黎藥裸花紫珠與膽木組合的藥效學(xué)研究高香奇李誠(chéng)叢

周星

【摘要】目的：篩選出黎藥裸花紫珠和膽木最佳藥效組合，為開發(fā)新藥做準(zhǔn)備。方法：對(duì)裸花紫珠和膽木提取物的組合進(jìn)行包括抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌和解熱等藥效學(xué)研究。結(jié)果：裸花紫珠和膽木的水、醇提取物的單方和組方在劑量為052g/kg·bw時(shí)，對(duì)小鼠均有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛作用；劑量為04g/kg·bw時(shí)，兩者單方對(duì)內(nèi)毒素致熱家兔具有解熱作用；組方裸花紫珠醇提物-膽木醇提物（026g/kg：026g/kg）對(duì)內(nèi)毒素致熱家兔的解熱效果更佳；兩者的水、醇提取物單方和組方均有一定的抑菌作用。結(jié)論：組方裸花紫珠醇提物-膽木醇提物（026g/kg：026g/kg）的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌等作用最佳。

【關(guān)鍵詞】黎藥；裸花紫珠；膽木；最佳組合；藥效學(xué)

【中圖分類號(hào)】R2855【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）06-0034-05

裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hooket Arn）為馬鞭草科植物，主要分布在我國(guó)的廣東、廣西和海南。裸花紫珠的藥用歷史悠久，在海南黎族民間也廣泛的應(yīng)用，海南黎族稱裸花紫珠為“雅介龍”，應(yīng)用在各種創(chuàng)傷流血、婦科炎癥、腰骨痛及皮膚疥瘡等[1]。裸花紫珠含有黃酮甙、酚類等多種成分，研究表明，裸花紫株可抑制毛細(xì)血管通透性，對(duì)早期的炎癥滲出、腫脹有明顯的抗炎性反應(yīng)作用[2]；能明顯縮短出、凝血時(shí)間，止血效果顯著[3-4]；還能抑制多種細(xì)菌，可預(yù)防繼發(fā)性感染的發(fā)生[4]。

膽木（Nauclea officenalis Pierre ex Pitard）為茜草科植物，其枝、樹皮等具有藥用價(jià)值，主要分布于廣東、海南及廣西等省區(qū)，含有黃酮苷、酚類，主要用于外感發(fā)熱、急性黃疸、胃痛、急性扁桃體炎及咽喉炎等。從莖分離物（主要為生物堿）具有一定的抑菌作用。

裸花紫珠和膽木一般都單獨(dú)使用，這在很大程度上限制了二者在臨床上的廣泛應(yīng)用，本研究將對(duì)二者組合的藥效學(xué)進(jìn)行研究，針對(duì)性地協(xié)同增強(qiáng)二者的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌等主要功效，篩選出二者的最佳藥效學(xué)組合，增強(qiáng)藥效的同時(shí)，以其減少藥物使用量?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1儀器與材料

11儀器AEG-120G型電子分析天平（島津）；UV-2401PC紫外分光光度計(jì)（島津）；YLS-5Q臺(tái)式超級(jí)控溫燙傷儀；HW-3智能熱原儀（天大天發(fā)）。

12藥物裸花紫珠水提取物（簡(jiǎn)稱A）、裸花紫珠60%乙醇提取物（簡(jiǎn)稱B）、膽木水提取物（簡(jiǎn)稱C）、膽木60%乙醇提取物（簡(jiǎn)稱D），以上提取物由海南省藥物研究所自制。實(shí)驗(yàn)受試物根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求配制。陽性對(duì)照藥阿司匹林腸溶片（批號(hào)：20080106，規(guī)格：25mg/片，昆明云健制藥有限公司）。

13動(dòng)物SPF級(jí)昆明種小鼠、普通級(jí)家兔，由長(zhǎng)沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2009-0012。

2方法

21組方抗炎作用篩選實(shí)驗(yàn)

211小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)[5]取小鼠240只，雌雄各半，體重為18～22g，隨機(jī)分成24組，每組10只，依次為陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組、A～D四種提取物的各劑量（026g/kg、052g/kg和104g/kg）組和A∶C（039g/kg∶013g/kg）、A∶C（035 g/kg∶017 g/kg）、A∶C（026 g/kg∶026 g/kg）、A∶C（017 g/kg∶035 g/kg）、A∶C（013 g/kg∶039 g/kg）、B∶D（039 g/kg∶013 g/kg）、B∶D（035 g/kg∶017 g/kg）、B∶D（026 g/kg∶026 g/kg）、B∶D（017 g/kg∶035 g/kg）、B∶D（013 g/kg∶039 g/kg）等各組合組各組分別按20mL/kg的容積灌胃給藥，灌服相應(yīng)的藥液，每天1次，各組小鼠連續(xù)灌胃給藥3d。末次給藥后1h，[JP]各鼠尾靜脈注射05%伊文思藍(lán)生理鹽水01mL/10g，隨即腹腔注射06%醋酸02mL/只。20min后小鼠脫臼處死。剖開腹腔，用6mL生理鹽水?dāng)?shù)次沖洗腹腔，收集并合并沖洗液于離心管內(nèi)，加入生理鹽水至于10mL，[JP2]以3000r/min，離心15min，取出上清液于分光光度計(jì)590nm波長(zhǎng)處比色，以吸光度表示伊文思藍(lán)滲出量。

212小鼠鼠耳腫脹試驗(yàn)[6]取小鼠240只，雌雄各半，體重為18～22g，隨機(jī)分成24組，每組10只，[JP2]各組分別按20mL/kg的容積灌胃給藥，灌服相應(yīng)的藥液，每天1次，各組小鼠連續(xù)灌胃給藥3d。末次給藥后1h，給小鼠右耳涂以二甲苯003mL/只，左耳作對(duì)照，20min后處死小鼠，用直徑6mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，精密稱量，按以下公式計(jì)算各值。腫脹度=右耳重量-左耳重量。每組劑量均以浸膏計(jì)。[JP]

22組方鎮(zhèn)痛作用篩選實(shí)驗(yàn)[7]

221熱板法小鼠篩選：調(diào)節(jié)恒溫燙傷儀，使溫度控制在（55±05）℃，取雌性小鼠300只，每次1只放在熱板上，測(cè)自小鼠放入在熱板上至出現(xiàn)舔足所需時(shí)間，作為該鼠的痛閾值，凡舔后足時(shí)間小5s或大于30s或跳躍者棄之不用，選合格小鼠240只。取合格小鼠240只，分為24組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前各組每只小鼠測(cè)其正常痛閾值。試驗(yàn)時(shí)各組小鼠按擬定劑量灌胃，1次/d，連續(xù)3d，末次給藥后60min將小鼠放在熱板上（55±05）℃測(cè)其痛閾值，如60s仍無反應(yīng)，則痛閾值以60s計(jì)，計(jì)算鎮(zhèn)痛率，鎮(zhèn)痛率=（給藥組痛閾值一對(duì)照組痛閾值）/對(duì)照組痛閾值×100%。

222扭體實(shí)驗(yàn)取健康小鼠240只，隨機(jī)分成24組，每組10只，雌雄各半。各組小鼠每日按04mL/20g的容積灌胃1次，連續(xù)給藥3d，于末次給藥后60min，腹腔注射05%醋酸02mL/只，觀察15min內(nèi)各組小鼠由醋酸引起的扭體次數(shù)。

23組方的體外抗菌作用篩選研究[6]實(shí)驗(yàn)菌株：大腸埃希菌（2株）、金黃色葡萄球菌（2株）、鏈球菌（1株）、白色假絲酵母菌（2株）、解脲支原體（2株），均來自海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床微生物室。培養(yǎng)基采用血瓊脂平板、沙保弱平板和M-H肉湯。試驗(yàn)方法采用肉湯稀釋法。藥物濃度依次為02、01、005、0025、00125g/mL。

24組方的解熱作用篩選[8]取家兔，雌雄不限（雌兔應(yīng)未孕），實(shí)驗(yàn)前對(duì)家兔進(jìn)行預(yù)選，家兔單獨(dú)裝盒，只固定頸部，探頭插人直腸，深度約6cm，測(cè)溫探頭整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中均保持在家兔直腸內(nèi)；室溫保持在20℃，每隔30min記錄體溫1次，共測(cè)8次，選取體溫在380～396℃之間，體溫波動(dòng)不大于04℃的家兔96只，隨機(jī)分成16 組，每組6只，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日停食2h，相隔30min測(cè)量2次體溫，取平均值作為初始體溫，然后分別按相應(yīng)劑量灌胃給藥1次，05h后靜脈注射致熱劑 （取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，用氯化鈉注射液溶解，配成10 EU/mL溶液） 1mL/kg，于注射致熱劑給藥后每30min記錄體溫1次，共測(cè)8次，計(jì)算每只家兔各個(gè)時(shí)間的溫度與其初始體溫的差值，即為體溫的變化值，若為負(fù)值，計(jì)為0 ℃，計(jì)算各組體溫的變化值。

25統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)用SPSS 100軟件處理，以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x[TX-*3]±s）表示，采用方差分析法，P<005表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

31組方抗炎作用篩選實(shí)驗(yàn)

311小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)除劑量為026g/kg的A～D組以外，其余各組與溶劑對(duì)照組比較，明顯抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增高，減少滲出（P<005）；阿司匹林組，劑量為104 g/kg 的A～D各組、 D組（劑量052g/kg）和B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）組的效果明顯（P<001）。見表1。

312小鼠鼠耳腫脹試驗(yàn)除劑量為026g/kg的A～D組以外，其余各組與溶劑對(duì)照組比較，對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有制作用（P<005）；阿司匹林組，劑量為104 g/kg 的A～D各組、 D組（劑量052g/kg）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）和B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]2）組的效果明顯（P<001）。

32組方鎮(zhèn)痛作用篩選實(shí)驗(yàn)

321熱板法各組給藥后痛闕值與給藥前比較，各給藥組與溶劑對(duì)照組比較，給藥劑量為052g/kg的 C和D組、A∶[KG-*3/5]C（1∶[KG-*3/5]3）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]2）等各組均能明顯延長(zhǎng)小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期（P<005）；阿司匹林組、給藥劑量為104g/kg的 C～D組和B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]3）能顯著延長(zhǎng)小鼠熱板舔足反應(yīng)潛伏期（P<001），其余各組均無明顯抑制作用。見表2。

322扭體實(shí)驗(yàn)與溶劑對(duì)照組比較，由05%醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)，劑量為052g/kg 的C和D、A∶[KG-*3/5]C（1∶[KG-*3/5]3）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]1）、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]2）等各組均能明顯抑制由05%醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)（P<005）；阿司匹林組、劑量為104g/kg的C和D組、B∶[KG-*3/5]D（1∶[KG-*3/5]3）能顯著由05%醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)（P<001）；其余各組均無明顯抑制作用。

34組方的解熱作用篩選裸花紫珠和膽木的提取液，與溶劑對(duì)照組比較，單方A、C、D（劑量：04 g/kg）在注射內(nèi)毒素4h后，能抑制家兔體溫升高（P<005）；B（劑量：04 g/kg）在注射內(nèi)毒素3h和4h后，均能抑制家兔體溫升高（P<005）。各組方與溶劑對(duì)照組比較，A∶C（3∶1）和B∶D（2∶1）在注射內(nèi)毒素4h后，能抑制家兔體溫升高（P<005）；A∶C（2∶1）在注射內(nèi)毒素3h和4h后，均能抑制家兔體溫升高（P<005）；A∶C（1∶1）和B∶D（3∶1）在注射內(nèi)毒素2h～4h后，均能抑制家兔體溫升高（P<005）；B∶D（1∶1）在注射內(nèi)毒素1～4h后，均能抑制家兔體溫升高（P﹤005）。結(jié)果顯示，裸花紫珠和膽木提取液?jiǎn)畏胶透鹘M方對(duì)家兔具有一定的解熱作用，其中組方B∶D（1∶1）效果更明顯。

4討論

本研究考察了裸花紫珠和膽木的水和醇提取物單方和組方的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱、抑菌作用。結(jié)果顯示，在體內(nèi)抗炎藥理實(shí)驗(yàn)中，兩者單方劑量052、104g/kg·bw和各組方（總劑量為052g/kg·bw）對(duì)冰醋酸引起的小鼠腹部毛細(xì)血管通透性增加和二甲苯所致的小鼠耳腫脹具有一定抑制作用，且裸花紫珠醇提物：膽木醇提物（026g/kg ： 026g/kg）在抑制炎癥方面協(xié)同增效的趨勢(shì)更為明顯。在鎮(zhèn)痛藥理實(shí)驗(yàn)中，采用熱板法和扭體實(shí)驗(yàn)對(duì)兩者進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)，裸花紫珠水提和醇提取液無明顯的鎮(zhèn)痛作用，膽木水和醇提取液?jiǎn)畏皆趧┝?52g/kg·bw時(shí)，具有鎮(zhèn)痛作用，且鎮(zhèn)痛作用與劑量呈正關(guān)系；組方A∶C（1∶3）、B∶D（1∶1）、B∶D（1∶2）和B∶D（1∶3）均對(duì)小鼠亦有一定的鎮(zhèn)痛作用。在體外抗菌作用研究中，試驗(yàn)結(jié)果顯示，裸花紫珠和膽木提取液?jiǎn)畏?、各組方對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、白色假絲酵母菌、解脲支原體均有一定的抑菌作用。在組方解熱作用篩選試驗(yàn)中，總劑量為04g/kg·bw時(shí)，兩者單方和組方均能降低細(xì)菌內(nèi)毒素致熱家兔體溫的升高（P<005），裸花紫珠醇提物：膽木醇提物（026 g/kg∶026g/kg）對(duì)內(nèi)毒素致熱家兔的解熱效果更佳。

裸花紫珠又稱紫珠，主要成分為黃酮類、縮合鞣質(zhì)[9]，可抑制毛細(xì)血管通透性，對(duì)早期的炎癥滲出、腫脹有明顯的抗炎性反應(yīng)作用，同時(shí)可縮短出、凝血時(shí)間，止血效果顯著，還能抑制多種細(xì)菌可預(yù)防繼發(fā)性感染的發(fā)生，具有保肝降酶的作用。膽木的主要含有黃酮苷、酚類，主要用于治療外感發(fā)熱、急性黃疸、胃痛、急性扁桃體炎以及咽喉炎等，其分離物生物堿還具有一定的抑菌作用。前期通過對(duì)裸花紫珠和膽木水和60%乙醇提取物進(jìn)行活性成分分析，發(fā)現(xiàn)60%乙醇提取物裸花紫珠的出膏率、總黃酮和鞣質(zhì)含量均高于水的提取物；膽木的60%乙醇提取物的出膏率、總黃酮和生物堿含量均高于水的提取物。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，裸花紫珠和膽木的60%乙醇提取物較水的提取物藥效更佳，且兩者的組合物裸花紫珠醇提物：膽木醇提物（026g/kg∶026g/kg）在抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌作用方面協(xié)同增效明顯，可減少單方使用的劑量，具有開發(fā)的潛能。因此，裸花紫珠和膽木的聯(lián)合使用可協(xié)同增強(qiáng)抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌作用，且與主要成分總黃酮、鞣質(zhì)和生物堿含量成一定的量效關(guān)系?？煽紤]將組方裸花紫珠醇提物：膽木醇提物（026g/kg∶026g/kg）開發(fā)出復(fù)合型藥物組合物，針對(duì)性地協(xié)同增強(qiáng)二者的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱和抗菌等主要功效，進(jìn)行下一步的研究開發(fā)，開發(fā)出新品種藥物，以期能縮短病程、降低并發(fā)癥的發(fā)生率，使用方便，且無藥物不良反應(yīng)，創(chuàng)立海南南藥和黎族醫(yī)藥新的品牌。

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（收稿日期：2017-01-13編輯：梁志慶）