夏 偉，牟 迪，唐志芬，馬迪楊，張宇輝，朱慶虎，袁 遠(yuǎn)，熊永忠

（哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，黑龍江 哈爾濱 150069）

豬病防制與保

2016年245個規(guī)模豬場7種病毒類疾病病原流行病學(xué)調(diào)查與2017年防控建議

夏 偉，牟 迪，唐志芬，馬迪楊，張宇輝，朱慶虎，袁 遠(yuǎn)，熊永忠

（哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，黑龍江 哈爾濱 150069）

2016年1—12月份，哈獸維科技術(shù)服務(wù)部檢測實(shí)驗(yàn)室共收到來自全國245個規(guī)模豬場的692份病料（肺臟、脾臟和淋巴結(jié)等組織）樣品和305份（糞便或腸道組織）樣品，采用PCR和RT-PCR方法對7種病毒類疾病病原如豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、傳染性胃腸炎病毒（TGEV）和豬輪狀病毒（PoRV）等進(jìn)行檢測。通過對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析得知，CSFV陽性檢出率（10/692）1.45%，PRRSV陽性檢出率（166/665）24.96%，PCV2陽性檢出率（210/585）35.90%，PRV陽性檢出率（100/593）16.86%，PEDV陽性檢出率（125/305）40.98%，TGEV陽性檢出率（9/295）3.05%，PoRV陽性檢出率（14/289）4.84%。其中 PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5種病原檢出率高，仍是危害規(guī)模豬場的主要病原。CSFV、TGEV檢出率低，說明豬場控制的較好。第一、二季度保育豬慢性消瘦和呼吸道病嚴(yán)重病例PRRSV、PCV2檢出率高，保育豬均勻度差，死淘率高。第一季度和第四季度新生仔豬暴發(fā)腹瀉病例PEDV、PoRV檢出率高，造成哺乳仔豬成活率下降，損失慘重?？傊?，2017年我國規(guī)模豬場要把PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5種常見病毒類疾病病原作為防控重點(diǎn)，但混合感染和新毒株出現(xiàn)是目前疫病防控的難點(diǎn)，建議豬場加強(qiáng)疫病監(jiān)測制度，優(yōu)化防疫方案和避免防疫誤區(qū)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源及分布

由圖1可知，樣品來源于全國29個省市，樣品包括肺臟、脾臟和淋巴結(jié)等組織以及腸道內(nèi)容物和糞便，通過調(diào)查了解豬場免疫背景和臨床發(fā)病情況以及剖檢典型發(fā)病豬取組織樣品，-20℃冷凍送檢。

圖1 樣品分布（圓圈代表樣品來源區(qū)域）

1.2 主要試劑和儀器

PCR和RT-PCR擴(kuò)增試劑盒、飽和酚、TaqDNA聚合酶、dNTPs、EB、DEP水、TRIZOL（總RNA抽提試劑，主要成分苯酚等）、DL 2 000 Marker、TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver 3.0均購自寶生物工程（大連）有限公司。生物安全柜、分析天平、高速離心機(jī)、迷你掌上離心機(jī)、渦旋振蕩器、PCR擴(kuò)增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀、冰箱、微波爐、水浴鍋、高壓蒸汽滅菌鍋等。

1.3 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù) GenBank登陸的 PRRSV、CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV的基因序列，用Oligo 6.0軟件設(shè)計(jì)引物，由寶生物工程（大連）有限公司合成。引物序列見表1。

表1 用于PCR和RT-PCR反應(yīng)的引物

1.4 樣品處理及核酸提取

按檢測需求分別對肺臟、脾臟、淋巴結(jié)樣品混合，對腸內(nèi)容物和糞便混合用研磨器充分研磨，利用MEM營養(yǎng)液進(jìn)行10倍稀釋，然后利用DNA和RNA提取試劑盒進(jìn)行核酸抽提。

1.5 病毒核酸檢測

1.5.1 PRRSV、CSFV、PEDV、TGEV、PoRV的擴(kuò)增分別用BIOZOL總RNA提取試劑盒（博日公司）從病毒培養(yǎng)液提取總RNA為模板，采用TaKaRa One Step RNA PCR Kit（AMV）試劑盒進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件RT：50℃ 30 min，94℃ 2 min；PCR：（94℃30 s，58℃30 s，72℃1 min）×35個循環(huán)，72℃延伸7 min，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.5.2 PRV、PCV2的擴(kuò)增 分別用天根生物科技有限公司DNA提取試劑盒，從病毒培養(yǎng)液提取DNA為模板，采用TaKaRa One Step DNA PCR Kit試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件94℃2 min；（94℃30 s，55℃ 30 s，72℃ 1 min）×35個循環(huán)，72℃延伸10 min，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

2 結(jié)果與分析

（1）2016年對29個省245個規(guī)模豬場送檢692份肺臟、脾臟和淋巴結(jié)等組織樣品與305份腸道內(nèi)容物，糞便等組織樣品，分別進(jìn)行了PRRSV、CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV等7種病原的檢測。結(jié)果顯示，CSFV（10/692）陽性檢出率1.45%，PRRSV（166/665）陽性檢出率24.96%，PCV2（210/ 585）陽性檢出率35.90%，PRV（100/593）陽性檢出率16.86%，PEDV（125/305）陽性檢出率40.98%，TGEV（9/295）陽性檢出率3.05%，PoRV（14/289）陽性檢出率4.84%。7種常見感染豬的病原中PEDV、PCV2、PRRSV、PRV等4種病原檢出率明顯高于其他3種病原，其中CSFV檢出率最低（圖2）。

圖2 2016年全年各常見病毒檢出率統(tǒng)計(jì)

（2）2016年送檢樣品中CSFV在第一、二、三、四季度檢出率分別為0.87%、1.66%、0、2.78%，檢出率均較低。PRRSV在第一、二、三、四季度檢出率分別為28.57%、29.17%、9.16%、28.70%，檢出率較高，其中一、二、四季度檢出率高，三季度明顯下降。PRV在第一、二、三、四季度的檢出率分別為13.67%、12.80%、5.93%、28.36%，檢出率最高的季度為四季度，其次為一季度。PCV2在第一、二、三、四季度檢出率分別為34.82%、51.18%、28.23%、27.37%，檢出率最高為二季度，其次為一季度。4種病原PCV2檢出率顯著高于其他3種病原。檢出率的動態(tài)變化見圖3。

圖3 不同季度CSFV、PRRSV、PRV、PCV2 4種病毒檢出率動態(tài)變化

（3）2016年送檢腸道內(nèi)容物和糞便中PEDV在第一、二、三、四季度的檢出率分別為46.07%、28.77%、35.71%、49.43%，檢出率均較高，尤其第一和四季度檢出率明顯高于第二季度。TGEV在第一、二、三、四季度的檢出率分別為4.88%、1.39%、7.14%、0，檢出率較低。PoRV在第一、二、三、四季度的檢出率分別為0、2.78%、15.79%、3.70%，檢出率略高于TGEV，明顯低于PEDV（圖4）。

圖4 PEDV、TGEV、PoRV 3種病毒檢出率動態(tài)變化

（4）對166份檢測到PRRSV陽性樣品統(tǒng)計(jì)PRRSV單獨(dú)感染和PRRSV與PCV2、PRV、PEDV等病原混合感染情況。其中PRRSV單一檢出率為33.73%，PRRSV與PCV2混合感染檢出率為42.77%，PRRSV與PRV混合感染為9.64%，PRRSV與PEDV混合感染檢出率5.42%，PRRSV與PCV2、PEDV 3種病原混合感染檢出率為1.20%，PRRSV與PRV、PEDV 3種病原混合感染檢出率為1.80%，PRRSV與PCV2、PRV、PEDV 4種病原混合感染檢出率為0.60%（圖5）。

圖5 2016年1—12月PRRSV與其他病毒混合感染變化

（5）對210份PCV2抗原陽性樣品統(tǒng)計(jì)PCV2與PRRSV、CSFV、PRV、PEDV等病原混合感染情況，PCV2單獨(dú)感染和PCV2與PRRSV、PRV、PEDV等混合感染情況。其中PCV2單一檢出率為41.43%，PCV2與PRRSV混合感染檢出率為29.52%，PCV2與PRV混合感染為16.19%，PCV2與PEDV混合感染檢出率3.81%，PCV2與PRRSV、PEDV 3種病原混合感染檢出率為2.38%，PCV2與PRV、PEDV 3種病原混合感染檢出率為2.38%，PCV2與PRRSV、PRV、PEDV 4種病原混合感染檢出率為0.48%（圖6）。

圖6 2016年1—12月PCV2與其他病毒混合感染變化

（6）比較2015與2016年7種病原檢出率的變化顯示，2015年CSFV檢出率20.59%，2016年1.45%呈明顯下降趨勢。PRRSV檢出率由2015年32.54%下降到2016年的24.96%。PCV2檢出率由2016年的39.35%下降至35.90%。PRV的檢出率由2015年的6.5%上升到2016年16.86%。PEDV檢出率由56.38%下降至40.98%。TGEV檢出率由2015年的7.04%下降到2016年的3.05%。PoRV檢出率由2015年0上升到2016年的4.84%（圖7）。

圖7 2015年與2016年7種病原陽性檢出率對比變化

3 討論

（1）2016年通過對245個規(guī)模豬場的692份肺臟、脾臟和淋巴結(jié)等組織樣品和305份糞便或腸道組織，采用PCR和RT-PCR方法對常見7種病毒類疾病病原檢測和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析得知，CSFV陽性檢出率（10/692）1.45%，PRRSV陽性檢出率（166/665）24.96%，PCV2陽性檢出率（210/585）35.90%，PRV陽性檢出率（100/593）16.86%，PEDV陽性檢出率（125/ 305）40.98%，TGEV陽性檢出率（9/295）3.05%，PoRV陽性檢出率（14/289）4.84%。其中PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5種病原檢出率高，仍是危害規(guī)模豬場的主要病原。CSFV、TGEV等2種病原檢出率低，說明豬場控制的較好。

（2）第一、二季度對保育豬慢性消瘦和呼吸道病嚴(yán)重病例PRRSV、PCV2檢出率高，保育豬均勻度差，死淘率高；第一季度和第四季度對新生仔豬暴發(fā)腹瀉病例PEDV、PoRV檢出率高，造成哺乳仔豬成活率低，損失嚴(yán)重?？梢姸竞痛杭緝蓚€季節(jié)是因氣溫下降和晝夜溫差大等環(huán)境因素導(dǎo)致豬體抗病能力下降容易感染PRRSV、PCV2、PEDV、PoRV等病原。所以季節(jié)來臨前應(yīng)加強(qiáng)豬場保溫和強(qiáng)化免疫等措施。

（3）對7種病原混合感染情況可看出，PRRSV與PCV2的共感染現(xiàn)象最為嚴(yán)重，另外PCV2、PRRSV單獨(dú)感染的情況也比較普遍，PCV2、PRRSV與PRV的混合感染也占有一定的比例，零星有與PEDV混合感染發(fā)生。建議豬場做好PCV2、PRRSV、PRV等3個病原的防疫工作，感染陽性場豬場引種要慎重。

（4）比較2015年與2016年7種病原CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV陽性檢出率，其中CSFV、PRRSV、PCV2、PEDV、TGEV等5種病原檢出率下降，而PRV、PoRV等2種病原陽性檢出率呈上升趨勢。

（5）對檢測PRRSV的樣品，要求有臨床癥狀并剖檢取肺臟病變部位、脾臟和淋巴結(jié)混合作為檢驗(yàn)樣品，采用RT-PCR方法，不同引物檢測能區(qū)分經(jīng)典株、變異株和類NADC30株，但做數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)時不同毒株的陽性樣品均判定PRRSV陽性。從送檢單位反映的信息和實(shí)驗(yàn)室的檢測結(jié)果分析得知PRRSV的不同毒株在臨床上均有致病性，生長豬感染后會表現(xiàn)不同程度的發(fā)燒、咳喘、消瘦、生長抑制、精神沉郁，剖檢以肺臟病變?yōu)橹?，部分樣品來自早產(chǎn)和正常分娩所產(chǎn)死胎。PRRSV導(dǎo)致的母豬繁殖障礙與生長豬的呼吸道病仍是臨床常見的表現(xiàn)形式。而調(diào)查發(fā)現(xiàn)加強(qiáng)藍(lán)耳病活疫苗和滅活疫苗科學(xué)合理使用可降低發(fā)病率。檢測PRV的樣品主要以發(fā)病豬腦為主，臨床上表現(xiàn)典型神經(jīng)癥狀，如肌肉震顫，精神沉郁，口吐白沫等哺乳仔豬和保育豬發(fā)病為主。部分豬場暴發(fā)時以母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎等，保育豬神經(jīng)癥狀和育成豬嚴(yán)重呼吸道病為典型臨床表現(xiàn)。剖檢后腦出血病變嚴(yán)重。選用合適的引物，通過PCR方法檢測特異性好，敏感度高。檢測PCV2的樣品主要為淋巴結(jié)和脾臟等免疫器官為主。因PCV2感染豬體免疫器官造成白細(xì)胞水平下降，機(jī)體免疫機(jī)能下降，在臨床上表現(xiàn)斷奶后仔豬至生長豬階段慢性消瘦、生長抑制以及與PRRSV等病毒和細(xì)菌感染增加此階段豬死淘率。臨床PCV2疫苗應(yīng)用廣泛，但因疫苗品質(zhì)和免疫方法不正確導(dǎo)致免疫效果不理想，臨床檢出率較高。檢測PEDV、TGEV、PoRV等病毒的樣品只要來自腹瀉豬的糞便和小腸內(nèi)容物，采用RT-PCR方法檢測特異，敏感，方法可靠，也可以采取膠體金的方法檢測。PEDV感染發(fā)病急，傳播快，哺乳仔豬死亡率高為典型特征。通過檢測發(fā)現(xiàn)PEDV流行已經(jīng)無明顯季節(jié)性特征，并且臨床上感染各生理階段豬群。所以，豬場要加強(qiáng)群體免疫和全年免疫的理念，做好保溫、消毒及營養(yǎng)等措施能降低發(fā)病率和發(fā)病死亡率。

4 免疫建議（僅供參考）

4.1 豬瘟兔化弱毒疫苗

種公豬/母豬一年普免3～4次，2頭份/頭或母豬產(chǎn)后21 d跟胎免疫2頭份/頭，仔豬28～35日齡首免2頭份/頭，56～63日齡二免2頭份/頭；后備豬配種前免疫1次，2頭份/頭。

4.2 豬偽狂犬病活疫苗

種公豬/母豬一年普免3～4次，2頭份/頭，仔豬1～3日齡滴鼻1頭份/頭（PRV-gE抗體陰性的豬場可不滴鼻），45～55日齡二免2頭份/頭，90～100日齡三免2頭份/頭。

4.3 豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗

種公豬/母豬一年普免3～4次（產(chǎn)前15 d至分娩慎重免疫），2 mL/頭，或者母豬產(chǎn)前30 d，產(chǎn)后14 d加強(qiáng)免疫2 mL/頭，仔豬7～14日齡首免1 mL/頭，28～35日齡二免1 mL/頭，斷奶仔豬和保育中后期出現(xiàn)典型斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）問題應(yīng)在發(fā)病前2～3周建立堅(jiān)強(qiáng)免疫。

4.4 豬流行性腹瀉疫苗

種公豬/母豬8月份1年普免1次，1頭份/頭，間隔3周加強(qiáng)免疫，過30 d對產(chǎn)前40～50 d妊娠母豬免疫1頭份/頭，產(chǎn)前20～30 d加強(qiáng)免疫1頭份/頭（建議常年跟胎次免疫），豬病毒性腹瀉三聯(lián)活疫苗，產(chǎn)前10～15 d免疫PED滅活疫苗4 mL/頭，仔豬斷奶時免疫1頭份/頭，后備豬配種前免疫2次，1頭份/頭，間隔21 d加強(qiáng)免疫。

（編輯：郭玉翠）

多年無解怪病 全因荔枝惹禍

【英國廣播公司網(wǎng)站2月2日報道】題：印度北部兒童死亡怪癥病因竟是“空腹吃荔枝”

困擾了印度北部荔枝產(chǎn)地的醫(yī)生多年的兒童怪病，竟然是由于空腹吃荔枝引起的。都20多年了，明明健康的孩子突然就不行了，喪失知覺，其中差不多一半的孩子會喪命，讓醫(yī)生們不得其解。日前，科學(xué)家查明，這個神秘怪病的病根就是“空腹吃荔枝”。美國和印度的科學(xué)家從此解開了每年導(dǎo)致印度北部比哈爾邦超過100名孩子喪生的怪病之謎。科學(xué)家們在發(fā)表的研究報告中稱，這些孩子都死于“荔枝中毒”。

雖然中國古代早有對服用荔枝的專述，尤其是對不能空腹吃荔枝的告誡。但遠(yuǎn)在印度荔枝主產(chǎn)區(qū)的孩子們對此一無所知。他們大多家里很窮，所以當(dāng)荔枝成熟季節(jié)到來時，孩子們就瘋搶著吃熟透掉在地上的荔枝。荔枝進(jìn)入他們體內(nèi)后，分泌的毒素抑制身體產(chǎn)生葡萄糖，從而給孩子們帶來危害。這些窮孩子們本來身體里的血糖就低，加上通常還沒吃飯，所以到晚上病發(fā)時，就會從睡夢中驚醒尖叫。發(fā)病的孩子很快由于急性腦腫而抽搐、失去知覺。研究人員在檢查這些患病的孩子時，注意到他們發(fā)病的樣子與加勒比海地區(qū)出現(xiàn)在孩子們身上的一種腦腫和抽搐的病癥很像。那種病是由西非荔枝果引起的。隨后，科學(xué)家們對荔枝進(jìn)行化驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)荔枝中含有和西非荔枝果肉里同樣的毒素：次甘氨酸?，F(xiàn)在，醫(yī)生們告誡當(dāng)?shù)睾⒆拥募议L：吃荔枝不能過量。一旦發(fā)生“荔枝中毒”，則需要馬上按低血糖接受救治。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2017-02-03）

S858.28

A

1002-1957(2017)02-0089-04

2017-03-01

夏 偉（1977-），男，黑龍江哈爾濱人，獸醫(yī)師，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，碩士，主要從事動物傳染病防治及技術(shù)服務(wù)工作.

E-mail：747360879@qq.com