吳愛(ài)花,田岳鳳
(1.太原市中醫(yī)醫(yī)院,山西太原030001; 2.山西中醫(yī)學(xué)院,山西太原 030024)
針灸對(duì)免疫抑制動(dòng)物干預(yù)作用的研究進(jìn)展
Progress of acupuncture and moxibustion interventions in immunosuppressive animal
吳愛(ài)花1,田岳鳳2
(1.太原市中醫(yī)醫(yī)院,山西太原030001; 2.山西中醫(yī)學(xué)院,山西太原 030024)
通過(guò)對(duì)近十年來(lái)應(yīng)用針刺、艾灸不同方法對(duì)免疫抑制動(dòng)物干預(yù)作用的研究成果進(jìn)行整理與歸納,發(fā)現(xiàn)針灸對(duì)機(jī)體免疫功能具有雙向調(diào)節(jié)作用。大量研究結(jié)果顯示,針刺、艾灸不同穴位,均能提高動(dòng)物免疫功能,但目前尚未形成系統(tǒng)研究。通過(guò)對(duì)近十年來(lái)針灸調(diào)節(jié)免疫抑制動(dòng)物研究文獻(xiàn)的整理、分析,為今后進(jìn)一步研究針灸對(duì)人體的作用提供思路。
針刺;艾灸;免疫抑制動(dòng)物;實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展
針灸作為我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué),因其方便快捷、安全有效及綠色等優(yōu)點(diǎn),一直頗受關(guān)注,針灸可影響不同組織中共同介導(dǎo)物如神經(jīng)遞質(zhì)、激素及細(xì)胞因子的含量來(lái)產(chǎn)生作用,進(jìn)而改善機(jī)體的免疫失衡狀態(tài),通過(guò)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)實(shí)現(xiàn)對(duì)機(jī)體免疫功能整體、雙向的調(diào)整作用。許多實(shí)驗(yàn)研究證明,針灸能夠調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力,使免疫力低下的動(dòng)物其免疫功能得以提高。近幾年來(lái),許多學(xué)者通過(guò)應(yīng)用免疫抑制劑造模。本文從針刺和艾灸兩個(gè)方面對(duì)免疫抑制動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行綜合評(píng)述,分析針灸對(duì)免疫抑制力有調(diào)節(jié)作用和對(duì)免疫抑制動(dòng)物作用的不足。
環(huán)磷酰胺(CTX)是烷化劑中最常用的一種免疫抑制劑,許多實(shí)驗(yàn)研究常用此建立免疫功能低下模型,張蕾等[1]采用環(huán)磷酰胺一次注射給藥后模型組小鼠淋巴細(xì)胞增殖指標(biāo)顯著受抑,NK細(xì)胞活性顯著降低,說(shuō)明造模成功。李霞等[2]將小鼠分成環(huán)磷酰胺注射組、氫化可的松組、正常對(duì)照組3組。結(jié)果:環(huán)磷酰胺可明顯抑制小鼠胸腺雙陽(yáng)性CD4、CD8T淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生且造模成功。熊延靖等[3]將正常小鼠腹腔內(nèi)一次性注射環(huán)磷酰胺200 mg/kg建立免疫抑制模型,第2、3、4天行尾靜脈采血,免疫抑制組小鼠白細(xì)胞數(shù)量明顯降低,表明環(huán)磷酰胺能夠?qū)е旅庖吖δ艿拖隆}R麗娟等[4]為評(píng)價(jià)食品安全性,以環(huán)磷酰胺不同劑量誘導(dǎo)正常小鼠產(chǎn)生免疫抑制,以選擇合適的免疫抑制動(dòng)物模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,兩組不同劑量環(huán)磷酰胺均能使外周血淋巴細(xì)胞數(shù)目和百分比下降,細(xì)胞毒性T細(xì)胞、NK細(xì)胞活性下降,對(duì)小鼠引起較為嚴(yán)重的免疫抑制。并認(rèn)為連續(xù)30 d小劑量環(huán)磷酰胺給藥方式建立的免疫抑制動(dòng)物模型較適合運(yùn)用于食品安全性的評(píng)價(jià)。宋雁等[5]用環(huán)磷酰胺4種建模方法的小鼠免疫器官重量、外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)及其淋巴細(xì)胞百分比等較對(duì)照組均有不同程度的下降,均可引起血清免疫球蛋白IgA、IgG的明顯下降。
地塞米松在科學(xué)研究中也常用于免疫抑制模型的建立。楊巧紅[6]采用地塞米松制作小鼠胸腺萎縮模型,結(jié)果顯示,模型組與對(duì)照組相比小鼠胸腺指數(shù)降低顯著,說(shuō)明地塞米松可誘導(dǎo)小鼠胸腺萎縮模型的建立。李娟等[7]將大鼠隨機(jī)分成兩組,免疫正常組和免疫抑制組(將飲用水中每天加入地塞米松、慶大霉素),最后對(duì)兩組大鼠的血象進(jìn)行觀察,結(jié)果表明免疫抑制組中白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞均顯著下降。
脾臟是動(dòng)物體內(nèi)最大的外周性免疫器官,非特異性免疫能力可通過(guò)脾臟指數(shù)的高低進(jìn)行客觀反映。楊燕燕等[8]采用黃兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,將其腹部皮下注射氫化可的松,次日耳緣靜脈采血,外周血CD4、CD8細(xì)胞含量均與注射前相比明顯下降。其中免疫下降最為明顯的一組為30 mg/kg劑量組,脾臟較對(duì)照組也呈現(xiàn)不同程度縮小,脾臟指數(shù)相應(yīng)降低。呂穎堅(jiān)等[9]將SPF級(jí)昆明種小鼠肌內(nèi)注射氫化可的松后,可以穩(wěn)定有效地降低小鼠碳廓清吞噬功能、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能,氫化可的松組NK細(xì)胞活性轉(zhuǎn)換值也明顯升高。
方廖瓊[10]采用60Coγ射線輻射建立體外免疫抑制細(xì)胞模型,結(jié)果發(fā)現(xiàn),輻射可導(dǎo)致小鼠T細(xì)胞免疫功能受到抑制。葉燕霞[11]、李覃等[12]研究證明了雙氫青蒿素(DHA)、青蒿素(Art)對(duì)刀豆蛋白A誘導(dǎo)的小鼠T細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用。高劑量時(shí)其抑制效應(yīng)甚至高于地塞米松,而且毒性更低。有些學(xué)者灌胃氟苯尼考溶液制造免疫低下的動(dòng)物模型,表明氟苯尼考能夠明顯降低IgG、脾臟指數(shù)和淋巴細(xì)胞增殖,而蟾酥注射液能緩解由氟苯尼考造成的免疫抑制作用[13]。盧詠梅等[14]將大鼠分為三組,A組:對(duì)照組,B組:大強(qiáng)度游泳訓(xùn)練組,C組:大強(qiáng)度游泳訓(xùn)練加電針組,B組與A組相比,IL-2、γ-IFN、NK 細(xì)胞均出現(xiàn)下降。
張建[15]選用新西蘭大白兔耳緣靜脈注射阿糖胞苷后,免疫抑制前后粒細(xì)胞計(jì)數(shù)有顯著差異,表明阿糖胞苷起到了免疫抑制作用。還有實(shí)驗(yàn)表明雷公藤康堿和異雷公藤春堿均能明顯降低昆明種小鼠外周血中T淋巴細(xì)胞百分比,抑制胸腺和脾臟的重量[16]。
2.1.1 對(duì)T細(xì)胞亞群及比值的影響 梁鳳霞等[17]實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),采用“雙固一通”針?lè)ㄖ委熖悄虿〈笫髮?duì)調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群作用最好,此針?lè)▽?duì)糖尿病大鼠的免疫功能有明顯調(diào)節(jié)作用。顏培宇等[18]用環(huán)磷酰胺制作免疫抑制大鼠模型,發(fā)現(xiàn)針刺后各組與模型組相比IFN-γ和外周血CD4+T細(xì)胞含量顯著升高,其中尤以針刺頭針(百會(huì)及旁開(kāi)4 mm兩針叢刺)加體針(足三里和關(guān)元)的選穴療效最佳。劉建民[19]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明,電針足三里、關(guān)元能對(duì)抗環(huán)磷酰胺的免疫抑制作用,其機(jī)制是電針可調(diào)節(jié)T細(xì)胞增殖能力、T細(xì)胞分泌IL-2和IL-2R的水平及CD8+T細(xì)胞表面抗原CD28的表達(dá)。盧詠梅等[20]實(shí)驗(yàn)研究,大強(qiáng)度游泳訓(xùn)練可導(dǎo)致大鼠免疫力下降甚至抑制,采用電針(足三里、百會(huì)、關(guān)元)治療后可明顯提高CD3+、CD4+水平,同時(shí)可使大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著下降,表明電針對(duì)運(yùn)動(dòng)性免疫抑制具有正向調(diào)節(jié)作用。黃誠(chéng)[21]研究發(fā)現(xiàn)2/100 Hz電針連續(xù)刺激可使環(huán)磷酰胺小鼠CD4+/CD8+明顯升高,表明電針調(diào)節(jié)機(jī)體免疫抑制狀態(tài)產(chǎn)生的效應(yīng)與刺激頻度有關(guān)。
2.1.2 對(duì)NK細(xì)胞、外周血白細(xì)胞數(shù)量的影響 阮步青等[22]將大鼠腹腔注射免疫抑制后通過(guò)針刺的干預(yù)作用,NK細(xì)胞活性明顯改善。華亮等[23]發(fā)現(xiàn)SD大鼠使用環(huán)磷酰胺后白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯降低,說(shuō)明處于免疫抑制狀態(tài)。通過(guò)足三里、關(guān)元穴針刺預(yù)處理使免疫抑制狀態(tài)下大鼠體內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)量顯著增多。
2.2.1 對(duì)白細(xì)胞介素的影響 張帆[24]實(shí)驗(yàn)得知,針刺對(duì)大鼠血清IL-6具有雙重調(diào)節(jié)作用,對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠表現(xiàn)為下降,而針刺在調(diào)節(jié)束縛模型大鼠IL-6水平時(shí),表現(xiàn)為明顯上升,從而達(dá)到調(diào)節(jié)機(jī)體紊亂的免疫狀態(tài)。朱志中等[25]將免疫抑制大鼠施以針刺(百會(huì)、足三里、關(guān)元)結(jié)合康復(fù)訓(xùn)練預(yù)處理后脾臟指數(shù)明顯提高,血清IL-2含量明顯增加,且治療效果優(yōu)于單純針刺或單純康復(fù)組。有實(shí)驗(yàn)觀察到創(chuàng)傷大鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)換功能、IL-2誘生活性降低,而電針足三里、闌尾穴可恢復(fù)這種免疫抑制狀態(tài)[26]。孟宏[27]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,電針治療后可下調(diào)慢性應(yīng)激疲勞證候模型大鼠體內(nèi)升高的IL-1β、IL-6趨于正常水平,通過(guò)對(duì)心理-神經(jīng)-免疫網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)緩解疲勞、低熱等癥狀,從而達(dá)到治療慢性疲勞綜合征的目的。李輝等[28]實(shí)驗(yàn)表明,電針大椎、命門(mén)及尾部中點(diǎn)可促進(jìn)關(guān)節(jié)炎大鼠模型脾臟淋巴細(xì)胞活性,使血清IL-2含量相應(yīng)升高。艾坤等[29]認(rèn)為可能是通過(guò)電針增加血漿IL-10的含量,降低 IL-1、IL-2、TNF-α 含量,使佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足趾腫脹度得以明顯改善,表明電針可改善免疫功能狀態(tài)。
2.2.2 對(duì)誘生干擾素的影響 盧詠梅等[14]大強(qiáng)度游泳訓(xùn)練后IL-2、γ-IFN、NK細(xì)胞均出現(xiàn)下降,成功建立運(yùn)動(dòng)性免疫抑制大鼠模型,通過(guò)電針(百會(huì)、關(guān)元、足三里)干預(yù)后γ-IFN、NK細(xì)胞增高明顯,電針對(duì)免疫抑制具有正向調(diào)節(jié)作用。王坤等[30]對(duì)手術(shù)創(chuàng)傷后免疫抑制狀態(tài)大鼠進(jìn)行電針刺足三里和闌尾穴干預(yù)作用后,大鼠脾臟T細(xì)胞、白細(xì)胞介素-2、γ-干擾素得以提高。胡格等[31]給予大鼠腹腔注射免疫抑制劑后通過(guò)電針刺激足三里穴可提高大鼠脊髓內(nèi)IFN-γ樣免疫陽(yáng)性物質(zhì)的表達(dá)。
2.2.3 對(duì)補(bǔ)體及免疫球蛋白含量的影響 李紅等[32]測(cè)得運(yùn)動(dòng)后小鼠脾臟、胸腺系數(shù)及補(bǔ)體C3、C4的含量較正常小鼠相對(duì)減少,而針刺足三里能提高小鼠游泳耐力,使補(bǔ)體C3、C4的含量升高,且脾臟、胸腺系數(shù)較運(yùn)動(dòng)組明顯提高。賴敏等[33]實(shí)驗(yàn)顯示通過(guò)電針刺激“足三里”、“合谷”、“三陰交”可抑制大鼠Walker-256肝癌、胃癌、皮下瘤的生長(zhǎng),且增強(qiáng)其免疫功能。其中電針組IgG、IgM、C3含量較其模型組明顯增高。
吳小華等[34]用環(huán)磷酰胺一次性注射小鼠腹腔內(nèi)制造免疫抑制模型,其中針刺組(雙側(cè)足三里穴及關(guān)元穴)對(duì)免疫抑制狀態(tài)下野生型小鼠(Cx43+/+小鼠)的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、白細(xì)胞數(shù)與模型組相比均有明顯升高,說(shuō)明針刺足三里和關(guān)元穴可增強(qiáng)免疫抑制狀態(tài)小鼠的免疫功能。胡志蘋(píng)等[35]探討不同頻率電針對(duì)環(huán)磷酰胺造模小鼠免疫功能的影響,結(jié)果顯示,各頻次單次或連續(xù)穴位電針刺激可影響免疫功能低下小鼠的脾臟指數(shù)、NK細(xì)胞殺傷活性及血清IL-6的含量。其中效果更為明顯的是采用電針2/100 Hz交替頻率刺激穴位。
另有研究表明,用環(huán)磷酰胺制作免疫抑制大鼠模型,結(jié)果表明,頭穴+體穴可使免疫抑制大鼠下丘腦SPmRNA的表達(dá)量升高,增加機(jī)體的免疫力[36]。
何學(xué)斌等[37]通過(guò)針灸關(guān)元、氣海、足三里后發(fā)現(xiàn)氣虛大鼠的紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率明顯升高,實(shí)驗(yàn)表明針灸對(duì)氣虛大鼠的紅細(xì)胞免疫功能低下具有一定的恢復(fù)和提高作用。閆明茹[38]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,針灸關(guān)元穴能明顯使佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠遲發(fā)性左足足爪腫脹率降低,通過(guò)調(diào)節(jié)IL-1、IL-2的水平來(lái)降低機(jī)體炎癥反應(yīng)程度,均提示針灸可調(diào)節(jié)機(jī)體亢進(jìn)的免疫反應(yīng)起到抑制作用。王維等[39]采用小鼠游泳訓(xùn)練制作氣虛證小鼠模型,結(jié)果顯示,模型組與正常組比較,胸腺和脾臟系數(shù)及補(bǔ)體C3、C4含量均降低,而針刺組和艾灸組較模型組則明顯升高,說(shuō)明針灸關(guān)元和氣??裳泳徯叵俳Y(jié)構(gòu)的萎縮和提高機(jī)體免疫機(jī)能。有學(xué)者實(shí)驗(yàn)研究表明,針灸脾虛泄瀉大鼠雙側(cè)天樞穴后,SIgA(分泌型IgA)分泌增多[40],提示通過(guò)針灸治療可能提高或者促進(jìn)SIgA的合成與分泌,進(jìn)而達(dá)到增強(qiáng)免疫的作用。有些學(xué)者也得出這樣的結(jié)論,通過(guò)針灸可下調(diào)荷瘤小鼠CD4、CD25、Treg細(xì)胞體外增值能力來(lái)調(diào)節(jié)免疫失衡狀態(tài)[41]。
3.1.1 對(duì)T細(xì)胞亞群和外周血白細(xì)胞的影響 袁民等[42]艾灸通過(guò)提高荷瘤小鼠CD3、CD4的百分率及CD4/CD8的比率來(lái)調(diào)節(jié)荷瘤小鼠的免疫抑制狀態(tài)。舒天麗等[43]通過(guò)兔耳緣靜脈注射環(huán)磷酰胺造模,結(jié)果采用穴位照射(激光同時(shí)照射雙側(cè)足三里穴)預(yù)處理后,白細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增多,且在3天恢復(fù)到正常范圍。說(shuō)明穴位照射預(yù)處理有減少免疫損傷的功效。
3.1.2 對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響 大椎主管全身之陽(yáng)氣、固衛(wèi)安營(yíng),古往今來(lái)其常作為保健防病要穴。通過(guò)艾灸作用其穴位,可起到調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的功能。朱文蓮等[44]將小鼠皮下注射環(huán)磷酰胺造模,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,免疫低下加灸組(大椎穴)可提高免疫抑制后小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬功能。吳娟等[45]建立慢性肝損傷小鼠模型,化膿灸干預(yù)治療后小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)換率和脾臟淋巴IL-2分泌增加,且化膿灸可增加巨噬細(xì)胞的吞噬功能。
3.2.1 對(duì)白細(xì)胞介素的影響 有些學(xué)者艾灸關(guān)元、足三里治療后的衰老小鼠血清IL-2水平、脾臟指數(shù)比模型組明顯增高,而IL-6含量降低[46],說(shuō)明艾灸可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫延緩衰老。邱幸生等[47]觀察艾灸神闕穴可使小鼠血清IL-2、IL-6升高,提高NK細(xì)胞殺傷作用,從而起到抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。王光義等[48]得出結(jié)論,穴位埋線(足三里、腎俞)+艾灸可通過(guò)升高佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠IL-2,降低TNF-α含量來(lái)調(diào)節(jié)大鼠機(jī)體免疫力。裴建等[49]艾灸大椎后能夠提高荷瘤小鼠體內(nèi)低下的中親和力IL-2數(shù)量,使IL-2Rα、IL-2Rβm RNA的表達(dá)水平較腫瘤對(duì)照組明顯提高。說(shuō)明艾灸能夠正向調(diào)節(jié)腫瘤機(jī)體非特異性免疫功能低下或受抑狀態(tài)。高駿等[50]采取艾灸“腎俞”“足三里”可明顯降低實(shí)驗(yàn)性類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠IL-1β含量,并促進(jìn)IL-4分泌,對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血中IL-1β/IL-4失衡進(jìn)行了有效調(diào)整,對(duì)恢復(fù)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠Th1/Th2細(xì)胞因子平衡有重要意義。艾灸在此過(guò)程中發(fā)揮了整體調(diào)節(jié)及雙向良性調(diào)整作用。陳英松等[51]認(rèn)為運(yùn)動(dòng)性疲勞產(chǎn)生的機(jī)制可能與IL-6和IL-10分泌異常有關(guān),該實(shí)驗(yàn)采用21天力竭游泳方式制作慢性疲勞大鼠,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠模型血清中的IL-6和IL-10含量較正常組明顯升高,而艾灸組可使IL-6和IL-10的含量降低。鄔卓文[52]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明,運(yùn)動(dòng)性疲勞模型大鼠血清IL-1β、TNF-α含量均升高,而艾灸雙側(cè)足三里可降低二者含量。
3.2.2 對(duì)免疫球蛋白含量的影響 趙奕[53]實(shí)驗(yàn)研究溫和灸關(guān)元可使慢性疲勞大鼠的免疫功能得到升高,其機(jī)制是通過(guò)提高大鼠血清IgA、IgM、IgG地含量來(lái)實(shí)現(xiàn)的。機(jī)體免疫力的強(qiáng)弱直接或者間接的影響著慢性支氣管炎的發(fā)生和發(fā)展,免疫功能低下是慢性支氣管炎患者普遍存在的問(wèn)題。陽(yáng)仁達(dá)等[54]采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究其機(jī)理,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,隔藥餅灸Ⅰ組(將藥餅置于雙側(cè)肺俞、腎俞)和Ⅱ組(雙側(cè)關(guān)元、足三里)均可提高慢性支氣管炎大鼠血清IgG、IgA的含量,使機(jī)體免疫力得以提高。
高希言等[55]用D-半乳糖造亞急性衰老小鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)P秃笮∈笮叵佟⑵⑴K指數(shù)降低,經(jīng)施灸督脈上“大椎”、“命門(mén)”、“百會(huì)”各穴后的小鼠胸腺、脾臟指數(shù)明顯升高,表明艾灸督脈穴可有效改善造模后衰老小鼠的免疫器官功能。崔瑾等[56]將大鼠共分為六組,除空白組外,將其余大鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺建立動(dòng)物模型,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:(艾灸(膈俞穴)組治療后第5天,外周血白細(xì)胞升高明顯,第9天與空白組基本接近;艾灸組治療后第11天,脾質(zhì)量及脾臟指數(shù)已經(jīng)達(dá)到正常水平;艾灸組治療后血清粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子含量升高作用強(qiáng)于針刺組和西藥組。
綜上所述,從近十年來(lái)實(shí)驗(yàn)研究可看出,針刺與艾灸某些穴位可使免疫抑制動(dòng)物的免疫力得以改善,且針灸對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)主要集中在T淋巴細(xì)胞、外周血白細(xì)胞、NK細(xì)胞、補(bǔ)體、脾臟系數(shù)等。針灸對(duì)免疫調(diào)節(jié)作用顯現(xiàn)的復(fù)雜性、多元化的內(nèi)在機(jī)制,尚需進(jìn)一步探討其系統(tǒng)規(guī)律。本綜述可為今后探索系統(tǒng)研究提供思路和方法,使針灸在調(diào)節(jié)免疫方面得到廣泛的應(yīng)用,造福于人類(lèi)。
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(編輯:張世霞)
R246
:A
:1671-0258(2017)03-0075-05
國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81373742,81674062)
吳愛(ài)花,醫(yī)師,碩士,E-mail:170225989@qq.com
田岳鳳,教授,博士研究生導(dǎo)師,E-mail:tyfsx@163.com