史曉宇 張 敬 孟 瑋 趙峻峰

轉(zhuǎn)錄因子Sp1和存活素在乳腺癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究

史曉宇 張 敬 孟 瑋 趙峻峰

目的 探討轉(zhuǎn)錄因子Sp1和存活素(Survivin)在乳腺癌中的表達(dá)及意義并分析兩者相關(guān)性。方法 納入我院2013年6月—2015年6月確診為乳腺癌的患者70例，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)Sp1和Survivin在70例乳腺癌及20例癌旁正常組織中的表達(dá)，并檢測(cè)兩者的表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 Sp1和Survivin在乳腺癌中表達(dá)的陽性率分別為71.43%和78.57%，正常乳腺組織中表達(dá)陽性率分別為30%和10%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩者的表達(dá)與乳腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、脈管浸潤(rùn)有關(guān)(P<0.05)；而與患者的年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)無相關(guān)性(P>0.05)；在乳腺癌組織中Sp1和Survivin的表達(dá)之間呈正相關(guān)(r=0.517，P<0.01)。結(jié)論 轉(zhuǎn)錄因子Sp1和Survivin與乳腺癌的發(fā)病密切相關(guān)，可能作為臨床判斷乳腺癌的輔助性指標(biāo)，二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)預(yù)后的判斷具有一定的指導(dǎo)價(jià)值。

轉(zhuǎn)錄因子Sp1；存活素；乳腺癌；預(yù)后

近年來，我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率不斷上升，而且有年輕化的趨勢(shì)，腫瘤呈現(xiàn)局部侵襲性，且極易發(fā)生轉(zhuǎn)移。盡管近二十年來隨著新輔助化療和綜合治療的臨床應(yīng)用，乳腺癌的療效已經(jīng)顯著提高，但仍有部分患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，因此研究乳腺癌的轉(zhuǎn)移以及侵襲的分子機(jī)制對(duì)于改善乳腺癌的預(yù)后具有重要的臨床意義[1-2]。近年來轉(zhuǎn)錄因子Sp1和存活素(Survivin)不斷被人們所認(rèn)識(shí)，發(fā)現(xiàn)兩基因表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系，特別是對(duì)于腫瘤的轉(zhuǎn)移有著重要的影響，但是目前關(guān)于轉(zhuǎn)錄因子Sp1和Survivin對(duì)乳腺癌影響的報(bào)道尚少。本研究采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)Sp1和Survivin在人類乳腺癌的不同分型中的表達(dá)差異，結(jié)合腫瘤分型對(duì)表達(dá)差異情況進(jìn)行研究，并搜集所納入研究的患者術(shù)后發(fā)生轉(zhuǎn)移及非轉(zhuǎn)移情況，評(píng)價(jià)其對(duì)乳腺癌臨床價(jià)值，為進(jìn)一步闡明轉(zhuǎn)錄因子Sp1和Survivin在乳腺癌的疾病發(fā)病及治療中的作用及今后的基因靶向治療研究提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年6月—2015年6月我院確診的乳腺癌患者70例，年齡26～78歲，中位年齡50歲，所有患者均為女性，均接受乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)，均未接受過術(shù)前放射治療和化療，術(shù)后病理診斷均為浸潤(rùn)性乳腺癌。臨床分期及病理類型參照國(guó)際WHO的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析判斷。同時(shí)選擇上述20例患者距離腫瘤組織>5 cm的癌旁正常乳腺組織標(biāo)本作對(duì)照。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

Sp1鼠抗人單克隆抗體購自美國(guó)Santa Cruz公司；Survivin兔抗人多克隆抗體和免疫組織化學(xué)SP試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 檢測(cè)方法

采用免疫組化SP法檢測(cè)乳腺癌組織和癌旁正常乳腺組織中Sp1和Survivin的表達(dá)情況，具體步驟：將乳腺癌組織及癌旁正常乳腺組織標(biāo)本蠟塊切成4 μm厚的石蠟切片，脫蠟，水化，3%過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化酶活性，枸櫞酸鹽緩沖液中微波抗原修復(fù)。一抗置4℃冰箱過夜，按試劑盒說明進(jìn)行染色，DAB染色后蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片。

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定

陽性結(jié)果判定：Sp1染色顆粒位于細(xì)胞核內(nèi)，Survivin染色顆粒位于胞漿之中，染成棕黃色或棕褐色為陽性，通過顯微鏡10×20倍視野，每張切片對(duì)應(yīng)隨機(jī)納入10個(gè)視野進(jìn)行陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)，陽性細(xì)胞大于50%為強(qiáng)陽性(+++)，25%～50%為陽性(++)，0～25%為弱陽性(+)，未著色為陰性(-)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)做統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢驗(yàn)分析乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中Sp1和Survivin的表達(dá)及與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系，乳腺癌中Sp1和Survivin表達(dá)的相關(guān)性應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 70例乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中Sp1和Survivin的表達(dá)情況

乳腺癌組織中Sp1表達(dá)的陽性率為71.43%(50/70)，陽性顆粒定位于細(xì)胞核，高于在癌旁正常乳腺組織中的表達(dá)(30%)(6/20)，Survivin在乳腺癌組織中表達(dá)的陽性率為78.57%(55/70)，陽性顆粒定位于細(xì)胞質(zhì)中，高于在癌旁正常乳腺組織中的表達(dá)(10%)(2/20)。乳腺癌組織Sp1和Survivin的陽性率明顯高于癌旁組織陽性率，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表1)。

表1 70例乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中Sp1和Survivin的表達(dá)[n(%)]

2.2 乳腺癌中Sp1和Survivin的表達(dá)水平與乳腺癌患者臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性

乳腺癌組織中Sp1和Survivin的表達(dá)水平與患者的TNM分期、脈管浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且在Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌中的表達(dá)均高于Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌中的表達(dá)(P<0.05)，在有脈管浸潤(rùn)的乳腺癌中的表達(dá)均高于無脈管浸潤(rùn)乳腺癌中的表達(dá)(P<0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性乳腺癌中的表達(dá)均高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性乳腺癌中的表達(dá)(P<0.05)，Sp1和Survivin的表達(dá)水平與患者的年齡、腫瘤直徑和組織學(xué)分級(jí)無關(guān)(P>0.05)(表2)。

表2 70例乳腺癌中Sp1和Survivin的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系[n(%)]

2.3 Sp1和Survivin在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性

本組55例Survivin陽性表達(dá)的患者中，Sp1也同時(shí)陽性表達(dá)者占46例；20例Sp1陰性表達(dá)的患者中，Survivin也同時(shí)陰性表達(dá)者占11例，Sp1和Survivin的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.517，P<0.01)(表3)。

表3 70例乳腺癌中Sp1和Survivin表達(dá)的相關(guān)性

Note：The Spl expression positively correlated with Survivin expression in breast cancer tissues(P<0.01).

3 討論

乳腺癌是世界上最常見的一種惡性腫瘤，位居所有女性惡性腫瘤之首，且近年來隨著生活方式、飲食及環(huán)境污染包括基因等因素的不斷變化，乳腺癌的發(fā)病率逐年增加，嚴(yán)重危害人們的健康及生存質(zhì)量，給社會(huì)及患者家庭帶來了重大的打擊[3-4]。30%～40%的早期乳腺癌患者，即使接受了輔助治療，仍會(huì)發(fā)展為轉(zhuǎn)移性乳腺癌[5]。因此，進(jìn)一步尋找有關(guān)乳腺癌發(fā)生發(fā)展規(guī)律的生物標(biāo)記物是該病有效治療、提高生存率的關(guān)鍵點(diǎn)，是今后研究的重要方向。

轉(zhuǎn)錄因子Sp1是一種序列特異性的DNA結(jié)合蛋白，其廣泛存在于幾乎所有組織的細(xì)胞核中，調(diào)控富含GC/TC序列啟動(dòng)子的表達(dá)，在細(xì)胞增殖分化、凋亡和腫瘤形成等過程中發(fā)揮重要的作用[6-7]。近年來研究發(fā)現(xiàn)Sp1蛋白在腫瘤組織中的異常表達(dá)和活化可通過促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)因子和血管生成因子的基因轉(zhuǎn)錄機(jī)制，正向調(diào)節(jié)腫瘤的增殖和血管生成，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移[8-9]。研究表明，Sp1蛋白在正常組織中低表達(dá)或無表達(dá)，在多種腫瘤組織中，如肝癌、肺癌、胃癌等高表達(dá)，且表達(dá)水平隨腫瘤的病理學(xué)分級(jí)的升高而升高，且表達(dá)越高的患者預(yù)后越差[10-12]。目前，僅少量報(bào)道關(guān)于乳腺癌中Sp1和Survivin的表達(dá)情況，但缺乏對(duì)Sp1和Survivin與乳腺癌關(guān)系的更深入研究和病例報(bào)道，本研究對(duì)乳腺癌的深入研究具有重要的研究意義。

近年來國(guó)內(nèi)外研究表明，Survivin是一種新近發(fā)現(xiàn)的分子量約16.5 kDa的細(xì)胞內(nèi)蛋白，屬于凋亡抑制蛋白家族，在胚胎和大多數(shù)腫瘤組織中高表達(dá)，但在除胸腺和睪丸以外的成人組織中未被發(fā)現(xiàn)[13]。已有研究證實(shí)Survivin呈異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此闡明在細(xì)胞凋亡和增殖中Survivin異常表達(dá)的分子機(jī)制及其作用，在腫瘤的基因靶向治療方面具有重要意義[14]。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，Survivin近端啟動(dòng)子區(qū)存在潛在的Sp1位點(diǎn)，Sp1通過結(jié)合Survivin GC序列的啟動(dòng)子從而調(diào)控Survivin的基因轉(zhuǎn)錄[15]。Chen等[16]研究認(rèn)為，肺癌細(xì)胞中啟動(dòng)子區(qū)Sp1位點(diǎn)被抑制后Survivin mRNA表達(dá)明顯下降，提示在肺癌細(xì)胞中Sp1在調(diào)控Survivin的基因轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮了重要的作用。

本研究通過深入探討Sp1和Survivin在乳腺癌中表達(dá)的情況以了解其臨床意義，結(jié)果顯示，Sp1和Survivin在乳腺癌組織中均過表達(dá)，顯著高于兩者在癌旁乳腺組織中的表達(dá)，且與乳腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、脈管浸潤(rùn)有關(guān)，而與患者年齡、腫瘤大小和組織學(xué)分級(jí)無相關(guān)性。因此我們可以認(rèn)為Sp1和Survivin是反應(yīng)乳腺癌增殖能力以及遷移能力的重要指標(biāo)，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到了促進(jìn)的作用，它的過表達(dá)可能預(yù)示乳腺癌增殖較快，侵襲性強(qiáng)，預(yù)后欠佳。

此外，在本研究乳腺癌組織中Sp1和Survivin聯(lián)合表達(dá)的比例較高，Survivin表達(dá)陽性的55例患者中有46例Sp1也同時(shí)表達(dá)陽性，Survivin的陽性表達(dá)水平越強(qiáng)，Sp1的陽性表達(dá)水平越強(qiáng)，兩者的表達(dá)形式具有一致性，呈正相關(guān)，提示這兩種蛋白在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用，其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究和探討。

綜上所述，Sp1可能作為判斷乳腺癌預(yù)后不良的指標(biāo)之一，聯(lián)合檢測(cè)Sp1和Survivin對(duì)判斷乳腺癌的預(yù)后具有很好的參考價(jià)值，為乳腺癌今后進(jìn)一步的診治提供理論依據(jù)。

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(收稿：2016-11-24)

Expression of transcription factors Sp1 and Survivin in breast cancer and their correlation

SHIXiaoyu，ZHANGJing，MENGWei，ZHAOJunfeng

Department of Medical Oncology，The First Affiliated Hospital of Hebei North University，Zhangjiakou 075000，China

Objective The objective of this study was to investigate the expression and clinical significance of transcription factors Sp1 and Survivin in breast cancer and to further analyze their correlation.Methods Seventy cases of breast cancer patients were diagnosed as breast cancer from June 2013 to June 2015.The expression of Sp1 and Survivin in 70 cases of breast cancer and 20 cases of adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical staining.The relationship was detected between the protein expression and the clinicopathological parameters of breast cancer.Results The positive rates of Sp1 and Survivin in breast cancer were 71.43% and 78.57%，respectively.The positive rates of Sp1 and Survivin were 30% and 10% in adjacent normal breast tissues.They showed a significant difference(P<0.05).In breast cancer tissues，there were no differences in the lymph node metastasis，TNM stage and vessel infiltration(P>0.05).There were also no differences in the age，tumor size and histological grade of patients with breast cancer(P>0.05).In breast cancer tissues，there was a significant positive correlation between Sp1 and Survivin expression(r=0.517，P<0.01).Conclusion The transcription factors Sp1 and Survivin are closely related to the pathogenesis of breast cancer，which may serve as an adjunctive index for the diagnosis of breast cancer.It has certain guiding value for clinical diagnosis，treatment and prognosis of breast cancer.

Sp1；Survivin；Breast carcinoma；Prognosis

河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院腫瘤內(nèi)科(張家口 075000)

史曉宇，女，(1980-)，碩士，主治醫(yī)師，從事惡性腫瘤基礎(chǔ)與臨床工作的研究。

史曉宇，E-mail：shixiaoyu-120@163.com

R737.9

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.02.003