丁玉文 李瑞琴 金 艷 郭迎科

(河南中醫(yī)學(xué)院科技處病理實(shí)驗(yàn)中心，鄭州，450046)

中醫(yī)藥對(duì)肺纖維化大鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)的影響

丁玉文 李瑞琴 金 艷 郭迎科

(河南中醫(yī)學(xué)院科技處病理實(shí)驗(yàn)中心，鄭州，450046)

肺纖維化是一種發(fā)病機(jī)制尚不明確的慢性炎癥性肺疾病，中醫(yī)藥(包括針灸)等治療方法在對(duì)其治療上有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，許多新的研究手段逐漸應(yīng)用于肺纖維化的研究，本文查閱近十余年來應(yīng)用透射電子顯微鏡研究肺纖維化的文獻(xiàn)，總結(jié)了傳統(tǒng)中醫(yī)藥及針灸治療對(duì)肺纖維化超微結(jié)構(gòu)的影響，以期獲得臨床用藥的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。

肺纖維化；超微結(jié)構(gòu)；中醫(yī)藥；針灸

肺纖維化是一種發(fā)病機(jī)制尚不明確的慢性炎癥性疾病，多發(fā)常見，治療難度較大，預(yù)后較差，嚴(yán)重威脅人類的健康。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，環(huán)境污染、不良生活習(xí)慣等因素導(dǎo)致人們的抵抗力下降，肺纖維化疾病的發(fā)病率和病死率不斷增加，然而臨床對(duì)其治療尚無有效的方法。近年來隨著中醫(yī)藥在治療肺纖維化疾病方面的研究，發(fā)現(xiàn)了許多有效的方法，本文從肺纖維化大鼠肺組織形態(tài)學(xué)超微結(jié)構(gòu)方面，研究中醫(yī)藥療效的優(yōu)劣。

1 單味中藥對(duì)肺纖維化大鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)的影響

中醫(yī)藥在治療疾病方面注重方藥的配伍，很少選用單味藥治療，而研究發(fā)現(xiàn)單味中藥及其提取物在肺纖維化方面有著獨(dú)特的治療作用，并且對(duì)超微結(jié)構(gòu)產(chǎn)生不同的影響。

1.1 丹參 丹參主要有效成分為丹參酮、丹參酚酸等。林軍等[1]關(guān)于博萊霉素致肺纖維化動(dòng)物模型病理觀察及丹參總酚酸干預(yù)作用研究，超微結(jié)構(gòu)觀察顯示：丹參總酚酸組間質(zhì)中膠原的沉積減輕程度明顯，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與線粒體可見輕度腫脹。結(jié)論：丹參總酚酸可以明顯減輕肺組織纖維化程度。

1.2 川芎 川芎嗪是川芎的有效成分，趙儉等[2]從細(xì)胞學(xué)超微結(jié)構(gòu)變化觀察川芎嗪對(duì)肺間質(zhì)纖維化的治療作用時(shí)發(fā)現(xiàn)：7 d川芎嗪組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較BLM組減輕，肺泡II型細(xì)胞少數(shù)板層小體空泡樣變，微絨毛存在且較豐富，14、28 d川芎嗪組肺間質(zhì)中膠原原纖維總量不多。證實(shí)了川芎嗪可以減輕博來霉素所致大鼠肺組織纖維化程度。

1.3 黃芪 黃芪是豆科草本植物蒙古黃芪、莢膜黃芪的干燥根，主要化學(xué)成分有黃芪皂苷、黃芪多糖、黃芪總黃酮、多種氨基酸等。劉永琦等[3]將實(shí)驗(yàn)分為空白組、模型組、地塞米松組、黃芪水提物組、黃芪皂苷組，電鏡結(jié)果顯示：三個(gè)治療組均能改善肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，黃芪2組在對(duì)細(xì)胞游離面微絨毛的改善方面好于地塞米松組；黃芪皂苷組在對(duì)核及核仁、細(xì)胞內(nèi)板層小體等形態(tài)改善方面優(yōu)于黃芪水提取物組。揭示黃芪兩用藥組能保護(hù)肺纖維化大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。李金田等[4]的實(shí)驗(yàn)同樣證明黃芪多糖能夠保護(hù)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。

1.4 苦參 苦參堿為苦參的主要有效成分，付松泉等[5]研究苦參堿對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠超微結(jié)構(gòu)的影響。透射電鏡結(jié)果，苦參堿治療組同模型組相比，7 d：肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞數(shù)目增多，板層小體增多明顯，但線粒體嵴仍清晰且隱約可見，微絨毛較豐富；14～28 d：成纖維細(xì)胞增多較模型組減輕，膠原纖維增多也較輕。結(jié)論：苦參堿能減慢肺纖維化的發(fā)展，明顯改善肺泡上皮的超微結(jié)構(gòu)。

1.5 蛇床子 蛇床子素為蛇床子的主要有效成分，崔紅霞等[6]研究發(fā)現(xiàn)，超微結(jié)構(gòu)觀察：蛇床子素治療肺纖維化大鼠28 d后，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞中板層小體數(shù)量與博來霉素組相比明顯增多，脫顆粒程度減輕，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)少見擴(kuò)張，線粒體數(shù)目較正常，僅少數(shù)有腫脹。細(xì)胞間質(zhì)中纖維少量存在且較細(xì)，膠原蛋白沉積明顯比模型組減輕。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示蛇床子素能減輕大鼠肺纖維化程度。

1.6 沙苑子 沙苑子含沙苑子苷、生物堿、黃酮類等主要成分。侯燕等[7]研究顯示：與模型組相比，沙苑子總黃酮各給藥組肺纖維化程度明顯改善，肺泡間隔纖維沉積程度減輕，Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞數(shù)量較模型組比明顯減少，細(xì)胞內(nèi)板層小體數(shù)量增多，表面微絨毛可見，線粒體腫脹減輕，線粒體內(nèi)嵴排列較規(guī)則。結(jié)果表明：沙苑子總黃酮可以抑制肺纖維化的發(fā)展，具有抗肺纖維化作用。

1.7 紅芪 紅芪含紅芪多糖、紅芪黃酮、多種氨基酸等主要成分。張毅等[8]超微結(jié)構(gòu)觀察到：紅芪黃酮3個(gè)劑量組肺泡間隔膠原纖維生成明顯減少，線粒體腫脹明顯減輕甚至趨于正常，板層體較模型組明顯增多，其中紅芪黃酮高劑量組效果尤其明顯。結(jié)論：紅芪黃酮可減少細(xì)胞外基質(zhì)沉積、明顯減輕肺纖維化大鼠的纖維化程度。

2 中藥復(fù)方對(duì)肺纖維化大鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)的影響

中藥復(fù)方由多種單味藥組成，在肺纖維化治療上效果更好，對(duì)超微結(jié)構(gòu)的影響更加明顯。

2.1 肺通口服液 肺通口服液(黃芪、黨參、沙參、丹參、當(dāng)歸、川芎、金銀花、連翹等組成)在治療大鼠肺纖維化時(shí)，超微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)：14 d時(shí)，肺通口服液組與模型組相比，間質(zhì)細(xì)胞網(wǎng)帶染色體基本正常，線粒體較多完整，少量線粒體脊減少，肺泡上皮細(xì)胞基本正常，間質(zhì)內(nèi)膠原纖維排列較一致，毛細(xì)血管內(nèi)可見少量紅細(xì)胞，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞分布均勻；28 d時(shí)，用藥組大鼠肺間質(zhì)細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)分布和電子密度基本正常，大多數(shù)線粒體脊恢復(fù)正常，間質(zhì)膠原纖維數(shù)量減少，毛細(xì)血管內(nèi)未見到充盈，可見少量中性粒細(xì)胞，兩類肺泡上皮細(xì)胞核形態(tài)、大小基本正常。結(jié)果表明：肺通口服液對(duì)大鼠肺纖維化模型具有治療作用[9]。

2.2 復(fù)方鱉甲方 段斐等[10]運(yùn)用復(fù)方鱉甲方(鱉甲、赤芍、冬蟲夏草、三七等組成)治療后發(fā)現(xiàn)：復(fù)方鱉甲方各組在7 d、14 d、28 d膠原總纖維含量明顯減少，纖維化程度降低，細(xì)胞外基質(zhì)沉積、呼吸膜增厚等現(xiàn)象也明顯好轉(zhuǎn)。結(jié)論：復(fù)方鱉甲方能抑制實(shí)驗(yàn)大鼠IPF膠原纖維增生，從而發(fā)揮抗纖維化的作用。

2.3 化纖湯 許朝霞[11]擬化纖湯(黃芪、枳實(shí)、水蛭、銀杏葉)，觀察該方對(duì)肺纖維化大鼠肺組織形態(tài)學(xué)的影響，電鏡觀察顯示：化纖湯大劑量組病理改變明顯好于博來霉素模型組,線粒體損傷相對(duì)好轉(zhuǎn)，板層小體損傷相對(duì)減輕，少見空泡樣變，膠原纖維生成相對(duì)減少。結(jié)果表明：化纖湯對(duì)肺纖維化發(fā)展各個(gè)階段的病理變化有著明顯的改善作用。

2.4 雄附散 馬玉琛等[12]關(guān)于雄附散阻抗大鼠肺間質(zhì)纖維化的病理形態(tài)觀察的實(shí)驗(yàn)，電鏡觀察：與模型組相比，雄附散3個(gè)劑量組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞表面微絨毛數(shù)目、板層小體數(shù)量輕度減少甚至接近正常，線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度變化，間質(zhì)膠原纖維輕度增生并接近正常。結(jié)論：雄附散能有效抑制博來霉素誘導(dǎo)的大鼠肺間質(zhì)纖維化的發(fā)生。

2.5 肺纖靈Ⅱ號(hào) 展瑞等[13]探討肺纖靈Ⅱ號(hào)對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠的干預(yù)作用及其作用機(jī)制。肺纖靈Ⅱ號(hào)由中藥冬蟲夏草、丹參及三七提取物按一定比例組成。超微結(jié)構(gòu)觀察：第28天時(shí)，與模型組相比，中藥組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞形態(tài)正常；板層小體形態(tài)和結(jié)構(gòu)尚正常，少數(shù)有排空現(xiàn)象；細(xì)胞間質(zhì)中存在少量膠原纖維。結(jié)論：中藥肺纖靈Ⅱ可對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化具有一定的抑制作用。

2.6 血必凈 胡明等[14]探討百草枯(PQ)中毒致肺纖維化的發(fā)生機(jī)制以及血必凈在PQ中毒時(shí)的治療作用。血必凈注射液主要成分：紅花，赤芍，川芎，丹參，當(dāng)歸；電鏡下觀察：與模型組相比，血必凈組14 d時(shí)，肺組織線粒體數(shù)目增多，腫脹不明顯；間質(zhì)內(nèi)膠原纖維明顯減少，纖維化不明顯。結(jié)論：血必凈可減輕百草枯中毒引起的肺部炎性反應(yīng)，延緩肺纖維化發(fā)展。

2.7 大黃附子湯 劉莉等[15]研究大黃附子湯對(duì)百草枯中毒大鼠肺組織的干預(yù)作用。其中大黃9 g，制附子9 g，細(xì)辛3 g，制備成藥物質(zhì)量濃度1 g/mL的水煎劑。透射電鏡觀察顯示：與模型組相比，大黃附子湯組顯示肺泡結(jié)構(gòu)仍完整，部分肺泡萎陷不張，少數(shù)板層小體排空，線粒水腫明顯減輕。結(jié)論：大黃附子湯可改變模型組大鼠肺損傷的組織形態(tài)以及保護(hù)肺泡上皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。

2.8 健脾益肺Ⅱ號(hào) 林琳等[16]探討健脾益肺Ⅱ號(hào)調(diào)節(jié)機(jī)體氧化/抗氧化平衡的作用及其對(duì)肺組織超微結(jié)構(gòu)的影響，該方由黨參、黃芪、柴胡、牡荊子等組成。透射電鏡結(jié)果表明，與模型組對(duì)比，健脾益肺Ⅱ號(hào)組肺泡Ⅱ型細(xì)胞外緣稍微不完整，毛細(xì)血管外緣較完整，可見大小不等的板層體且數(shù)目明顯增多，肺泡間隔結(jié)締組織層增厚程度減輕。結(jié)果表明：健脾益肺Ⅱ號(hào)可減輕肺纖維化鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)的損傷。

此外，趙蘋利等[17]運(yùn)用益氣化瘀化痰法觀察對(duì)肺纖維化大鼠肺組織結(jié)構(gòu)及血清MMP-9、TIMP-1的影響。藥方由黃芪、白術(shù)、川芎、姜黃、半夏、海藻等組成。電鏡觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)變化，與模型組相比，各治療組均能減少肺間質(zhì)膠原沉積，減輕肺纖維化程，尤以益氣化瘀化痰法組較為明顯。結(jié)論提示：益氣化瘀化痰法組在一定程度上延緩了肺纖維化的進(jìn)程。

3 針灸治療肺纖維化疾病

現(xiàn)代文獻(xiàn)關(guān)于針灸參與治療肺纖維化的報(bào)道很少，中醫(yī)古代文獻(xiàn)中尚未發(fā)現(xiàn)與之對(duì)應(yīng)的病名，許多研究者將本病歸于“肺痿”“肺脹”“絡(luò)病”等范疇，并認(rèn)為“肺痿”最為合適。

孫思邈《千金翼方·針灸中·肺病》謂：“肺俞……主氣逆咳嗽”，“氣短……灸肺俞百壯”“下氣，灸肺俞百壯，又灸太沖五十壯。此穴并主肺痿?！盵18]針灸名家高武編注的《針灸聚英》卷四《〈神應(yīng)針〉腧穴證治歌·痰喘咳嗽》中載錄：“傳尸骨蒸肺痿法，膏肓肺俞四花穴?！盵19]這是針灸學(xué)術(shù)史上第一次正式將膏肓俞、肺俞和四花穴組成灸方治療肺痿的記載[20]。李戎等人曾用博萊霉素對(duì)SD大鼠造模進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，與模型組相比，艾灸治療組肺組織纖維化程度明顯減輕，結(jié)果提示艾灸肺俞、膏肓俞對(duì)肺纖維化的防治具有一定的作用[21]。接著運(yùn)用艾灸肺俞、膏肓俞聯(lián)合少商、商陽刺血對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行治療，結(jié)果表明艾灸刺血、補(bǔ)虛瀉血的結(jié)合治療對(duì)肺纖維化也具有一定的防治作用[22]。此外，艾灸與化纖方結(jié)合起來的“復(fù)合艾灸療法”的大鼠實(shí)驗(yàn)，結(jié)果提示灸藥結(jié)合治療法和艾灸療法不僅在一定程度上更有效地阻抑大鼠肺纖維化的形成和發(fā)展，還具有無不良反應(yīng)的優(yōu)勢(shì)。另外，徐慧卿[23]關(guān)于針?biāo)幉⒂弥委熖匕l(fā)性肺纖維化療效的臨床研究表明，聯(lián)合組(中藥、針灸和激素聯(lián)合治療)能顯著改善患者的肺功能，并在一定程度上改善呼吸困難癥狀。

研究表明，針灸在抑制肺纖維化的形成有一定的療效，而這種效果建立在歷代醫(yī)家大量的治療經(jīng)驗(yàn)以及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究上，其具體作用機(jī)制是什么，目前尚不明確，那么能否從微觀角度比如超微結(jié)構(gòu)方面著手，從根本上解決作用機(jī)理問題，這就需要研究者深入探討。

4 討論

綜上所述，大量實(shí)驗(yàn)研究表明，中醫(yī)中藥治療肺纖維化的確有療效，能夠延緩、抑制肺纖維化的進(jìn)程，但臨床療效才是評(píng)價(jià)藥物療效的唯一標(biāo)準(zhǔn)。查閱大量的文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)臨床研究肺纖維化疾病較少，多數(shù)局限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，而且多以西藥建立的肺纖維化疾病模型為研究對(duì)象，不能體現(xiàn)中醫(yī)證型特色，很難把握證候的演變規(guī)律。在治療過程中，不管是單方治療還是復(fù)方治療，超微結(jié)構(gòu)的確有所改變，但其研究尚缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并沒有一個(gè)評(píng)判的標(biāo)準(zhǔn)，無法衡量研究方法的優(yōu)劣性，這就要求研究者反復(fù)論證，從而使實(shí)驗(yàn)方案更規(guī)范和合理。

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(2015-12-21收稿 責(zé)任編輯：白樺)

Effect of Traditional Chinese Medicine on Pulmonary Fibrosis in Rat Lung Tissue Ultrastructure

Ding Yuwen,Li Ruiqin,Jin Yan,Guo Yingke

(PathologyofExperimentalCenterofScientificResearchDepartment,HeNanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450046,China)

Pulmonary fibrosis is a chronic inflammatory disease,and its pathogenesis is still unclear. Traditional Chinese medicine (TCM,including acupuncture) and other treatment methods have unique advantages in the treatment of pulmonary fibrosis. With the development of modern medical science and technology,many new research methods are gradually applied in pulmonary fibrosis researches. This paper is to study the literature on pulmonary fibrosis by transmission electron microscopy in nearly ten years,and summarize the influence of traditional Chinese medicine and acupuncture treatment on the ultrastructure of pulmonary fibrosis,in order to obtain lab basis for clinical medicine application.

Pulmonary Fibrosis; Ultrastructure; Traditional Chinese Medicine; Acupuncture

河南省自然科學(xué)基金重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(編號(hào)：142102310504)——中藥對(duì)肺纖維化前期TGF-β-Smad信號(hào)通路及肺組織超微結(jié)構(gòu)的影響；河南省中醫(yī)藥管理局醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)項(xiàng)目(編號(hào)：2013ZY04028)——宣痹通陽法對(duì)肺纖維化TGF-β-Smad信號(hào)通路的調(diào)控及療效評(píng)定；河南省科技廳基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究(編號(hào)：112300410052)——肺纖維化前期肺組織ICAM-1、TGF-β、CTGF表達(dá)和超微結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)觀察

丁玉文(1988.04—)，女，碩士研究生，主要研究方向：肺纖維化的發(fā)病機(jī)制及防治的實(shí)驗(yàn)室研究，E-mail：545734761@qq.com

李瑞琴(1963.04—)女，大學(xué)本科，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：肺纖維化的發(fā)病機(jī)制及防治的實(shí)驗(yàn)室研究，E-mail：lirqin@yeah.net

R256.19;R-332

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.01.058