李秀杰 馬亞光 唐霞(沈陽化工研究院有限公司，遼寧 沈陽 110021)

二氯吡啶酸高效液相色譜分析方法

李秀杰 馬亞光 唐霞(沈陽化工研究院有限公司，遼寧 沈陽 110021)

[目的]建立一種反相高效液相色譜測定二氯吡啶酸原藥的定量分析方法。[方法]采用高效液相色譜法，使用Ac?claim C18色譜柱，以乙腈與磷酸水溶液(體積比30∶70)為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為280nm，對二氯吡啶酸原藥進行分離和測定。[結(jié)果]當二氯吡啶酸質(zhì)量濃度在40～2000 mg/ L時，二氯吡啶酸的線性相關(guān)系數(shù)為0.9995，標準偏差為0.37；變異系數(shù)為0.38%，加標回收率在99.29%～99.70%之間。[結(jié)論]該方法簡單，快速，分離效果好，適合于二氯吡啶酸原藥、可溶粒劑、水劑中二氯吡啶酸的檢測。

二氯吡啶酸；高效液相色譜；定量分析

二氯吡啶酸（Clopyralid）化學名稱3,6-二氯吡啶-2-羧酸,結(jié)構(gòu)式見圖1，屬激素型雜環(huán)類除草劑，由美國陶氏化學公司于

1977年發(fā)現(xiàn)，是一種內(nèi)吸性苗后除草劑。可有效防除一年生或多年生闊葉雜草[1]，尤其是太陽花、茄科、豆科類雜草。近年來，在病蟲害防治方面二氯吡啶酸已有廣泛報道[2]，并且人們對二氯吡啶酸的合成、制劑[3-4]，甚至在殘留動態(tài)方面已有更深入的研究[5-6]。本文對已有方法，甲醇/乙腈/水作為流動相對二氯吡啶酸進行分析分離進行優(yōu)化[7]，選擇磷酸與乙腈進行適當配比作為流動相，進行高效液相色譜分析，這種方法峰形優(yōu)異，準確度高并且線性范圍寬，能夠?qū)ζ髽I(yè)在該產(chǎn)品的質(zhì)量控制方面提供參考價值。

圖1 二氯吡啶酸的化學結(jié)構(gòu)式

1 實驗部分

1.1 儀器

高效液相色譜儀：Dionex Ultimate 3000；色譜柱：Acclaim C18 250 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼柱；過濾器：濾膜孔徑約0.45 μm；定量進樣管：5 μL；超聲波清洗器。

1.2 試劑和溶液：

乙腈：色譜純(國藥集團化學試劑有限公司)；磷酸；分析純；磷酸溶液：水用磷酸調(diào)pH至2.4；超純水；0.22 μm水系濾膜(天津美瑞泰克公司)；二氯吡啶酸標樣：已知質(zhì)量分數(shù)，w≥99.0%。

1.3 色譜條件

流動相：乙腈-磷酸溶液(體積比30:70)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；進樣體積：5 μL；保留時間：約5.7 min；典型色譜圖見圖2。

圖2 二氯吡啶酸原藥的高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標樣的制備

稱取0.01 g(精確至0.000 2 g)二氯吡啶酸標樣于50 mL容量瓶中用流動相稀釋至刻度，搖勻。

1.4.2 試樣的制備

稱取含0.01 g(精確至0.000 1 g)二氯吡啶酸的試樣于50 mL容量瓶中用流動相稀釋至刻度，搖勻。

1.4.3 測定

按1.3描述的色譜條件設(shè)置儀器，平衡一段時間使儀器穩(wěn)定后，連續(xù)進幾針標樣溶液，計算相鄰標樣峰面積相對變化小于1.5%后,按照標樣、2針試樣、標樣的順序進行測定。

1.4.4 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中峰面積分別進行平均。試樣中二氯吡啶酸的質(zhì)量分數(shù)w1按式(1)計算：

式中：w1為試樣中二氯吡啶酸的質(zhì)量分數(shù)（%）；A2為試樣溶液中，峰面積的平均值；m1為標樣的質(zhì)量（g）；w為二氯吡啶酸標樣的質(zhì)量分數(shù)（%）；A1為標樣溶液中，峰面積的平均值；m2為試樣的質(zhì)量(g)。

2 實驗結(jié)果與討論

2.1 實驗條件的優(yōu)化

2.1.1 檢測波長的確定

對二氯吡啶酸標樣進行190～400nm紫外光譜掃描，紫外光譜圖見圖3，發(fā)現(xiàn)二氯吡啶酸的最大吸收波長依次為196nm，

225nm，282 nm。為了保證足夠的靈敏度，同時避免低波長處背景中雜質(zhì)的干擾，故檢測波長確定為280 nm。

圖3 二氯吡啶酸的紫外光譜圖

2.1.2 流動相配比的確定

試驗了甲醇-水、乙腈-水、緩沖鹽等不同配比體系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除乙腈-水體系，采用其它流動相體系時存在著或分離效果不好，或峰展太寬、峰形較差等問題，當流動相采用乙腈-水體系時，柱壓較低，分離效果較好，只是峰形有些拖尾，試驗發(fā)現(xiàn)用酸性水能夠改觀峰形拖尾現(xiàn)象，進一步用磷酸對流動相體系中水進行pH值的調(diào)節(jié)及與乙腈不同配比條件試驗，結(jié)果水用磷酸調(diào)至pH為2.4時，（乙腈+酸水）=30+70配比條件最令人滿意，能夠完全滿足二氯吡啶酸原藥、可溶粒劑、水劑樣品的分離和定量。

2.1.3 pH值的影響

通過pH值試驗發(fā)現(xiàn)，pH值變小保留時間增加、峰形對稱性變好，當pH值調(diào)整為2.4時峰形趨于對稱。

2.2 線性范圍試驗

稱取一定質(zhì)量范圍內(nèi)數(shù)個不同質(zhì)量的二氯吡啶酸標樣于50 mL容量瓶中用流動相稀釋至刻度，搖勻。按1.3描述的色譜條件測定二氯吡啶酸的峰面積，以質(zhì)量濃度c為橫坐標、峰面積A為縱坐標，做標準曲線。得到線性關(guān)系圖，回歸方程線A=

58.88 c-0.826，相關(guān)系數(shù)r=0.9995。

2.3 方法精密度試驗

選取一個二氯吡啶酸原藥，按1.3描述的色譜條件進行測試6針，計算精密度。結(jié)果可以看出本方法對二氯吡啶酸有良好的精密度。其標準偏差為0.37，變異系數(shù)為0.38%，試驗結(jié)果見表1。

表1 二氯吡啶酸原藥精密度試驗結(jié)果

2.4 方法準確度試驗

稱取6個不同水平的二氯吡啶酸原藥，分別加入6個不同水平的二氯吡啶酸標樣，按1.3色譜條件測試，并計算回收率。結(jié)果表明，該方法對二氯吡啶酸有較好的加標回收率，回收率在99.29%～99.70%之間。結(jié)果見表2。

表2 二氯吡啶酸原藥回收率試驗結(jié)果(標樣質(zhì)量分數(shù)98.8%；原藥質(zhì)量分數(shù)97.5%)

3 結(jié)語

實驗結(jié)果表明，使用Acclaim C18型色譜柱，以乙腈+磷酸水溶液=(30+70)為流動相。建立了二氯吡啶酸原藥、可溶粒劑、水劑中二氯吡啶酸有效含量測定的液相色譜分析方法。該方法在10min內(nèi)可以完成，其線性范圍在40mg/L～2000mg/L之間，加標回收率在99.29%～99.70%之間，標準偏差為0.37，變異系數(shù)為0.38%。該方法簡單，快速，分離效果好，適合于二氯吡啶酸原藥、可溶粒劑、水劑中二氯吡啶酸的檢測。

[1]江鎮(zhèn)海.吡啶及其衍生物在農(nóng)藥中的作用[J].農(nóng)藥及市場信息，2010（5）：25.

[2]張宏軍,郭嗣斌;,朱文達,等.75%二氯吡啶酸對油菜田闊葉雜草的防除效果,華中農(nóng)業(yè)大學學報,2009，28（1）：27～30

[3]孫妍，等二氯吡啶酸可溶粒劑的高效液相色譜分析，[J].農(nóng)藥,2008,47(11):810-811.

[4]朱傳明.75%二氯吡啶酸可溶粒劑的反相高效液相色譜測定，安徽化工，2008,34(1):66-67.

[5]白小軍，牛艷，趙子丹;等.油菜及土壤中二氯吡啶酸殘留量的氣相色譜分析.湖北農(nóng)業(yè)科學.2013-08-05

[6]王秀梅，侯志廣，逯忠斌，等.二氯吡啶酸在油菜及土壤中的殘留動態(tài)研究[J].吉林農(nóng)業(yè)大學學報，2006，28（4）：430－432.

[7]王艷萍，二氯吡啶酸原藥的高效液相色譜分析，《精細化工中間體》,2008,38(3):41-41.

李秀杰(1964-)，女，工程師，主要從事農(nóng)藥標準的制定、檢測與分析方法的研究。