柯長征

江西省瑞昌市血吸蟲病防治站

華支睪吸蟲囊蚴在活魚體存活時(shí)間實(shí)驗(yàn)觀察

柯長征

江西省瑞昌市血吸蟲病防治站

目的觀察華支睪吸蟲囊蚴在活魚體存活時(shí)間。方法人工養(yǎng)殖麥穗魚獲得第二代魚，用華支睪蟲卵感染紋沼螺獲得華支睪吸蟲尾蚴，并將尾蚴感染第二代魚,觀察華支睪囊蚴在活魚體存活時(shí)間。結(jié)果魚體華支睪囊蚴數(shù)目－年后逐漸減少，三年后基本消失。結(jié)論華支睪囊蚴在活魚體第＋三個(gè)月逐漸減少，四十四個(gè)月基本消失。

華支睪囊蚴；麥穗魚；存活時(shí)間；實(shí)驗(yàn)觀察

關(guān)于華支睪吸蟲囊蚴的研究有不少報(bào)道：例如華支睪吸蟲囊蚴在不同條件下存活的觀察[1]，魚體華支睪吸蟲囊蚴自然感染狀態(tài)及保存液中存活情況[2]，華支睪囊蚴在不同溫度及醋、醬油生存時(shí)間[3]，自然干燥對(duì)魚體華支睪吸蟲囊蚴感染性的初歩觀察[4]，華支睪吸蟲囊蚴在活魚體存活時(shí)間：認(rèn)為自然感染華支睪吸蟲囊蚴的白皖魚苗，在沒有再感染的條件下飼養(yǎng)，從第三個(gè)月開始魚體囊蚴數(shù)目逐漸減少，一年后基本消失[5]。華支睪吸蟲由囊蚴感染終宿主，為深入了解華支睪囊蚴在活魚體存活時(shí)間，我們持續(xù)了6年實(shí)驗(yàn)觀察。

一、材料與方法

1.獲得第二代麥穗魚

2011年1月，在室外建造3.8m x 3.6m x 1.3m大小能溶17.8m3水量的養(yǎng)魚池，池底備有可供魚越冬或避署設(shè)施,從未有華支睪吸蟲易感螺的池塘取水于池內(nèi)。同年4月,在當(dāng)?shù)夭东@麥穗魚[6]30條放入池中產(chǎn)卵，6月見有魚苗孵出，12月去除母魚，保留300條第二代魚苗繼續(xù)飼養(yǎng)。

2.獲得華支睪吸蟲尾蚴

2011年4月，從華支睪吸蟲疫區(qū)[7]捕獲麥穗魚28條，用玻片壓片法鏡檢，見有華支睪吸蟲囊蚴，再用人工消化液[8]將魚體消化，獲取華支睪吸蟲囊蚴400個(gè)，用1只成年中華田園犬[9]食入感染。2012年4月中旬，從當(dāng)?shù)厥叭〖y沼螺[10]100只，在室內(nèi)進(jìn)行人工養(yǎng)殖，5月中旬獲取第二代幼螺200只，用于感染華支睪吸蟲蟲卵。2012年6月上旬，幼螺殼高長至2㎜-3㎜，解剖感染犬，取其肝膽管及膽囊內(nèi)蟲卵，水洗沉淀后采用點(diǎn)滳毫升計(jì)數(shù)法，按1:30螺、卵比例，將200只幼螺和6000個(gè)蟲卵感染48h。同年8月獲得大量華支睪吸蟲尾蚴。

3.獲得華支睪吸蟲囊蚴

2012年9月中旬，將以上200只正在逸出華支睪尾蚴的紋沼螺和300條第二代麥穗魚，同養(yǎng)于－玻璃缸中，讓尾蚴感染麥穗魚10天，然后把感染有華支睪吸蟲尾蚴的魚放回到養(yǎng)魚池中飼養(yǎng)。－個(gè)月后從魚池中捕魚1條重量3g,取魚肉玻片壓片法鏡檢,査見342個(gè)發(fā)育成熟的華支睪吸蟲囊蚴。

魚池中感染有華支睪囊蚴的麥穗魚,經(jīng)常投食物喂養(yǎng)，向池內(nèi)補(bǔ)充池塘水。需要觀察池中魚體囊蚴時(shí)，采用魚籠透捕法，控制透捕魚數(shù),減少傷害整池魚。每年年底將池中水排干，清除新增殖的魚苗，防止影響觀察魚體囊蚴存活時(shí)間的效果。

4.觀察魚體囊蚴減少

2012年10月下旬，從魚池中捕魚6條，在魚背部相同部位各取0.2g魚肉玻片壓片法鏡檢，囊蚴計(jì)數(shù),獲取6條魚囊蚴平均數(shù)（表1）。

確定6條魚平均22個(gè)囊蚴之后,每月定時(shí)捕相同魚數(shù)和用同樣檢査方法觀察魚體囊蚴一次，當(dāng)發(fā)現(xiàn)魚體囊蚴數(shù)平均少于22個(gè)，再從池中捕6條魚觀察,魚體囊蚴仍然不足22個(gè),則視為魚體囊蚴數(shù)開始減少。

5.觀察魚體囊蚴消失

魚體囊蚴減少之后，改捕1條魚每月定時(shí)觀察，取0.2g魚肉玻片壓片法鏡檢，囊蚴計(jì)數(shù)。若0.2g魚肉不見囊蚴，取魚肉再檢，整條魚不見囊蚴，從魚池中再捕魚鏡檢，以見到活囊蚴為止。池中魚仍找不到囊蚴，則視為魚體囊蚴消失。

二、結(jié)果

1.魚體囊蚴減少

2012年10月下旬開始，每月從池中捕魚6條，在魚背部的相同部位各取0.2g魚肉玻片壓片法鏡檢，觀察魚體囊蚴數(shù)量變化。結(jié)果在2013年10月魚體囊蚴不足22個(gè)平均數(shù)（表2），故視為魚體囊蚴從第十三個(gè)月開始減少。

2.魚體囊蚴消失

2012年10月下旬，魚肉玻片壓片法鏡檢，華支睪囊蚴呈淡黃色，結(jié)構(gòu)清晰，排瀉囊活動(dòng)，幾乎全是活囊蚴。冬季排瀉囊停止活動(dòng)，加溫時(shí)排瀉囊不停轉(zhuǎn)動(dòng)，是低溫環(huán)境識(shí)別囊蚴活性的方法之一。2013年9月，偶爾見有囊壁清楚，囊內(nèi)成片狀淺黑色，結(jié)構(gòu)模糊,呈死亡狀態(tài)；有的囊蚴－端缺失，有的僅剩囊壁框架，囊體分解。2014年8月，魚體囊蚴減少明顯，魚體表層囊蚴比深部魚肉囊蚴消失快,冬季較夏季減少慢。2015年8月，見有整條魚囊蚴完全消失，魚體囊蚴顯著減少。2016年6月，一次性魚肉玻片壓片法鏡檢52條魚，并將取過魚肉的剩余用消化液消化后觀察，皆未找到華支睪囊蚴，初歩認(rèn)定華支睪吸蟲囊蚴在活魚體存活44個(gè)月。

表1 鏡檢6條魚囊蚴數(shù)

表2 2012－2016年華支睪囊蚴（個(gè)）在魚體消減情況

三、討論

本次實(shí)驗(yàn)用華支華睪吸蟲尾蚴感染人工養(yǎng)殖的第二代麥穗魚獲得華支睪吸蟲囊蚴，經(jīng)持續(xù)觀察華支睪吸蟲囊蚴在活魚體存活時(shí)間，結(jié)果魚體囊蚴數(shù)目－年后逐漸減少，三年后基本消失；與以往魚體囊蚴數(shù)目三個(gè)月逐漸減少，一年后基本消失的觀察結(jié)果相差較大。以往是捕獲自然感染了華支睪吸蟲的白皖魚苗，在沒有再感染的條件下飼養(yǎng)，認(rèn)為難以確定華支睪吸蟲尾蚴感染魚體時(shí)間，還可能與飼養(yǎng)魚體囊蚴的水質(zhì)、水量及水溫等生存條件有關(guān)。華支睪吸蟲囊蚴可寄生多種魚類[11]，華支睪囊蚴在魚體存活時(shí)間的長短，影響華支睪吸蟲病的流行動(dòng)態(tài)。華支睪吸蟲全球感染者數(shù)以千萬計(jì)，我國占多數(shù)，并呈上升趨勢[12]。因此，觀察華支睪吸蟲囊蚴在活魚體存活時(shí)間，在流行病學(xué)上有重要意義。

[1]袁維華，王義森，高炎標(biāo).華支睪吸蟲囊蚴在不同條件下存活的觀察[J].中囯人獸共患病雜志,1988，4（3）：56-57.

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柯長征（1957-），男，漢族，江西瑞昌人，主治醫(yī)師，大專，江西省瑞昌市血吸蟲病防治站，研究方向：寄生蟲防治。