張正瑩吳 潤(rùn)

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué),甘肅蘭州 730000; 2.景泰縣畜牧獸醫(yī)局,甘肅白銀 730400)

消毒劑對(duì)實(shí)驗(yàn)室空氣中細(xì)菌的殺滅作用研究

張正瑩1，2吳 潤(rùn)1

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué),甘肅蘭州 730000; 2.景泰縣畜牧獸醫(yī)局,甘肅白銀 730400)

為了驗(yàn)證菌毒敵液、強(qiáng)力消毒靈液等六種消毒藥對(duì)實(shí)驗(yàn)室空氣菌的敏感程度，本實(shí)驗(yàn)采用微管-平板法測(cè)定了菌毒敵液、強(qiáng)力消毒靈液等6種消毒藥對(duì)實(shí)驗(yàn)室空氣菌的最小抑菌濃度（MIC）分別是，菌毒敵液對(duì)實(shí)驗(yàn)室菌的MIC是1/500*8g/ml、中農(nóng)衛(wèi)康消毒劑MIC為1/500*16g/ml、金碘王（聚維酮碘溶液）MIC為1/500*2g/ml、強(qiáng)力消毒靈液MIC為1/500*128g/ml、威特格瑞液MIC為1/500*128g/ml。由此表明，消毒藥品對(duì)實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌的抑制作用效果有區(qū)別，本實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)室消毒藥品的選擇有指導(dǎo)意義。

實(shí)驗(yàn)室空氣菌 最小抑菌濃度 抑制作用 消毒藥

生物安全（Biosafety）是一個(gè)廣義定義，雖然在很多國(guó)際、地區(qū)或國(guó)家的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)中涉及，但目前國(guó)際上尚無統(tǒng)一定義。從其涉及的內(nèi)容分析，主要是指生物（特別是微生物）和基因操作對(duì)生命和（或）環(huán)境的影響，可以包括安全（Biosafety）和安保（Biosecurity）兩層含義?？茖W(xué)家在實(shí)驗(yàn)室對(duì)病原微生物的研究始于18世紀(jì)，故而實(shí)驗(yàn)室的消毒滅菌愈來愈重要。隨著各種消毒藥的市場(chǎng)化，實(shí)驗(yàn)室消毒藥的種類也越來越多。二氯異氰尿酸鈉和三氯異氰尿酸同屬氯胺類氯化異氰尿酸類消毒劑，兩者殺菌譜廣，殺菌力強(qiáng)，可殺滅各種微生物，廣泛用于醫(yī)療衛(wèi)生和飲食行業(yè)及水體消毒。有關(guān)此兩種消毒劑復(fù)方制劑的殺菌效果報(bào)道較多，但對(duì)兩者作平行比較研究則少見報(bào)道。經(jīng)試驗(yàn)證明，二氯異氰尿酸鈉和三氯異氰尿酸對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌都有很好的殺滅效果，雖然三氯異氰尿酸對(duì)細(xì)菌繁殖體和真菌殺滅對(duì)數(shù)值比二氯異氰尿酸鈉者稍高，但這種差別基本無統(tǒng)計(jì)學(xué)價(jià)值，與相關(guān)報(bào)道的結(jié)果基本一致。近年來，由于人們?yōu)E用抗生素從而使很多細(xì)菌產(chǎn)生了耐藥性。由于中藥抗菌的特殊機(jī)理，不易產(chǎn)生耐藥性，因此，抗菌中藥引起眾人的關(guān)注，逐步成為研究的熱點(diǎn)。

早在20世紀(jì)50年代我國(guó)醫(yī)藥工作者即開始了中藥抑菌作用與抑菌成分研究，并發(fā)現(xiàn)許多具有抗菌作用的中藥。常規(guī)的藥敏實(shí)驗(yàn)方法：①紙片瓊脂擴(kuò)散法；②試管稀釋法；③平板稀釋法；④打洞法；⑤挖溝法；⑥微量稀釋法等。然而，這些方法也存在著其缺陷或局限性，因此，我們應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況選擇較合適的方法。試管稀釋法[8]是一個(gè)比較好的方法，但具有實(shí)驗(yàn)工作量大，操作煩瑣，一個(gè)系列稀釋度含藥培養(yǎng)基只能測(cè)一種菌，營(yíng)養(yǎng)要求高的菌無法培養(yǎng)等弊端；打洞法同紙片擴(kuò)散法，存在藥物擴(kuò)散問題，又沒有中藥標(biāo)準(zhǔn)紙片，實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以控制；平板稀釋法只需制兩個(gè)系列稀釋度含藥平板，一個(gè)稀釋度可同時(shí)測(cè)多種細(xì)菌，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，是一種比較理想的方法，但是必須注意細(xì)菌之間交叉感染的問題；微量稀釋法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，且簡(jiǎn)便易行，但是結(jié)果不易觀察，加顯色劑以后不適用于需要加血的培養(yǎng)基。

1 材料

1.1 藥品

表1 參試藥品表

1.2 細(xì)菌

實(shí)驗(yàn)室空氣菌。

1.3 試劑

營(yíng)養(yǎng)瓊脂，生產(chǎn)廠家：青島市高科技園海博生物科技有限公司。

革蘭氏染液，生產(chǎn)廠家：青島市高科技園海博生物科技有限公司。

普通肉湯培養(yǎng)基，生產(chǎn)廠家：杭州微生物試劑有限公司。

1.4 儀器

表2 參試儀器設(shè)備

2 方法

2.1 培養(yǎng)基的制備

2.1.1 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的制備

30g營(yíng)養(yǎng)瓊脂加入1000ml超純水，高壓滅菌121℃，15min。放入生物安全柜，當(dāng)營(yíng)養(yǎng)瓊脂溫度降到55℃左右時(shí)澆平板2～3cm厚。待平板內(nèi)瓊脂凝固后，冷藏備用[5]。

2.1.2 普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的制備

30g普通肉湯加入1000mL超純水，高壓滅菌121℃，15min，放入生物安全柜，紫外線消毒降溫到室溫冷藏備用。

2.2 試驗(yàn)藥液的制備

2.2.1 菌毒敵液 在生物安全柜內(nèi)取10ml滅菌超純水加20μl菌毒敵原液將其作1：500倍稀釋到畜禽房舍及器具消毒濃度，冷藏備用。

2.2.2 中農(nóng)衛(wèi)康消毒劑 在生物安全柜內(nèi)取10ml滅菌超純水加20μl菌毒敵原液將其作1：500倍稀釋到畜禽房舍及器具消毒濃度，冷藏備用。

2.2.3 金碘王（聚維酮碘溶液） 在生物安全柜內(nèi)取10ml滅菌超純水加10μl菌毒敵原液將其作1：1000倍稀釋到養(yǎng)殖場(chǎng)常規(guī)消毒濃度，冷藏備用。

2.2.4 威特格瑞液 在生物安全柜內(nèi)取10ml滅菌超純水加0.01g菌毒敵原液將其作1：1000倍稀釋到養(yǎng)殖場(chǎng)常規(guī)消毒濃度，冷藏備用。

2.2.5 強(qiáng)力消毒靈液 在生物安全柜內(nèi)取10ml滅菌超純水加0.01g菌毒敵原液將其作1：1000倍稀釋到飼養(yǎng)場(chǎng)所器具消毒濃度，冷藏備用。

2.2.6 燒堿溶液 在生物安全柜內(nèi)稱取0.3g燒堿，加滅菌超純水10ml將其配成3%消毒濃度，冷藏備用。

2.3 菌種的準(zhǔn)備

取澆好的一個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板打開放置在實(shí)驗(yàn)室，24h后挑取菌落并用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯做增菌培養(yǎng)，放置恒溫培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)18～24h候得原菌液。取試管分別對(duì)原菌液用生理鹽水進(jìn)行二倍比稀釋，用移液器從8號(hào)管中取20μl菌液注入平板上，重復(fù)做3個(gè)平板，并用L棒將其涂勻，培養(yǎng)18～24h查菌落數(shù)，得出原菌液的細(xì)菌濃度。將原菌液或稀釋后的菌液用生理鹽水稀釋到所需濃度106cfu/ml，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 各藥液對(duì)試驗(yàn)菌的最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

在生物安全柜內(nèi)，采用微管-平板法[4]。每種藥物12支EP管，每個(gè)EP管內(nèi)加入500μl的肉湯，向第1支EP管里加入500μl配好的藥液，混勻，從中吸取500μl加入第2支EP試管[5]，依次類推，直至第11支試管，棄去500μl，12號(hào)EP管做陰性對(duì)照。1-12號(hào)EP管內(nèi)加入20μl菌液，37℃培養(yǎng)18～24h后，將其分別接種到平板上[8]，37℃再培養(yǎng)18～24h后，得試驗(yàn)藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)菌的MIC。

3 試驗(yàn)結(jié)果

通過試驗(yàn)，可以得出菌毒敵液、中農(nóng)衛(wèi)康消毒劑、金碘王（聚維酮碘溶液）、威特格瑞液、強(qiáng)力消毒靈液和燒堿溶液的最小抑菌濃度的MIC，記錄于表3。

表3 消毒劑的最小抑菌濃度

4 結(jié)語

燒堿溶液對(duì)試驗(yàn)菌的抑制作用明顯，強(qiáng)力消毒靈液和威特格瑞液對(duì)實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌的抑制作用相當(dāng)，對(duì)試驗(yàn)菌的抑制作用僅次于燒堿，其他消毒藥對(duì)某些實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌的抑制作用不明顯。此結(jié)論為實(shí)驗(yàn)室消毒等工作具有指導(dǎo)意義。

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