HPLC法測(cè)定氯霉素滴眼液含量的不確定度分析

宋增炫?陳媛?藍(lán)紅梅

[摘要] 目的 建立HPLC 法測(cè)定氯霉素滴眼液含量的不確定度分析的一般方法。 方法 建立計(jì)算氯霉素滴眼液含量的不確定度的數(shù)學(xué)模型， 找出影響不確定度的因素， 并對(duì)各個(gè)不確定度分量進(jìn)行評(píng)估。 結(jié)果 計(jì)算各變量的不確定度分量，最終給出測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度和置信水平。含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.522%，擴(kuò)展不確定度為1.0%。含量測(cè)定結(jié)果表示為（94.64±1.0）%，包含因子k=2。 結(jié)論 建立的不確定度評(píng)估方法適用于對(duì)HPLC 法測(cè)定的氯霉素滴眼液含量進(jìn)行不確定度分析。

[關(guān)鍵詞] 測(cè)量不確定；氯霉素滴眼液；HPLC

[中圖分類號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）05-31-04

[Abstract] Objective To establish the general method of determination of chloramphenicol eye drops by HPLC. Methods A mathematical model for calculating the uncertainty of chloramphenicol eye drops content was established. Factors affecting uncertainty was selected. The uncertainty components were evaluated. Results The uncertainty components of each variable were calculated， and the extended uncertainty and confidence level were given. The standard uncertainty of measurement was 0.522%， and the expanded uncertainty was about 1%. The results were expressed as （94.64±1）%， including factor k = 2. Conclusion The method of uncertainty evaluation is suitable for the determination of the content of Chloramphenicol Eye Drops by HPLC.

[Key words] Measurement uncertainty； Chloramphenicol eye drops； HPLC

近年來(lái)廣東省省級(jí)及以上食品藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室均開(kāi)展了大量的測(cè)量不確定度評(píng)定工作，但地方市級(jí)食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)室則對(duì)測(cè)量不確定度評(píng)定工作了解不多。筆者結(jié)合日常藥品檢驗(yàn)的實(shí)際工作，對(duì)監(jiān)督抽樣中重點(diǎn)關(guān)注品種氯霉素滴眼液的含量測(cè)定進(jìn)行不確定分析。食品藥品檢驗(yàn)的結(jié)論取決于測(cè)量所得到的數(shù)據(jù)或量值（測(cè)得值），顯然測(cè)得值的質(zhì)量?jī)?yōu)劣或可信程度至關(guān)重要。其評(píng)價(jià)指標(biāo)就是測(cè)量不確定度[1]，本文根據(jù)《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》（JJF1059.1-2012）和《化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定》（JJF1135-2005）中的有關(guān)規(guī)定[2-3] ，對(duì)《中國(guó)藥典》2010年版氯霉素滴眼液中HPLC法測(cè)定氯霉素含量的不確定度進(jìn)行分析，初步建立了適用于評(píng)估氯霉素滴眼液含量測(cè)定的不確定度方法，以控制測(cè)量結(jié)果的有效性和適宜性。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20AT高效液相色譜儀；METTLER AG135電子分析天平；氯霉素滴眼液（規(guī)格8mL：25mg， 廣東宏盈科技有限公司，批號(hào)：15042401） 氯霉素對(duì)照品（由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)：130555-201203。含量：99.8%）。

2 方法與結(jié)果

照《中國(guó)藥典》2010年版氯霉素滴眼液項(xiàng)下含量測(cè)定方法[4]進(jìn)行試驗(yàn)，規(guī)定本品含氯霉素（C11H12Cl2N2O5）應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～120.0%。

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3（5μm 4.6mm×250mm）；流動(dòng)相A為含0.01mol/L庚烷磺酸鈉緩沖溶液（取磷酸二氫鉀6.8g，用0.01mol/L庚烷磺酸鈉溶液溶解并稀釋至1000mL，再加三乙胺5mL，混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5）；流動(dòng)相B為甲醇，按下表進(jìn)行線性梯度洗脫；流速為1.0mL/min；柱溫為 30℃； 進(jìn)樣量為10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液（2份） 取供試品5支混勻，精密量取2mL，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相A-B（68：32） 稀釋至刻度搖勻，制成每1mL中含氯霉素0.1mg的溶液，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液（2份） 精密稱取氯霉素對(duì)照品10mg置100mL量瓶中，加甲醇1mL使溶解，用流動(dòng)相A-B（68：32）稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL中含氯霉素0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 測(cè)定

精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10?L注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中氯霉素（C11H12Cl2N2O5）的含量，并計(jì)算與標(biāo)示量（2.5mg/mL）的百分比。

2.4 結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

3 標(biāo)準(zhǔn)不確定度的評(píng)定[5-8]

3.1 對(duì)照品取樣量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（m對(duì)）

對(duì)照品取樣量m對(duì)的不確定度由天平引入，天平稱量重復(fù)性不確定度查天平檢定證書：RDJZ-20130301給出重復(fù)性誤差為± 0.02 mg，認(rèn)為矩形分布，則Urel（R1）=0.02/=0.0115。天平示值不確定度查天平檢定證書：RDJZ-20130301給出示值誤差為± 0.03 mg，認(rèn)為矩形分布 ，Urel（R2）=0.03/=0.0173 。因稱量為減重法，即2 次稱量，每份對(duì)照品稱量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

3.2 對(duì)照品溶液體積n對(duì)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（n對(duì)）

對(duì)照品溶液定容產(chǎn)生的不確定度，包括容量瓶允差、溫度帶來(lái)的不確定度，認(rèn)為線性疊加。

3.2.1 查JJG196-2006《常用玻璃量器》檢定規(guī)程，A級(jí)100mL量瓶的允許誤差為±0.10mL，因歷年校準(zhǔn)結(jié)果實(shí)際誤差都較小，故按三角分布考慮：

u允差（100）=0.10/=0.0408（mL）

4.2 計(jì)算測(cè)得值的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

報(bào)告值的不確定度還應(yīng)包含測(cè)量重復(fù)性的影響，為提高可信度，對(duì)樣品平行操作6份，以貝塞爾公式計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差，數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

5 擴(kuò)展不確定度的評(píng)估

取包含因子k=2，擴(kuò)展不確定度為：U= uc測(cè)得值（c氯霉素）×2=1.0%。

6 報(bào)告

氯霉素滴眼液中氯霉素相當(dāng)于標(biāo)示量的含量測(cè)量結(jié)果為C=（94.64±1.0）%，k=2。

7 討論

通過(guò)對(duì)不確定度測(cè)量的評(píng)定可幫助我們?cè)谌粘z驗(yàn)工作中找到影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素，提高我們檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性[11-15]。分析不確定的每一個(gè)來(lái)源，對(duì)其影響因素進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)對(duì)照品取樣量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（m對(duì)）是分析中不確定度的主要因素，因此，試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)采用精密度高、性能佳的天平；實(shí)驗(yàn)室要經(jīng)常對(duì)天平進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)。供試品取樣量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（V供）是第二影響因素，對(duì)吸量管、容量瓶等玻璃儀器一定要經(jīng)校正后再使用，HPLC法中，儀器的進(jìn)樣量，流速、檢測(cè)器的靈敏度、積分的準(zhǔn)確性等均會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，無(wú)法一一進(jìn)行評(píng)估，因此，我們平時(shí)在試驗(yàn)中因此應(yīng)加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器的維護(hù)保養(yǎng)， 保持其穩(wěn)定的工作狀態(tài)， 同時(shí)要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的控制，可選定一種或幾種較為穩(wěn)定的樣品作為平時(shí)對(duì)儀器性能的監(jiān)測(cè)和內(nèi)控。

多參加各種實(shí)驗(yàn)室測(cè)試能力比對(duì)。并加強(qiáng)試驗(yàn)人員基本操作以及減少各種人為因素對(duì)結(jié)果的影響。

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（收稿日期：2016-01-04）