李偉++段仕學(xué)++李云偉++湯思雨++劉根果

摘 要：該文介紹了一柱齒唇蘭的組培育苗技術(shù)，包括外植體選擇和消毒、增殖和生根、煉苗移栽等幾個方面。建立的組培快繁體系對于一柱齒唇蘭的種群恢復(fù)、種苗生產(chǎn)具有重要的應(yīng)用價值。

關(guān)鍵詞：一柱齒唇蘭；組培；育苗

中圖分類號 Q949 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2017）06-0045-01

一柱齒唇蘭（Anoectochilus tortus）為蘭科（Orchidaceae）開唇蘭屬（Anoectochilus）草本植物，主要分布于中國廣西（融水、凌云）、云南南部至西南部、西藏（墨脫），生于海拔480～1 250m的山坡或溝谷密林下地上或巖石上覆土中，在不丹、泰國也有分布[1]。該屬植物約有40余種，分布于亞洲熱帶地區(qū)至大洋州。我國有20種，2個變種，產(chǎn)于中國西南部至南部，為國家重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄（第二批）。一柱齒唇蘭在野外分布資源較少，除含有一定的藥效成分外，還具有較高的觀賞價值。由于蘭科植物的種子細(xì)小，呈粉末狀，無胚乳，自然條件下萌發(fā)困難[2]。建立一柱齒唇蘭的組培快繁技術(shù)可以為其種群恢復(fù)和種苗繁育提供重要的技術(shù)支持。為此，筆者開展了一柱齒唇蘭的植物組織培養(yǎng)育苗技術(shù)研究，現(xiàn)將該技術(shù)總結(jié)如下：

1 組培快繁體系的建立

1.1 外植體的選擇 一柱齒唇蘭的組培可以采用其蒴果，也可以采用其莖段，一般在有蒴果的情況下，以成熟的蒴果作為外植體，效果最好。因為蒴果消毒較容易，且啟動快，通過種子實(shí)生萌發(fā)后，其實(shí)生苗后代能夠保持較高的遺傳多樣性，有利于種質(zhì)資源的保存和可持續(xù)利用。

1.2 外植體的消毒 以一柱齒唇蘭成熟的蒴果為例，選取已經(jīng)成熟且尚未開裂的果實(shí)。未開裂蒴果，內(nèi)部的粉末狀種子有外種皮的保護(hù)，較好消毒，易獲得無菌材料，也可以省去在流水下沖洗的環(huán)節(jié)。消毒時可以直接采用75%酒精浸泡1～2min，然后再用10%次氯酸鈉浸泡20～30min，消毒結(jié)束后用無菌水沖洗3～5次，再用無菌紙吸干蒴果上的水分，備用。

1.3 種子的無菌萌發(fā) 將消毒好的蒴果，首先用刀片將塑果劃開一個小口，再用鑷子夾住蒴果，并輕輕抖動，將種子均勻地抖落在相應(yīng)的萌發(fā)培養(yǎng)基上。在萌發(fā)試驗中發(fā)現(xiàn)，1/2MS培養(yǎng)基的萌發(fā)效果要優(yōu)于MS培養(yǎng)基。此外，在1/2MS培養(yǎng)基中添加0.3mg/L的6-BA和0.1mg/L NAA的激素后，其種子萌發(fā)速度會受到抑制，萌發(fā)速度較空白的1/2MS培養(yǎng)基晚15d左右。而在MS上添加相同的激素后，則萌發(fā)所需要的時間更長，而且部分種子會愈傷化。因此，一柱齒唇蘭的種子無菌萌發(fā)較適培養(yǎng)基以不添加任何激素的空白1/2MS為佳。接種45d后，種子出現(xiàn)萌動，并開始明顯膨大，50d時，種子呈淡黃色，近球形。繼續(xù)培養(yǎng)2個月后，萌發(fā)的無菌苗可長到3cm左右的高度，便可進(jìn)行下一步的增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)室的培養(yǎng)條件為，光照強(qiáng)度1 500～2 000lx，光照時間為12h/d，溫度為23±2℃，培養(yǎng)基的pH值為5.8，瓊脂粉5.5g/L；除增殖培養(yǎng)基中添加30g/L蔗糖外，其他培養(yǎng)階段均添加蔗糖15g/L。以下培養(yǎng)條件均按此處說明進(jìn)行。

1.4 無菌苗的增殖 將無菌苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基的配方為MS+3.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA，2個月后的平均增殖倍數(shù)為3.6倍。之后再切取增殖苗的莖段進(jìn)行反復(fù)轉(zhuǎn)接，進(jìn)行增殖，即可實(shí)現(xiàn)大量增殖的目的。

1.5 增殖苗的生根培養(yǎng) 將一柱齒唇蘭增殖苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，其生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+0.5mg/LNAA+0.2mg/LIBA進(jìn)行生根培養(yǎng)。3個月后組培苗生根率達(dá)100%，平均根數(shù)3條以上，平均苗高4.1cm。

1.6 生根苗的移栽和管理 將生根的一柱齒唇蘭組培苗從培養(yǎng)瓶內(nèi)取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，并在室內(nèi)陰干水分，之后將生根苗移栽到配制好的基質(zhì)中。移栽基質(zhì)可以采用紅心土∶腐殖土中=1∶3的比例進(jìn)行混合，移栽前需要用多菌靈對基質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后的一柱齒唇蘭組培苗注意保溫保濕，因此需要搭塑料拱棚進(jìn)行保溫保濕?？諝鉂穸瓤刂圃?0%左右，溫度25℃左右，移栽2個月后的成活率達(dá)90%以上。

2 注意事項

一柱齒唇蘭組培快繁，在最無菌體系的建立時，特別要注意污染，干凈的母瓶是保證后期快繁增殖的前提。增殖過程中，要做到及時轉(zhuǎn)接，而且在增殖的初期，可以適當(dāng)調(diào)高分裂素的濃度，待增殖倍數(shù)達(dá)到要求后，再適當(dāng)降低分裂素濃度，便于后期增殖。在生根階段，則需要降低培養(yǎng)基中的糖分，利于組培苗的生根。在移栽時，可以將生根苗在室內(nèi)非培養(yǎng)室條件下過渡一段時間，以增加組培苗的木質(zhì)化程度，提高抵抗力。而在煉苗時，則需要細(xì)心照顧，待其適應(yīng)外界境后，便可進(jìn)入正常管理模式。

參考文獻(xiàn)

[1]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志（17卷）[M].北京：科學(xué)出版社，1999.

[2]郭順星，徐錦堂.真菌在蘭科植物種子萌發(fā)生長中的作用及相互關(guān)系[J].植物學(xué)報，1990，7（1）：13-17.

（責(zé)編：張宏民）