分子印跡固相萃取/高效液相色譜法分離和富集枳實中4種黃烷酮

賀美艷,葉玉鳳,劉 炎,李珍柱,焦必寧,曾紹梅,蘇學素*

(1.西南大學 化學化工學院，重慶 400715；2.中國農(nóng)業(yè)科學院 柑桔研究所，重慶 400712)

分子印跡固相萃取/高效液相色譜法分離和富集枳實中4種黃烷酮

賀美艷1,2,葉玉鳳2,劉 炎2,李珍柱1,焦必寧2,曾紹梅1,蘇學素1*

(1.西南大學 化學化工學院，重慶 400715；2.中國農(nóng)業(yè)科學院 柑桔研究所，重慶 400712)

采用沉淀聚合法以橙皮素為模板分子，2-乙烯基吡啶為功能單體，二甲基丙烯酸乙二醇酯為交聯(lián)劑，合成了橙皮素分子印跡聚合物。利用紫外光譜法確定了最佳功能單體與配比，優(yōu)化了合成條件。采用傅立葉變換紅外光譜、掃描電子顯微鏡、靜態(tài)吸附對聚合物進行表征。實驗結(jié)果表明，分子印跡聚合物的吸附性能明顯優(yōu)于空白印跡聚合物，且此聚合物對柚皮苷、橙皮苷、柚皮素和橙皮素的相對選擇系數(shù)分別為1.40，1.39，1.59和2.89，表明該分子印跡聚合物對4種黃烷酮有較好的選擇性。將印跡聚合物作為固相萃取填料，對枳實提取液進行分離和富集，結(jié)果表明上述4種黃烷酮的提取率分別為72.6%，61.1%，95.4%和93.5%，分離富集效果良好，大大提高了枳實中4種黃烷酮的提取效率。

分子印跡聚合物(MIP)；高效液相色譜；黃烷酮；橙皮素；枳實

枳實為常用中藥，應(yīng)用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為蕓香科植物酸橙 Citrus aurantium L.及其栽培變種或甜橙C.sinensis Osbeck的干燥幼果[1]。枳實性味苦、辛，微寒，歸脾胃大腸經(jīng)，具有破氣消積、化痰除痞的功效[2]。枳實的主要成分為生物堿、黃烷酮及揮發(fā)油等，其中的黃烷酮是一種黃酮類化合物，主要包括柚皮苷、橙皮苷、柚皮素和橙皮素等物質(zhì)。目前，提取和分離黃烷酮的方法有超臨界流體萃取[3]、高效逆流色譜[4-5]、超聲提取[6]、生物酶解[7]、微波輔助、液液萃取(LLE)以及固相萃取等方法，但由于枳實中化學成分較多，基質(zhì)復雜，對黃烷酮的選擇性提取有較大影響，因此，開發(fā)一種能夠同時分離和富集多種黃烷酮的技術(shù)具有重要意義。

分子印跡技術(shù)是指為獲得在空間和結(jié)合位點上與某一分子(模板分子、印跡分子)完全匹配的聚合物的實驗制備技術(shù)。1972年德國的Wulff 和Sarhan[8]成功制備出分子印跡聚合物來拆分手性外消旋酒石酸鹽。與傳統(tǒng)的分離或分析介質(zhì)相比，分子印跡聚合物具有高特異性、高選擇性和高強度等特點，而且制備簡單、成本低、可重復利用、耐受高溫、高壓、酸堿和有機溶劑等[9]，非常適合作為固相萃取柱的填充材料，近年來廣泛應(yīng)用于色譜分離、固相萃取[10]、仿生傳感、模擬酶催化、臨床藥物分析等領(lǐng)域，有望在生物工程、臨床醫(yī)學、環(huán)境監(jiān)測、食品工業(yè)[11-12]等行業(yè)形成產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。

枳實中黃烷酮化合物的結(jié)構(gòu)相似，其活性和藥理相近，通常具有殺菌、抗炎、抗腫瘤、抗HIV 病毒、抗誘變、抗氧化等活性[13]，具有很大的藥用價值。利用橙皮素分子印跡聚合物來提取黃烷酮類化合物有少量報道[14-15]，但大多數(shù)研究是針對單一成分作為提取目標物合成分子印跡聚合物，橙皮素分子印跡固相萃取-高效液相色譜法用于枳實中柚皮苷、橙皮柑、柚皮素、橙皮素4種黃烷酮的分析研究尚未見報道。因此，本文合成了橙皮素分子印跡聚合物，研究了印跡聚合物對4種黃烷酮的選擇性差異，并制備了分子印跡固相萃取柱，建立了基于分子印跡固相萃取技術(shù)的高效液相色譜同時分離枳實中4種黃烷酮的方法。該方法前處理過程簡便、高效、環(huán)保，且有機溶劑用量低，降低了對人體的傷害和對空氣的污染，可用于枳實中4種黃烷酮類物質(zhì)的純化、分離與富集。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

TU-1810紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)，Waters高效液相色譜儀(美國Waters 公司)，JSM-7800F熱場發(fā)射掃描電子顯微鏡(日本電子株式會社)，CZX-GFC.101-2-BS電熱恒溫鼓風干燥箱(上海博泰實驗設(shè)備有限公司)，KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，Milli-Q純水機(法國 Millipore 公司)，梅特勒AB304-S/FACT電子天平(上海志榮電子科技有限公司)，DF101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州科泰實驗設(shè)備有限公司)，Bruker tensor 27傅立葉紅外光譜儀(德國Bruker公司)。

橙皮素(Hesperetin)、橙皮苷(Hesperidin)、柚皮素(Naringenin)、柚皮苷(Naringin)標準品(Sigma-Aldrich公司)；枳實(重慶市北碚區(qū)歇馬鎮(zhèn)和平藥店)；2-乙烯基吡啶(2-VP)、二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA,Aliaddin Industrial Corporation)、偶氮二異丁腈(AIBN)、丙烯酰胺(AM)、α-甲基丙烯酸(MAA)、2-(三氟甲基)丙烯酸(TFMAA)均為分析純，成都市科龍化工試劑廠，乙腈、甲醇(色譜純，Sigma-Aldrich公司)、冰醋酸(分析純，川東化工集團有限公司)。

1.2 高效液相色譜條件

色譜柱：X-Bridge?C18(5 μm，4 mm×250 mm)，流速：1 mL/min，柱溫：25 ℃，進樣量：10 μL，檢測波長：283 nm，壓力：1 366 psi。流動相：A為0.2%乙酸溶液，B為乙腈；梯度洗脫程序：0～10 min，85%～75% A；10～20 min，75%～60% A；20～30 min，60%～50% A；30～35 min，50%～0% A；35～40 min，0% A；40～45 min，0%～85% A；45～50 min，85% A。

1.3 分子印跡聚合物的制備

準確稱取模板分子橙皮素于100 mL圓底燒瓶中，加50 mL致孔劑乙腈溶解，待其完全溶解后加入功能單體2-VP，超聲30 min，加入交聯(lián)劑EGDMA和引發(fā)劑AIBN，超聲脫氣10 min，通N2除氧10 min，密封，放入60 ℃水浴中反應(yīng)24 h，待反應(yīng)完成后，真空干燥，然后用乙酸-甲醇(體積比3∶7)索氏提取洗脫模板分子直至HPLC檢測不到模板分子為止，用甲醇索氏提取法洗去聚合物中殘留的乙酸，70 ℃真空干燥8 h，得到分子印跡聚合物(MIP)，備用?？瞻子≯E聚合物(NIP)的制備除不加橙皮素外，其他條件與MIP相同。

1.4 聚合物的結(jié)構(gòu)表征

用傅立葉紅外光譜儀測定橙皮素、MIP(未洗脫)和NIP(未洗脫)的紅外光譜圖，分析其特征吸收峰的變化。將制備的MIP和NIP進行掃描電鏡觀察，分析其表面形態(tài)特征。

1.5 靜態(tài)吸附性能測定和Scatchard分析

分別稱取9份10 mg MIP和NIP于10 mL離心管中，加入2 mL濃度為2～120 mg/L的橙皮素標準溶液，搖床振蕩2 h，4 000 r/min離心分離20 min，過0.22 μm濾膜，HPLC檢測MIP和NIP吸附前后橙皮素的濃度，根據(jù)吸附前后濃度的變化，由式(1)計算MIP和NIP對橙皮素的吸附量，得吸附量(Q)對起始濃度(C0)的等溫吸附曲線。

Q=[103(C0-Ce)·V]/(M·W)

(1)

采用Scatchard模型評價聚合物的結(jié)合特性。式(2)中，當以Q/Ce對Q作圖時，根據(jù)線性關(guān)系的斜率和截距可求得結(jié)合平衡常數(shù)Kd和最大表觀結(jié)合量Qmax。

Q/Ce=(Qmax-Q)/Kd

(2)

式中，C0為橙皮素的初始濃度(mg/L)，Ce為吸附平衡濃度(mg/L)，V為橙皮素溶液的體積(mL)，M為橙皮素的摩爾質(zhì)量，W為聚合物的質(zhì)量(g)，Q為聚合物的平衡吸附量(μmol/g)，Qmax為最大表觀結(jié)合量(μmol/g)；Kd為結(jié)合位點的平衡離解常數(shù)。

1.6 選擇性能評價實驗

為研究聚合物對4種黃烷酮的選擇性，稱取5 mg MIP和NIP加入一定濃度的4種黃烷酮混合標準溶液，恒溫搖床振蕩2 h，離心10 min(4 000 r/min)，分離上清液，過0.22 μm濾膜，HPLC測定各物質(zhì)的平衡濃度，按公式(3)[16]，計算各物質(zhì)的分配系數(shù)，得到MIP和NIP對底物的選擇性系數(shù)(Ie)。其中，Kd(mL/g)為某物質(zhì)的分配系數(shù)；KMIP和KNIP分別為MIP和NIP對目標物吸附達平衡的分配系數(shù)。

Kd=C0/Ce;Ie=KMIP/KNIP

(3)

1.7 枳實中4種黃烷酮的分子印跡固相萃取

精確稱取2g枳實細粉末于100mL圓底燒瓶中，加入20mL甲醇后稱重，水浴回流1.5h[17]，冷卻至室溫，再次稱重，用甲醇補足損耗，過濾，取上清液過0.22μm濾膜，待MISPE凈化。

稱取100mgMIP和NIP分別溶于丙酮后濕法裝入3mL固相萃取空柱，上樣前依次用甲醇、乙腈和水各2mL進行活化，用1mL10mg/L的4種黃烷酮混合標準溶液上樣，淋洗，洗脫，收集洗脫液，N2吹干后，用甲醇復溶，HPLC測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 高效液相色譜方法的建立

配制濃度為2～120mg/L的4種黃烷酮標準溶液，經(jīng)HPLC測定，繪制峰面積(y)對其質(zhì)量濃度(x，mg/L)的曲線圖，得到柚皮苷、橙皮柑、柚皮素、橙皮素4種黃烷酮的標準曲線、保留時間和檢出限。結(jié)果顯示，4種黃烷酮在2～120 mg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,其相關(guān)系數(shù)分別為0.999 8，0.999 1,0.999 9,0.999 8；檢出限分別為0.5,0.5,0.2,0.2 mg/L。

2.2 聚合物制備條件的優(yōu)化

圖1 不同功能單體與橙皮素預(yù)聚合后的紫外吸收波長Fig.1 UV-spectra of hesperetin with different monomers after prepolymerization

2.2.1 功能單體及其用量的選擇 功能單體能否與模板分子形成氫鍵是制備MIP的關(guān)鍵。利用紫外分光光度計測定橙皮素與不同的功能單體(MAA，2-VP，AM，TFMAA)預(yù)聚合后最大吸收峰的變化情況。實驗結(jié)果如圖1，當功能單體為2-VP時，橙皮素的紫外最大吸收峰發(fā)生了較明顯的紅移，這可能是由于弱酸性的橙皮素在預(yù)聚合過程中與堿性的功能單體2-VP能較好地形成氫鍵。故實驗選擇2-VP作為功能單體。

模板分子與功能單體的比例也會影響聚合物的吸附性能及其選擇性，利用紫外分光光度計考察了橙皮素與2-VP在不同摩爾比下(1∶0，1∶2，1∶4，1∶6，1∶8)聚合后最大吸收峰的變化，實驗結(jié)果表明，當橙皮素與2-VP的比例為1∶6時，紫外最大吸收峰發(fā)生了較大的紅移，所以模板分子與2-VP的最佳比例為1∶6。

表1 致孔劑用量對聚合物的影響Table 1 The effect of the amount of porogen on polymers

圖2 MIP未洗脫(a)，NIP未洗脫(b)和橙皮素(c)的紅外光譜Fig.2 Infrared spectra of MIP(before eluting)(a)，and NIP(b)(before eluting) and hesperetin(c)

2.2.2 交聯(lián)劑用量的確定 交聯(lián)劑(EGDMA)的作用是固定模板分子和功能單體之間形成的復合體，使之在聚合物中具有固定的結(jié)合位點，從而實現(xiàn)聚合物對模板分子的專一選擇性，所以EGDMA的用量至關(guān)重要。實驗測定了橙皮素與EGDMA的摩爾比為1∶10(MIP1)，1∶20(MIP2)，1∶40(MIP3)時的吸附量，結(jié)果表明當橙皮素與EGDMA的比例為1∶20 時，MIP2的吸附量最大，且與NIP2的吸附差異性較大，故選擇兩者的最佳比例為1∶20。

2.2.3 致孔劑用量的確定 溶劑在聚合過程中通常作為分散介質(zhì)和致孔劑，為聚合物的形成提供了合成環(huán)境[18]，實驗選擇極性較小的乙腈為致孔劑，考察了致孔劑用量對聚合物的影響(表1)。結(jié)果顯示，當致孔劑的用量為50 mL時，分子印跡聚合物的吸附量較大且MIP5與NIP5的靜態(tài)吸附差異性較大，突出了MIP的優(yōu)勢。

綜上所述，篩選得到分子印跡聚合物的最優(yōu)制備條件為橙皮素∶2-VP∶EGDMA=1∶6∶20，致孔劑為50 mL乙腈。

2.3 聚合物的結(jié)構(gòu)表征

圖3 MIP(A)和NIP(B)的掃描電鏡圖Fig.3 Scanning electron micrograms of MIP(A) and NIP(B)

2.4 靜態(tài)吸附性能和Scatchard分析

為研究聚合物的結(jié)合特性，測定了MIP和NIP吸附達平衡時的結(jié)合量Q，并對初始濃度(C0)作圖，結(jié)果表明，MIP和NIP對橙皮素的結(jié)合量隨濃度先增加后減少，在100 mg/L 時結(jié)合量達到最大，且在整個吸附過程中MIP對橙皮素的吸附量明顯高于NIP，說明MIP 的吸附能力主要來自于特異性結(jié)合位點，而 NIP 的吸附為非特異性結(jié)合。

圖4 MIP和NIP的Scatchard方程Fig.4 Scatchard equations of MIP and NIP

由Scatchard分析曲線(圖4)可知，對MIP而言，Q/C對Q呈非線性關(guān)系，而圖的兩端呈線性，表明結(jié)合位點是非均一的，MIP有兩種不同類型的結(jié)合位點，即特異性結(jié)合位點和非特異性結(jié)合位點[21]，可計算出MIP所對應(yīng)的Kd1=0.243 μmol/mL，Qmax1=143.61 μmol/g；Kd2=3.88 μmol/mL，Qmax2=5.29 μmol/g。而NIP線性關(guān)系較好，說明NIP只有一種吸附即非特異性吸附，其所對應(yīng)的Kd=0.58 μmol/mL，Qmax=30.86 μmol/g。

2.5 選擇性能評價實驗

根據(jù)平衡時的分配系數(shù)公式和吸附選擇系數(shù)公式，可計算出MIP和NIP對柚皮苷、橙皮苷、柚皮素和橙皮素的選擇性系數(shù)分別為1.40，1.39，1.59和2.89。由于該值越大，表明MIP及NIP對底物的選擇吸附性越強，可知MIP對橙皮素的選擇性大于其他3種物質(zhì)，且MIP對4種結(jié)構(gòu)類似物的分配系數(shù)均高于NIP。以上結(jié)果表明，MIP對4種黃烷酮類結(jié)構(gòu)類似物具有一定的類特異選擇性。

2.6 分子印跡固相萃取

2.6.1 分子印跡固相萃取條件的優(yōu)化 考察了4種黃烷酮標準溶液經(jīng)過上樣、淋洗和洗脫程序后在MISPE柱上的保留特性、柱去雜效果和目標物洗脫，從而篩選出最優(yōu)固相萃取條件。選擇甲醇為上樣溶劑，固相萃取柱的吸附性較好；淋洗液選用甲醇-水(1∶20)，洗脫液選擇極性較強的乙酸-甲醇混合液(3∶7)。實驗結(jié)果顯示，MIP對柚皮苷、橙皮苷、柚皮素和橙皮素的回收率分別為85.4%，65.1%，94.3%和94.5%，回收率均高于NIP，說明MIP對4種黃烷酮的吸附能力比NIP強，即MIP具有類特異性吸附，而且MIP對結(jié)構(gòu)差異較大的橙皮苷和柚皮苷的吸附能力比橙皮素，以及結(jié)構(gòu)與橙皮素相似的柚皮素小，表明MIP具有一定的吸附差異性。

圖5 枳實提取液(a)與MISPE凈化后枳實洗脫液(b)的色譜圖Fig.5 Chromatograms of crude extraction of citrus aurantium (a) and eluting solutions from MIPSPE column(b) 1：hesperidin；2：naringenin；3：hesperetin

2.6.2 實際樣品的分析 在最優(yōu)固相萃取條件下分離、富集枳實中4種黃烷酮，圖5a為枳實提取液的色譜圖(枳實中柚皮苷的含量很少，在HPLC色譜圖中未觀察到，故圖5中未標出)，圖5b為經(jīng)MISPE柱凈化后得到洗脫液的色譜峰。發(fā)現(xiàn)經(jīng)MISPE柱凈化后枳實提取液中的雜峰被有效去除，達到了分離目的。實驗結(jié)果表明，MIP對枳實中4種黃烷酮的提取率(61.1%～95.4%)明顯優(yōu)于NIP(40.0%～68.8%)，且4種黃烷酮的提取率大小順序為柚皮素>橙皮素>柚皮苷>橙皮苷，枳實中4種黃烷酮的提取量分別為0.075 mg/g(柚皮苷)，7.55 mg/g(橙皮苷)，0.49 mg/g(柚皮素)，0.29 mg/g(橙皮素)，說明MIP對4種黃烷酮具有較好的識別能力和類特異性吸附性能，可以很好地應(yīng)用于枳實中4種黃烷酮的分離與富集。

3 結(jié) 論

本文以橙皮素為模板分子，2-乙烯基吡啶為功能單體，二甲基丙烯酸乙二醇為交聯(lián)劑，乙腈為致孔劑，在模板分子∶功能單體∶交聯(lián)劑的比例為1∶6∶20條件下采用沉淀聚合法合成了橙皮素分子印跡聚合物，聚合物對4種黃烷酮具有較好的識別能力和類特異性吸附性能。篩選和優(yōu)化了分子印跡聚合物的合成條件，建立了基于MISPE技術(shù)快速分離和富集枳實中4種黃烷酮的高效液相色譜方法，從而為研究天然植物的分離富集以及中藥制品中黃烷酮的質(zhì)量控制提供了技術(shù)支撐。

[1] Zhang X X，Li Z Y，Ma Y L,Ma S C.Chin.J.Chin.Meter.Med.(張霄瀟,李正勇,馬玉玲,馬雙成.中國中藥雜志)，2015，40(2)：185-190.

[2] Ma X Q，Li C，Yuan L H，Wang S J，Liu X Q.J.Chin.Pharm.Univ.(馬雪琴，李辰，袁林華，王世俊，柳曉泉.中國藥科大學學報)，2013，44(2):161-166.

[5] Zheng G D，Zhou F,Jiang L，Yang D P，Yang X，Lin Y W.Chin.Tradit.HerbalDrugs(鄭國棟，周芳，蔣林，楊得坡，楊雪，林樂維.中草藥)，2010，41(1)：52-55.

[6] Jiang Z G.J.SouthChin.Univ.TropicalAgric.(蔣志國.華南熱帶農(nóng)業(yè)大學學報)，2006，12(3)：32-35.

[7] González-Barrio R，Trindade L M，Manzanares P，DEGraaff L H，Tomás-Barberán F A，Espín J C.J.Agric.FoodChem.，2004，52(20)：6136-6142.

[8] Wulff G，Sarhan A.Angew.Chem.Int.Ed.，1972，11(4)：341.

[9] Liu H J.SynthesisandRecognitionPropertyStudyofSulfa-drugsMloecularlyImprintedPolymer.Changsha：Hunan University(劉慧君.磺胺類藥分子印跡聚合物的合成及其識別性能的研究.長沙：湖南大學),2005.

[10] Pardeshi S，Singh S K.RSCAdv.，2016，6：23525-23536.

[11] Wang X H，Xie L F，Dong Q ，Liu H L，Huang Y P，Liu Z S.J.Chromatogr.B，2015，1007：127-131.

[12] Wang P L，Sun X H,Su X O，Wang T.Analyst，2016，141:3540-3553.

[13] Li Y H.PreparationSeparationandAdsorptionPropertiesofMolecularlyImprintedPolymers.Xinxiang：Henan Normal University(李亞輝.分子印跡聚合物的制備及其吸附性能研究.新鄉(xiāng)：河南師范大學)，2012.

[14] Shao H K,Zhao L G,Chen J，Zhou H T,Huang S T，Li K.J.Pharm.Biomed.Anal.，2015，111：241-247.

[15] Deng X S，Su L Q.Chem.Ind.Times(鄧茜珊，蘇立強.化工時刊)，2009，23(4)：28-30.

[16] Wang N，Xiao S J，Su C W.ColloidPolym.Sci.，2016，294：1305-1314.

[17] Huang A H，Cao C，Zeng Y E，Chen H F.J.Pharm.Anal.(黃愛華，曹騁，曾元兒,陳海豐.藥物分析雜志)，2009,(9)：1448-1450.

[18] Song X L，Li J H，Wang J T，Chen L X.Talanta，2009，80(2)：694-702.

[19] Li C，Shi B，Zhang M K，Jiu Z W，Cheng Y Q.Sci.Technol.FoodInd.(李超,石波,張夢柯,韭澤悟,程永強.食品工業(yè)科技)，2012，33(19)：53-57.

[20] Zeng S M，Jiao B N，Liu G Y，Wang S S，Zhao F N，Zhang C，Wang J，Jin J M，Jin F，Shao H，Zheng L F，Ma X B，Wu J C M，Su X S，She Y X.J.Instrum.Anal.(曾紹梅，焦必寧，劉廣洋，王珊珊，趙風年,張超，王靜，金茂俊，金芬，邵華，鄭鷺飛，馬興斌，吳金措姆，蘇學素，佘永新.分析測試學報)，2016，35(4)：373-379.

[21] Zeng S M，She Y X，Jiao B N，Liu G Y，Wang J，Su X S，Ma X B，Jin M J，Jin F，Wang S S.RSCAdv.，2015，5(115)：94997-95006.

Molecularly Imprinted Solid-phase Extraction Combined with High Performance Liquid Chromatography for Separation and Enrichment of Four Flavanones in Citrus Aurantium

HE Mei-yan1,2，YE Yu-feng2，LIU Yan2，LI Zhen-zhu1，JIAO Bi-ning2，ZENG Shao-mei1，SU Xue-su1*

(1.School of Chemistry and Chemical Engineering，Southwest University，Chongqing 400715，China；2.Citrus Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Chongqing 400712，China)

A molecularly imprinted polymer to recognize four flavanones(hesperetin，hesperidin，naringenin，naringin) was prepared via precipitation polymerization using hesperetin as template molecule，2-vinylpyridine(2-VP) as functional monomer，and ethylene glycol dimethacrylate(EGDMA) as cross-linking agent.The optimal functional monomer and ratio were selected by UV spectrum method，and the optimized synthesis conditions were obtained.The molecularly imprinted polymer(MIP) and non-molecularly imprinted polymer(NIP) were characterized by scanning electron microscopy(SEM)，F(xiàn)ourier transform infrared spectroscopy(FTIR) and static adsorption experiments.The MIP and NIP were used as selective sorbents for the comparative determination of naringin，hesperidin，naringenin，hesperetin.The results showed that the MIP had higher selective adsorption capacity to four flavanones than the NIP，and the relative selectivity coefficients(Ie) were 1.40，1.39，1.59 and 2.89，respectively.A molecularly imprinted solid phase extraction(MISPE)column filled with the polymer material was prepared to enrich and separate four flavanones in Citrus aurantium.In the optimum conditions，four flavanones of the Citrus aurantium was extracted by solid phase extraction.The results showed that the extraction efficiencies for four flavanones were 72.6%(naringin)，61.1%(hesperidin)，95.4%(naringenin) and 93.5%(hesperetin)，respectively.The MISPE with neglectable matrix interference exhitited a good separation effect and greatly improved the extraction efficiencies for four flavanones in Citrus aurantium.

molecularly imprinted polymer(MIP)；high performance liquid chromatography(HPLC)；flavanones；hesperetin；citrus aurantium

10.3969/j.issn.1004-4957.2017.03.005

2016-09-19；

2016-10-19

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(柑橘)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(CARS-27)；柑橘及熱帶果品未知危害因子識別與已知危害因子安全性評估(GJFP2016004)

O657.72;TQ460.72

A

1004-4957(2017)03-0325-06

*通訊作者：蘇學素，副教授，研究方向：生物有機藥物合成，Tel:023-68349603，E-mail:suxuesu@163.com