李晶，魏健

（1.吉林體育學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130033；2.長(zhǎng)春師范大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130032）

姬松茸多糖增強(qiáng)免疫功能及抗疲勞作用的研究

李晶1，魏健2，*

（1.吉林體育學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130033；2.長(zhǎng)春師范大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130032）

探討姬松茸多糖對(duì)小鼠免疫功能和抗疲勞作用的影響。成年小鼠40只隨機(jī)分為對(duì)照組、姬松茸多糖低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。分別以生理鹽水、100、150、200mg/kg濃度姬松茸多糖灌胃給藥，持續(xù)10 d，對(duì)小鼠進(jìn)行抗疲勞試驗(yàn)和相關(guān)免疫指標(biāo)的測(cè)定。姬松茸多糖顯著提高小鼠脾臟和胸腺指數(shù)（中劑量時(shí)P＜0.05；高劑量時(shí)P＜0.01）；姬松茸多糖顯著提高小鼠脾臟和胸腺指數(shù)，增加小鼠血清中IL-6和TNF-α的含量，提高CD4+、CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)；并能延長(zhǎng)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間和負(fù)重游泳時(shí)間，提高小鼠血清中SOD活性，降低MDA含量。姬松茸多糖增強(qiáng)能夠小鼠免疫功能和抗疲勞作用。

姬松茸多糖；免疫；抗疲勞

姬松茸（AgaricusblazeiMurrill）又稱(chēng)巴西蘑菇。原產(chǎn)于巴西和美國(guó)加利福尼亞州南部，肉質(zhì)鮮美可口，富含多糖、核酸、甾醇類(lèi)等生物活性成分，是一種藥食兼用的名貴真菌[1]。研究證實(shí)姬松茸所富含的多糖具有抗腫瘤、抗病毒、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種生物活性功能，也有研究報(bào)道姬松茸多糖具有抗疲勞的重要生物活性作用[2-6]。本文系統(tǒng)對(duì)姬松茸多糖的抗疲勞作用和免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步姬松茸多糖產(chǎn)品研究與開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)參考。

1材料與方法

1.1材料和試劑

姬松茸：購(gòu)于杭州眾菇善年生物技術(shù)有限公司，按照文獻(xiàn)[7]報(bào)道工藝提取和純化多糖；胎牛血清：浙江天杭生物科技有限公司；噻唑藍(lán)：美國(guó)Sigma公司；小鼠T淋巴細(xì)胞亞群抗體：美國(guó)BDBioscience公司；超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（MDA）試劑盒：購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.2動(dòng)物分組與喂養(yǎng)方法

6周齡健康雄性昆明種小鼠，體重（20±2）g，由吉林大學(xué)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由飲食、飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，標(biāo)準(zhǔn)室溫。實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成4組，每組10只：姬松茸多糖低、中、高劑量組分別為100、150、200mg/（kg·d）；正常對(duì)照組（灌胃等量生理鹽水）。

1.3 TNF-α、IL-6的測(cè)定

灌胃10 d，在末次給藥前12 h動(dòng)物禁食，小鼠摘眼球取血收集血液，血液靜置后3 500 r/min離心，取血清置于4℃保存，酶聯(lián)免疫法測(cè)定TNF-α、IL-6。

1.4胸腺和脾臟指數(shù)測(cè)定

取血后頸椎脫位法處死小鼠。無(wú)菌條件下分離小鼠胸腺和脾臟并稱(chēng)重。使用下面的公式計(jì)算胸腺和脾臟指數(shù)：胸腺（脾臟）指數(shù)=[胸腺（脾臟）重量（mg）/體重（g）]

1.5 CD4+和CD8+T細(xì)胞亞型測(cè)定

流式細(xì)胞儀分析脾臟中CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞亞群百分比。調(diào)整脾細(xì)胞濃度至1×107個(gè)/mL，用PBS緩沖液洗滌，用小鼠T淋巴細(xì)胞亞群抗體（anti-mouse CD3+、anti-mouse CD4+、anti-mouse CD8+）4℃避光染色60 min。用PBS洗兩次后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

1.6小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

小鼠喂養(yǎng)方法同2.2，小鼠連續(xù)灌胃10 d，末次給藥1 h后在小鼠尾部負(fù)重其體重5%的鉛絲，讓其在水溫（28±1）℃恒溫水槽中進(jìn)行游泳，記錄小鼠自游泳開(kāi)始至力竭死亡的時(shí)間。

1.7耐缺氧試驗(yàn)

分組及給糖同負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，于末次給藥1 h后分別放于裝有堿石灰30 g的500mL廣口瓶?jī)?nèi)，凡士林封口，直至小鼠窒息而死，記錄堅(jiān)持時(shí)間。

1.8小鼠血清SOD、MDA含量的測(cè)定

小鼠連續(xù)灌胃10 d，末次給藥30min后，讓小鼠自由游泳5min取出，斷頭取血。血樣于冰箱中靜置后，3 500 r/min離心10min，取上清液，分別按照SOD測(cè)定試劑盒、MDA測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定血清中SOD和MDA含量[2]。

1.9統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Tukey-Kramer post-hoc檢驗(yàn)單因素方差分析進(jìn)行多重比較。組間顯著差異采用t檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。采用SPSS 14 forWindows（SPSS Inc.，USA）統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果與分析

2.1姬松茸多糖調(diào)節(jié)免疫的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

姬松茸多糖對(duì)小鼠免疫器官的影響見(jiàn)表1。

由表1可以看出，隨著姬松茸多糖濃度的增加，姬松茸多糖對(duì)成年鼠脾臟及胸腺促增長(zhǎng)作用也逐漸增加，各劑量組與對(duì)照組相比胸腺和脾臟指數(shù)均有一定程度升高。中劑量組和高劑量組與對(duì)照組相比顯著影響小鼠脾臟指數(shù)（P＜0.05）；高劑量組與對(duì)照組相比顯著影響小鼠胸腺指數(shù)（P＜0.05）。

表1 姬松茸多糖對(duì)小鼠免疫器官的影響Table1 Effectof Agaricusblazei polysaccharideson imm une organs inm ice

姬松茸多糖對(duì)小鼠血清中IL-6、TNF-α含量的影響見(jiàn)表2。

表2 姬松茸多糖對(duì)小鼠血清中IL-6、TNF-α含量的影響Table2 Effectof Agaricusblazei polysaccharideson IL-6 and TNF-αin serum inm ice

表2結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，姬松茸多糖中劑量組和高劑量組可顯著增加正常小鼠血清中IL-6的含量（P＜0.01）；顯著增加正常小鼠血清中TNF-α的含量（P＜0.05）；姬松茸多糖低劑量組對(duì)正常小鼠血清中IL-6、TNF-α的含量無(wú)明顯影響。

姬松茸多糖對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+含量的影響見(jiàn)表3。

表3 姬松茸多糖對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+含量的影響Table3 Effectof Agaricusblazei polysaccharideson CD4+，CD8+content inm ice

從表3可以看出，姬松茸多糖各劑量組與對(duì)照組相比小鼠外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)均有一定程度升高。中劑量組和高劑量組顯著提高了CD4+、CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)，中劑量組與對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05）；高劑量組均與對(duì)照組比較具有極顯著性差異（P＜0.01）。

2.2姬松茸多糖抗疲勞實(shí)驗(yàn)結(jié)果

姬松茸多糖對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間和耐缺氧時(shí)間的影響見(jiàn)表4。

表4 姬松茸多糖對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間和耐缺氧時(shí)間的影響Table4 Effectof Agaricusblazei polysaccharidesswimm ing time and hypoxia tolerance time inm ice

表4結(jié)果表明：姬松茸多糖能增加小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，低劑量組與對(duì)照組有顯著性差異（P＜0.05），中劑量組和高劑量組均與對(duì)照組有極顯著性差異（P＜0.01）；姬松茸多糖能延長(zhǎng)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間，低、中劑量組與對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05）；高劑量組均與對(duì)照組比較具有極顯著性差異（P＜0.01）。

姬松茸多糖對(duì)小鼠血清SOD、MDA的影響見(jiàn)表5。

表5 姬松茸多糖對(duì)小鼠血清SOD、MDA的影響Table5 Effectof Agaricusblazei polysaccharideson SOD，MDA in serum inm ice

從表5結(jié)果表明：小鼠血清中SOD活性低劑量組、中劑量組和高劑量組均高于對(duì)照組，其中中劑量組與對(duì)照組間有顯著性差異（P＜0.05），高劑量組與對(duì)照組間有顯著性差異（P＜0.01）；小鼠血清中MDA含量低劑量組、中劑量組和高劑量組均低于對(duì)照組，其中中、高劑高組與對(duì)照組間有顯著性差異（P＜0.05）。

3討論

脾臟和胸腺是機(jī)體的重要的中樞免疫器官和外周免疫器官，是機(jī)體清除病原和防止病原入侵的重要防御系統(tǒng)[4-5]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明姬松茸多糖對(duì)成年鼠脾臟及胸腺增長(zhǎng)起到顯著促進(jìn)作用，各劑量組與對(duì)照組相比胸腺和脾臟指數(shù)均有一定程度升高。細(xì)胞因子是一類(lèi)由活化的免疫細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞產(chǎn)生的高活性、具有多種生理功能的蛋白質(zhì)多肽分子或糖蛋白，是免疫系統(tǒng)的重要組成部分。本實(shí)驗(yàn)研究中TNF-α和IL-6含量與對(duì)照組比較均顯著提高，低劑量組則差異不顯著，說(shuō)明高、中劑量的姬松茸多糖能增加TNF-α和IL-6分泌量來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，是機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分，淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用主要是通過(guò)其亞群細(xì)胞實(shí)現(xiàn)的。CD4+和CD8+是適應(yīng)性免疫中兩種非常重要的T淋巴細(xì)胞[8-10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明姬松茸多糖中、高劑量可顯著性增加正常小鼠外周血中的CD4+和CD8+細(xì)胞數(shù)，顯示姬松茸多糖可正向調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。以上結(jié)果表明，姬松茸多糖能顯著提高小鼠的體液免疫、細(xì)胞免疫和非特異性免疫功能。

SOD、MDA是評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)疲勞重要指標(biāo)。SOD是體內(nèi)最主要的自由基清除劑，此實(shí)驗(yàn)中姬松茸多糖組小鼠血清中SOD含量顯著增加，具有顯著抗疲勞活性。MDA為生物體內(nèi)自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)終產(chǎn)物，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度可以清除體內(nèi)的自由基，從而降低疲勞的程度[11]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示姬松茸多糖組中MDA含量均低于對(duì)照組，表明姬松茸多糖有助于降低自由基氧化過(guò)程，抵抗機(jī)體的疲勞。同時(shí)，姬松茸多糖能延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間和耐缺氧時(shí)間，由此表明，姬松茸多糖具有抗疲勞功效。

綜上所述，姬松茸多糖不僅具有免疫調(diào)節(jié)能力，同時(shí)具有提高抗疲勞作用。姬松茸多糖可以作為新型抗疲勞制劑和免疫佐劑應(yīng)用到實(shí)踐中，但其深層次抗疲勞、免疫機(jī)制綜合作用有待進(jìn)一步探討。

[1]岳麗玲,張巍,劉丹,等.姬松茸藥用價(jià)值研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房, 2011,22(44):4116-4117

[2]Shimizu T,Hoshino H,Nishi S,et al.Anti-fatigue effect of dicethiaminehydrochloride is likely associated with excellentabsorbability and high transformability in tissues as a vitamin B1[J].European JournalofPharmacology,2010,635:117-123

[3]Jia R,Cao L,Xu P,et al.In vitro and in vivo hepatoprotective and antioxidant effects of Astragaluspolysaccharides against carbon tetrachloride-induced hepatocytedamage in common carp Cyprinus carpio[J].Fish Physiologyand Biochemistry,2012,38(3):871-881

[4]王艷,聶志勇,賀瑛,等.超聲波協(xié)同復(fù)合酶法提取姬松茸多糖[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2009,21(5):866-870

[5]崔立然,王桂梅,孫立冬,等.低分子量姬松茸多糖的免疫活性研究[J].中醫(yī)藥信息,2013,30(2):10-13

[6]周嵐,黃云超,任宏軒,等.姬松茸多糖聯(lián)合硒對(duì)肺癌惡病質(zhì)小鼠營(yíng)養(yǎng)和免疫的影響[J].衛(wèi)生研究,2013,42(6):1018-1020

[7]王麗娟,張彥青,王勇,等.姬松茸多糖增強(qiáng)免疫作用及急性毒性研究[J].食品科學(xué),2014,35(13):258-261

[8]Hou H,Fan Y,Li B,et al.Purification and identification of immunomodulating peptides from enzymatic hydrolysates of Alaska pollock frame[J].Food chemistry,2012,134(2):821-828

[9]Van der Does AM,Hensbergen PJ,Bogaards SJ,et al.The human lactoferrin-derived peptide hLF1-11 exerts immunomodulatory effects by specific inhibition ofmyeloperoxidase activity[J].TheJournalof Immunology,2012,188(10):5012-5019

[10]Zhu XL,Chen AF,Lin ZB.Ganoderma lucidum polysaccharidesenhance the function of immunological effector cells in immunosuppressed mice[J].Journal of ethnopharmacology,2007,111(2):219-226

[11]彭梅,張振東,楊娟.土黨參多糖對(duì)小鼠的抗疲勞作用[J].食品科學(xué),2011,32(19):224-226

Study on the Anti-fatigue and Im proving Imm une Function Effects of Agaricus blazei Polysaccharide

LIJing1，WEIJian2，*
（1.Jilin SportsUniversity，Changchun 130033，Jilin，China；2.Changchun NormalUniversity，Changchun 130032，Jilin，China）

To discuss the effect of the mice immune function and fatigue resistance about Agaricus blazei polysaccharide.We divided adultmice into 4 groups random ly.Therewere the controlgroup，low-dose group，middle-dose group and high-dose group.Each group of them had tenmice.Theywere injected gavage administration byweightmolal，such as100，150，200mg/kg.It continued 10 d，and thenmeasured the anti-fatigue experimentand related immune index of thesemice.According to thisexperiment，Agaricusblazei polysaccharide promoted the indexofspleen and thymus remarkably，increased the contentof IL-6 and TNF-αin themice serum，increased the cell countof CD4+and CD8+，extended the time of normal pressure hypoxia and weight loadingswimming，promoted theactivity of the SOD in themiceserum，and reduced the contend ofMDA.

Agaricusblazei polysaccharide；immunity；antifatigue

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.05.043

2016-09-20

李晶（1982—），女（滿），講師，在讀博士，研究方向：食品營(yíng)養(yǎng)與健康。

*通信作者：魏?。?980—），副教授，博士，研究方向：生命科學(xué)。