮膚為滲透膜，使用智能透皮試驗儀進行體外透皮擴散實驗，在相同條件下于各規(guī)定時間吸取吸收液，以分光光度法在344 nm處測量黃連素(以鹽酸小檗堿計)的吸收度，并用回歸方程計算黃連素的透皮吸收量。結(jié)果：3種基質(zhì)的黃連素軟膏在12 h內(nèi)均有一定吸收，其中乳劑型黃連素軟膏的吸收率最高，其次是水溶性，油脂型最差。結(jié)論：中藥外用膏劑的基質(zhì)類別對藥物的透皮吸收有明顯的影響，本實驗中由于黃連素的疏水性，最適合其透皮吸收的軟膏的基質(zhì)類型為乳劑型。

黃連素軟膏；基質(zhì)；透皮吸收

近年來隨著中醫(yī)藥事業(yè)的蓬勃發(fā)展，以及“大健康時代”帶來的市場需求，更多的患者選擇中醫(yī)外治的方法治療疾病或保健。為了確保臨床用藥的安全有效，藥學(xué)人員應(yīng)進一步研究出更為理想的中藥臨床制劑。中藥軟膏劑的應(yīng)用早已被人們認可，在臨床上大多用于皮科和外科，主要用于保護皮膚、潤滑皮膚和局部治療，它利用藥物經(jīng)皮吸收而進入血液循環(huán)，這不僅避免了胃腸道對藥物吸收的影響以及肝臟的“首過效應(yīng)”，還避免了口服制劑不良反應(yīng)的發(fā)生，能夠緩釋于患處，有效維持血藥濃度的穩(wěn)定，提高患者治療的依從性。因此，引起越來越多的藥學(xué)工作者的關(guān)注。有實驗研究表明，軟膏基質(zhì)的種類直接影響藥物的滲透作用[1]。黃連素是清熱解毒藥黃連、黃柏的有效成分之一，臨床常用于消化道感染?，F(xiàn)代藥學(xué)研究表明黃連素的外用制劑對皮膚疾病具有一定的療效。劉春平[2]等人提出黃柏中鹽酸小檗堿對常見皮膚癬菌具有抑菌作用。本實驗就以黃連素為例，應(yīng)用透皮試驗儀進行試驗，比較水溶性基質(zhì)、油脂型基質(zhì)和乳劑型基質(zhì)中黃連素體外透皮的吸收性。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 黃連素(北京誠濟制藥有限公司，批號：150701)，氯化鈉(北京化工廠，批號：20021122)，羊毛脂(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20141117)，冰片(合成龍腦，株洲松本林化有限公司，批號：20130126)、硬脂酸(北京世紀紅星化工有限責(zé)任公司，批號：011223)、單硬脂酸甘油酯(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20141117)、蓖麻油(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20120321)、甘油(北京現(xiàn)代東方精細化學(xué)品有限公司，批號：20101220)、三乙醇胺(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號：20150111)、尼泊金乙酯(北京化學(xué)試劑公司，批號：011115)、甲基纖維素(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號：20140110)、苯甲酸鈉(廣東汕頭市西隴化工廠，批號：0508302)、凡士林(南昌白云藥業(yè)有限公司，批號：20140805)、羊毛脂(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20141117)、蒸餾水。

1.2 實驗儀器 智能透皮試驗儀(YB-P6，天津弗蘭斯電子科貿(mào)有限公司)，電子天平(CPA22025,Sartorius)，紫外可見分光光度計(UV-1800PC，上海美普達儀器有限公司)，數(shù)控恒溫水浴鍋(XMTD-6000，北京長風(fēng)儀器儀表公司)，容量瓶、手術(shù)器械，剃須刀、稱量紙、小燒杯、藥匙等。

1.3 方法

1.3.1 軟膏的制備

1.3.1.1 乳劑型基質(zhì)軟膏的制備 處方：黃連素0.5 g、冰片0.02 g、硬脂酸1.2 g、單硬脂酸甘油酯0.4 g、蓖麻油2.0 g、甘油1.0 g、三乙醇胺0.15 mL、尼泊金乙酯0.005 g、蒸餾水5 mL；制法：將硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、蓖麻油、尼泊金乙酯共置于干燥燒杯中，水浴加熱至70 ℃使其全部熔化，并攪拌混勻。將甘油、蒸餾水置于另一燒杯中，加熱至70 ℃，邊攪拌邊加入三乙醇胺，混合均勻后加入黃連素并攪拌至全部溶解。將冰片加入油相溶解后，立即將油相逐漸加入水相中，邊加邊攪拌，至冷凝，即得。

1.3.1.2 水溶性基質(zhì)軟膏的制備 處方：黃連素0.7 g、甲基纖維素1.5 g、甘油2.5 g、苯甲酸鈉0.1 g、蒸餾水10 mL；制法：將黃連素、甘油、苯甲酸鈉置于燒杯中，加入蒸餾水。水浴加熱使其溶解，室溫冷卻至30 ℃左右，加入甲基纖維素，邊加邊攪拌均勻，放置至凝膠狀。

1.3.1.3 油脂型基質(zhì)軟膏的制備 處方：黃連素0.27 g、凡士林5 g、羊毛脂0.5 g；制法：將凡士林、羊毛脂置于燒杯中，于70 ℃水浴中加熱至熔融狀態(tài)。邊攪拌邊加入黃連素至全量，混合均勻后從水浴鍋取出。攪拌至冷卻。

1.3.2 鼠皮的制備 將6只健康雄性ICR小鼠(30±2)g，處死，立即剪下背部皮膚，將角質(zhì)層向上平鋪固定于解剖板上，用自動脫毛器、剃須刀除毛，當充分暴露出粉白色皮膚后將角質(zhì)層朝下平鋪固定，仔細剝離皮下脂肪、筋膜、血管及黏液組織，選取沒有任何明顯損傷的完整皮膚，用蒸餾水洗凈，再用生理鹽水浸洗兩次，將處理好的鼠皮浸于生理鹽水中，冰箱冷凍保存，備用。

1.3.3 標準曲線的繪制 準確稱量黃連素1.0 mg，用0.9%氯化鈉溶液溶解至100 mL容量瓶內(nèi)，定容，搖勻，配制濃度為0.01 mg/mL的黃連素對照母液，備用，吸取不同劑量母液5 mL、2.5 mL、1 mL、0.5 mL、0.1 mL分別置于10 mL容量瓶中，分別配制為濃度依次為0.005，0.0025，0.001，0.0005，0.0001 mg/mL的標準品溶液。使用紫外分光光度計于344 nm波長處分別測定以上6個濃度的吸光度，得到標準曲線方程y=17.062x+0.0159，擬合系數(shù)為0.9992。

1.3.4 透皮吸收實驗

1.3.4.1 設(shè)定儀器參數(shù) 智能透皮滲透儀條件設(shè)定：水浴恒溫，溫度為37 ℃[3]，轉(zhuǎn)速為500 r/min(小轉(zhuǎn)子)。

1.3.4.2 吸收池的準備 采用改良擴散池[4]，在每個吸收池中放置一個小電磁攪拌子，暴露皮膚面積為1.668 cm2，量取吸收池的容積為16.8 mL，將吸收池注滿生理鹽水，排盡氣泡。將鼠皮放置在擴散池與接收池中間，用夾子固定，角質(zhì)層面向上，真皮層一側(cè)與接收液相貼。標號為1～3號備用。

1.3.4.3 透皮吸收實驗 分別稱取3種軟膏各0.5 g，用棉簽和玻璃棒涂布與皮膚上。從1～3號依次為乳劑型、水溶型和油脂型。將吸收池放于透皮吸收儀中，開始實驗。分別在0.5 h，1 h，2 h，4 h，6 h，12 h后從吸收池精密量取2.0 mL釋放液，并立即補充等量恒溫生理鹽水。

2 結(jié)果

觀察3種基質(zhì)軟膏劑外觀、稠度等，發(fā)現(xiàn)所得軟膏混合均勻，稠度適中。3種不同基質(zhì)配制的黃連素軟膏，接收液經(jīng)測定后，在344 nm波長處可見最大吸收，證明在不同時間內(nèi)3種基質(zhì)配制的黃連素軟膏的有效成分均能透過皮膚。

2.1 標準曲線 各濃度黃連素標準品吸光度見表1，標準曲線繪制如圖1。所得標準曲線為Y=17.062X+0.0159，擬合系數(shù)R2=0.999 2，說明黃連素在0.0001～0.005 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 不同濃度黃連素標準品溶液的吸光度

圖1 黃連素標準曲線

2.2 不同基質(zhì)軟膏透皮吸收的比較 各組在不同時刻吸收液的吸光度值見表2。換算成濃度與時間的情況見表3。藥物累計滲透量情況見表4。對藥物累計滲透量做統(tǒng)計圖如圖2。

表2 透皮吸收實驗各時間點吸收樣品吸光度值(A)

表3 透皮吸收實驗各時間點吸收液中的

表4 透皮吸收實驗各時間點黃連素的累計滲透量(Q，mg)

從以上圖表中可分析得到，12 h內(nèi)乳劑型膏劑的透皮吸收效果最好，水溶性膏劑次之，油脂型膏劑最差。前6 h，各膏劑的透皮吸收量相差不大，6～12 h，吸收量變化明顯。所以從透皮吸收率來判斷，使用3種不同基質(zhì)配制的黃連素軟膏，乳劑型基質(zhì)最高，水溶性基質(zhì)次之，油脂性基質(zhì)最低。

圖2 透皮吸收實驗各時間點黃連素的累計滲透量曲線

注：系列1——乳劑型，系列2——水溶性，系列3——油脂性。

3 討論

黃連素在水中溶解度較小，為1∶500，而且會受溫度變化的影響。因此這類藥物在進行的體外滲透性實驗時，對于選擇的接收液是要滿足藥物吸收槽條件要求的。為了滿足這一條件，曾愛國[5]等人在研究幾種促透劑對鹽酸小檗堿體外經(jīng)大鼠腹部皮膚滲透影響的實驗中，發(fā)現(xiàn)可以通過添加一些非生理性成分(如乙醇、丙二醇、聚乙二醇等)來擾亂藥物的分子晶型，從而增加藥物的溶解度。

中藥軟膏劑合理選用基質(zhì)與藥物本身性質(zhì)有關(guān)，本實驗說明不同基質(zhì)的黃連素軟膏對透皮吸收有較大影響。基質(zhì)的選擇可直接影響到藥物在基質(zhì)中的理化性質(zhì)與貼敷處皮膚的生理功能，從而影響藥效。由于每種基質(zhì)各自的性質(zhì)不同，對藥物的親和力就有所不同。如使用不同類型基質(zhì)制備黃芩苷軟膏的藥物透皮吸收度的研究中得出結(jié)論為乳劑型基質(zhì)最好，油脂性基質(zhì)次之，水溶性基質(zhì)最差[6]。也有實驗研究表明，基質(zhì)類型的不同對主藥的經(jīng)皮滲透，規(guī)律與經(jīng)皮滲透速率有明顯的影響[7]，因此不同的藥物配制的外用制劑選擇的基質(zhì)須進行相應(yīng)的臨床前實驗來判定，從而確認新處方的安全有效性，滿足臨床的需要。

中藥膏劑的pH值也可能對滲透效果造成影響。當軟膏的pH值為7.0時，黃連素的溶解度最大，pH越低，溶解度就降低很多，pH值為2時的溶解度只有pH值為7時的1/6，因此要根據(jù)藥物的pka值來調(diào)節(jié)經(jīng)皮給藥遞質(zhì)的pH值，提高藥物的滲透效果。本實驗所制備的水溶性膏劑中添加了苯甲酸鈉，因此三個膏劑的pH值不完全相同，該因素未予考慮，但可能對結(jié)果有影響。

皮膚對軟膏中藥物的透皮吸收率，除與選擇的基質(zhì)相關(guān)，還與藥物性質(zhì)有關(guān)，如藥物的濃度，擴散度和溶解度。黃連素較易溶于沸水，當軟膏中含蒸餾水時，角質(zhì)層利于基質(zhì)對皮膚的水和作用，增加黃連素軟膏的穿透吸收，然而蒸餾水雖然能增加黃連素的擴散度和溶解度，但軟膏久置于室中，由于室溫、相對濕度等外界因素的影響，偶見水珠析出。有經(jīng)驗表明[8]加入無水羊毛脂吸收軟膏中的多余水分，可防止水珠析出，但會給本品的配制帶來不便。有研究[9]表明揮發(fā)油作用后對皮膚角質(zhì)層具有顯著影響,從而降低了角質(zhì)層的通透屏障作用。乳劑型基質(zhì)中含有冰片，也有文獻[10]指出冰片對黃芩苷透過離體角膜具有顯著的促進作用，0.1%冰片滲透效果最佳。本實驗中的冰片很可能對實驗結(jié)果有促進作用。

在進行透皮吸收的實驗性研究中，實驗皮膚的選擇對于檢測藥物透皮率有重要意義，制取離體皮膚過程中需注意提取部位應(yīng)根據(jù)藥物作用部位選擇，以求接近真實用藥環(huán)境[11]。邱波[12]等人在對實驗動物的研究中認為小豬、猴和蛇蛻等與人皮膚較為相似，但由于皮膚來源的問題，一般情況仍使用大鼠、小鼠和兔皮用作透皮吸收的實驗皮膚，也有少數(shù)報道中使用的是豚鼠皮[13]。張豐英等[14]人經(jīng)過多次實驗證明，小鼠背部的毛較腹部豐富，且背部皮膚略厚，皮下脂肪層和和結(jié)締組織致密，不宜清除完全。而王敏等人的研究認為蛇蛻更適于觀察藥物處方組成對角質(zhì)層的影響。本實驗中鼠皮表面殘余部分絨毛，可能對實驗結(jié)果造成影響。但在人體的實驗結(jié)果可能與該實驗不同，因?qū)嶒炦x擇的用藥部位、選擇對象的年齡、性別、種族等多種因素的差異對藥物的透皮吸收率均會產(chǎn)生影響，還要進一步實驗驗證。

4 結(jié)論

中藥軟膏劑合理選用基質(zhì)與藥物本身性質(zhì)有關(guān)，以乳劑型、水溶性、油脂性為基質(zhì)的黃連素軟膏對透皮吸收有明顯的影響。本實驗說明不同基質(zhì)的黃連素軟膏對透皮吸收有較大影響。乳劑型軟膏具有延展性好，易涂布，吸收速率高等優(yōu)點，為臨床使用提供參考。近年來中藥外用劑型對使用新型滲透促進劑的研究取得較大的發(fā)展，多元滲透促進劑和中藥滲透促進劑的應(yīng)用日益增多，我們還應(yīng)將現(xiàn)代化的透皮促進手段引入中藥外用劑型中，增加藥物的透皮吸收率，提高生物利用度。

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(2016-03-27收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

The In Vitro Percutaneous Absorption of Berberine Hydrochloride Ointments with Three Dissolvents

Shi Lin1, Guo Guiming1, Wang Min2

(1BeijingHospitalofTraditionalChineseMedicine，Beijing100010,China; 2SchoolofTraditionalChineseMedicine，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069,China)

Objective:To compare the in vitro percutaneous absorption of the berberine hydrochloride ointments with oil, emulsion and water-soluble dissolvents. Methods:The above three kinds of ointments were applied to the equal areas of the in vitro dehaired epidermis of mice. Under the same condition, the absorbed liquid degree by epidermis was collected within various durations. The absorbance of liquid was measured with spectrophotometry at 344 nm. Results:Within 12 hours, all of the three ointments were absorbed by epidermis to a certain degree, where the percutaneous absorbance of emulsion ointment was the highest, followed by water-soluble ointment, and the oil-like ointment which had the lowest absorbance. Conclusion:Dissolvent type of TCM ointment has obvious influence on the percutaneous absorption of the drug.

Berberine Hydrochloride Ointment; Dissolvent; Percutaneous absorption

國家中醫(yī)藥管理局臨床藥學(xué)重點?？祈椖?編號：ZP0101YX001)

時琳(1981.05—)，女，大學(xué)本科，主管中藥師，研究方向：臨床中藥學(xué)，E-mail：kenjin53@sina.cn

王敏(1961.11—)，女，大學(xué)本科，副主任技師，中醫(yī)藥學(xué)實驗教學(xué)中心黨支部書記，研究方向：中藥藥劑，E-mail：tmshiyan@ccmu.edu.cn

R284.1；R943

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.01.041