桂科育成豬血常規(guī)指標(biāo)的測定分析

蘇乾蓮　梁家幸　卿珍慧　周英寧　陳忠偉　蔣冬?！”R敬?！±畋蟆≡S松芳　段群棚　趙武

摘要：[目的]檢測桂科育成豬的血常規(guī)指標(biāo)，明確不同功能細(xì)胞（紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板）的數(shù)量變化及形態(tài)分布情況，為桂科豬的免疫評估與抗病性能研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。[方法]于49日齡起每周對44頭桂科育成豬（公母各半）采血1次，連續(xù)采樣7周，測定其血常規(guī)指標(biāo)，并與長白豬和恩施黑豬的血常規(guī)指標(biāo)進(jìn)行比較分析。[結(jié)果]在桂科育成豬不同日齡的紅細(xì)胞類檢測指標(biāo)中，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）和血紅蛋白含量（HGB）均在70日齡達(dá)最低值（6.85×10/L和97.1 g/L），顯著低于49、56、63、84和91日齡時的對應(yīng)值（P<0.05，下同）；平均紅細(xì)胞血紅蛋白（MCH）和平均血紅蛋白濃度（MCHC）的變化規(guī)律基本一致，均在70日齡達(dá)最低值（15.11 pg和275.70 g/L）、91日齡達(dá)最高值（16.40 pg和314.30g/L）；紅細(xì)胞壓積（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）和紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW）的變化相對較穩(wěn)定，不同日齡間均無顯著差異（P>0.05，下同）。在白細(xì)胞類檢測指標(biāo)中，白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）于63日齡達(dá)最低值（13.71×10/L）、84日齡達(dá)最高值（17.52×10/L），二者差異顯著；中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（NEUT）在70日齡時達(dá)最低值（3.61×10/L），顯著低于49和56日齡的對應(yīng)值。淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（LYMPH）的變化相對較穩(wěn)定，受日齡增長的影響不顯著。在血小板類檢測指標(biāo)中，血小板計(jì)數(shù)（PLT）、血小板壓積（PCT）及血小板平均分布寬度（PDW）在不同日齡的變化相對較穩(wěn)定，受日齡增長的影響不顯著。與35日齡長白豬和5月齡以上恩施黑豬相比，桂科育成豬除HCT、平均血小板體積（MPV）、PCT和PDW等少數(shù)指標(biāo)表現(xiàn)異常外，其他大部分血常規(guī)指標(biāo)介于長白豬與恩施黑豬血常規(guī)指標(biāo)范圍內(nèi)。[結(jié)論]桂科育成豬在血常規(guī)指標(biāo)方面有一定的獨(dú)特性，發(fā)育至49-91日齡時已具備較穩(wěn)定的免疫系統(tǒng)。

關(guān)鍵詞：桂科育成豬；長白豬；恩施黑豬；血常規(guī)指標(biāo)；測定分析

0引言

[研究意義]血常規(guī)指標(biāo)是免疫學(xué)測定的基本指標(biāo)。因免疫功能易于度量測定，其研究結(jié)果也證實(shí)免疫指標(biāo)可作為抗病育種的間接指標(biāo)，因此通過免疫指標(biāo)篩選提高動物疾病抗性是一條實(shí)際可行的有效途徑（Arosa et al.，2004；vail de Vosse et al.，2009）。血液對保證機(jī)體新陳代謝、生理功能調(diào)節(jié)及內(nèi)外環(huán)境平衡起重要作用，一旦機(jī)體機(jī)能出現(xiàn)問題，首先在血液指標(biāo)上有所反應(yīng)；反之，血液中的任何有形成分或指標(biāo)發(fā)生病理變化，其影響也勢必在全身組織器官有所反映（Beutler，2004；陳少康等，2015）。因此，臨床醫(yī)學(xué)上已將血常規(guī)指標(biāo)檢測作為疾病診斷必不可少的一種輔助手段。[前人研究進(jìn)展]程澤信等（2007）在長江大學(xué)種豬場開展家豬和家野雜交一代及雜交二代的血液指標(biāo)測定，結(jié)果表明，野豬血緣含量越大，血液中紅細(xì)胞運(yùn)輸O2和CO2的能力越強(qiáng)，其運(yùn)動機(jī)能也越強(qiáng)，有利于肉質(zhì)的提高；白細(xì)胞數(shù)及血紅蛋白含量增高，則說明免疫系統(tǒng)有所增強(qiáng)，對疾病具有更強(qiáng)的抵抗力。劉江偉等（2007）探討長白仔豬血常規(guī)指標(biāo)及其生化指標(biāo)的正常值，發(fā)現(xiàn)長白仔豬的血常規(guī)指標(biāo)及生化指標(biāo)并無性別差異，但與巴馬小型香豬的參考值存在顯著差異，即長白仔豬具有其獨(dú)特的生理生化特征。李春燕等（2012）研究了中藥添加劑對豬血常規(guī)指標(biāo)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在基礎(chǔ)日糧中添加不同比例中藥添加劑能顯著提高豬大淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和單核細(xì)胞含量及IgG和IgM水平，即中藥添加劑對豬具有促進(jìn)增重、增強(qiáng)免疫的作用。王懷中等（2014）利用全自動血液細(xì)胞分析儀和流式細(xì)胞儀測定大蒲蓮和長白仔豬的血常規(guī)指標(biāo)和T淋巴細(xì)胞亞群性狀，并對這些性狀進(jìn)行品種和母豬效應(yīng)分析，結(jié)果表明，大蒲蓮仔豬和長白仔豬在大部分血常規(guī)指標(biāo)及T淋巴細(xì)胞亞群性狀方面存在顯著或極顯著差異。陳少康等（2015）研究表明，病豬群與長白豬的平均紅細(xì)胞體積（MCV）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）和粒細(xì)胞百分比（GRN）差異顯著，平均血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW）、平均血小板體積（MPV）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（LYMPH）、中值細(xì)胞計(jì)數(shù)（MID）、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（NEUT）差異極顯著，其他指標(biāo)差異不顯著，其中白細(xì)胞類指標(biāo)變化在一定程度上反映出豬群的健康情況，可作為一種評價豬群健康程度的輔助方法。向宇等（2015）對比分析了恩施黑豬與其他豬種的血液指標(biāo)，并對恩施黑豬CX-CR4基因SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，結(jié)果證實(shí)CXCR4基因SNP位點(diǎn)可用于探究血液指標(biāo)變化。郭士琪等（2016）研究豬瘟、豬藍(lán)耳病免疫程序?qū)ωi血液指標(biāo)的影響，擬從血液指標(biāo)水平確定最佳免疫程序，最終確定豬瘟弱毒疫苗和豬藍(lán)耳病弱毒苗的最佳免疫程序?yàn)椋菏紫让庖哓i瘟弱毒疫苗，間隔7 d后再免疫豬藍(lán)耳病弱毒疫苗，其免疫效果最佳，生長性能最優(yōu)。[本研究切入點(diǎn)]桂科豬是廣西畜牧研究所利用廣西本地品種陸川豬與外來品種豬雜交培育獲得的一個新配套系品種，兼具本地豬肉質(zhì)鮮美和外來豬生長速度快的雙重優(yōu)點(diǎn)，深受廣大養(yǎng)殖戶的青睞（潘天彪等，2010；謝炳坤等，2012；羅鮮青等，2015），但至今尚無關(guān)于桂科豬血常規(guī)指標(biāo)測定的研究報(bào)道。[擬解決的關(guān)鍵問題]通過檢測桂科育成豬的血常規(guī)指標(biāo)，明確不同功能細(xì)胞（紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板）的數(shù)量變化及形態(tài)分布情況，為桂科豬的免疫評估與抗病性能研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

7周齡（49日齡）桂科育成豬由廣西畜牧研究所桂科豬育種場提供，共44頭，公母各半，體重35-60kg/頭。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1血樣采集 采血前禁食12 h，記錄豬只性別和編號。于豬前腔靜脈竇采集血樣3.0 mL，置于含EDTA抗凝劑的離心管中，顛倒混勻，標(biāo)記相應(yīng)編號，4-8℃保存并及時送至廣西大學(xué)動物醫(yī)院進(jìn)行血常規(guī)檢測分析。每周采血測定1次，連續(xù)7周。

1.2.2血常規(guī)測定 血常規(guī)指標(biāo)采用法國優(yōu)德HS Compact數(shù)字化全自動血液分析儀進(jìn)行測定，共獲得18項(xiàng)指標(biāo)，主要分為紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板三大類。其中，紅細(xì)胞類包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC，×10/L）、血紅蛋白（HGB，g/L）、紅細(xì)胞壓積（HCT，%）、平均紅細(xì)胞體積（MCV，fL）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白（MCH，pg）、平均血紅蛋白濃度（MCHC，g/L）和紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW，%）等7項(xiàng)指標(biāo)；白細(xì)胞類包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC，×10/L）、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（NEUT，×10/L）、中性粒細(xì)胞百分比（NEUT%）、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（LYMPH，×10/L）、淋巴細(xì)胞百分比（LYMPH%）、中值細(xì)胞計(jì)數(shù)（MID，×10/L）和中值細(xì)胞百分比（MID%）等7項(xiàng)指標(biāo)；血小板類包括血小板計(jì)數(shù)（PLT，×10/L）、血小板壓積（PCT，mL/L）、平均血小板體積（MPV，fL）和血小板體積分布寬度（PDW，%）等4項(xiàng)指標(biāo)。打印相應(yīng)的檢測報(bào)告單，并標(biāo)記好相應(yīng)的編號。

1.3統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以Excel 2010進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，然后采用SPSS 17.0進(jìn)行單因素方差分析和LDS法多重比較分析。

2結(jié)果與分析

2.1桂科育成豬不同日齡血常規(guī)指標(biāo)分析結(jié)果

2.1.1紅細(xì)胞類指標(biāo)檢測分析結(jié)果 由表1可知，在桂科育成豬不同日齡的紅細(xì)胞類指標(biāo)中，RBC呈先降低后升高的變化趨勢，于70日齡達(dá)最低值（6.85×10/L），顯著低于49、56、63、84和91日齡時的RBC（P<0.05，下同）；HGB也在70日齡達(dá)最低值（97.1 g/L），顯著低于49、56、63、84和91日齡時的HGB；MCH和MCHC的變化規(guī)律基本一致，均在70日齡達(dá)最低值（15.11 pg和275.70 g/L）、91日齡達(dá)最高值（16.40 pg和314.30 g/L），二者間差異顯著；HCT、MCV和RDW的變化相對較穩(wěn)定，在不同日齡問均無顯著差異（P>0.05，下同）。

2.1.2白細(xì)胞類指標(biāo)檢測分析結(jié)果 由表2可知，在桂科育成豬白細(xì)胞類指標(biāo)中，WBC于63日齡達(dá)最低值（13.71×10/L）、84日齡達(dá)最高值（17.52×10/L），二者差異顯著；NEUT在70日齡時達(dá)最低值（3.61×10/L），顯著低于49、56和77日齡的時對應(yīng)值。LYMPH的變化相對較穩(wěn)定，受日齡增長的影響不顯著。在MID方面，其數(shù)量在49日齡達(dá)最大值（6.48×10/L）、63日齡達(dá)最小值（3.05×10/L），二者差異顯著，但其百分比變化并不同步，于56日齡達(dá)最大值（40.54%）、77日齡達(dá)最小值（19.98%）。

2.1.3血小板類指標(biāo)檢測分析結(jié)果 由表3可知，桂科育成豬PLT、PCT和PDW在不同日齡的變化趨勢相對較穩(wěn)定，即受日齡增長的影響不顯著；而MPV在91日齡達(dá)最大值（17.39fL），顯著高于70和77日齡的對應(yīng)值（15.77和15.84fL）。

2.2桂科育成豬與長白豬、恩施黑豬的血常規(guī)指標(biāo)比較分析結(jié)果

以桂科育成豬與35日齡長白豬（劉江偉等，2007）和5月齡以上恩施黑豬（向宇等，2015）的血常規(guī)指標(biāo)進(jìn)行比較分析，結(jié)果（表4）發(fā)現(xiàn)，除桂科育成豬的HCT和PDW明顯低于長白豬和恩施黑豬，MPV和PCT明顯高于長白豬和恩施黑豬外，其他血常規(guī)指標(biāo)與長白豬和恩施黑豬相近或介于二者間的血常規(guī)指標(biāo)范圍內(nèi)。

3討論

血常規(guī)指標(biāo)不僅能反映豬的免疫狀態(tài)和健康狀態(tài)，還是飼養(yǎng)管理與分類選育的重要參考依據(jù)（王懷中等，2014）。本研究于49日齡起每周對桂科育成豬采血1次，連續(xù)采樣7周，測定其血常規(guī)指標(biāo)，結(jié)果表明，不同個體的血常規(guī)指標(biāo)不同，同一個體不同日齡的血常規(guī)指標(biāo)也存在差異，但大部分指標(biāo)在相對穩(wěn)定的范圍內(nèi)波動。桂科育成豬的RBC和HGB均在70日齡時達(dá)最低值（6.85×10/L和97.1 g/L），顯著低于49、56、63、84和91日齡時的對應(yīng)值；WBC于63日齡達(dá)最低值（13.71×10/L），顯著低于49和84日齡時的對應(yīng)值；MPV在91日齡達(dá)最大值（17.39 fL），顯著高于70和77日齡的對應(yīng)值。這可能與桂科豬群在70-77日齡段進(jìn)行豬瘟加強(qiáng)免疫有關(guān)，但具體原因有待進(jìn)一步探究。

HCT是指一定量的抗凝全血經(jīng)離心沉淀后，其下沉紅細(xì)胞占全血的容積比，是一種間接反映紅細(xì)胞數(shù)量和體積的簡單方法（田鵬鵬等，2017）。合理的HCT可提高機(jī)體內(nèi)外氣體的交換，增強(qiáng)新陳代謝，大多數(shù)疾病會消耗紅細(xì)胞，其具體表現(xiàn)為HCT降低。本研究對桂科育成豬與長白豬、恩施黑豬的血常規(guī)指標(biāo)進(jìn)行比較分析，結(jié)果顯示，桂科育成豬的HCT明顯低于長白豬和恩施黑豬，MCV低于長白豬和恩施黑豬，MCHC高于長白豬但低于恩施黑豬，RDW低于長白豬但高于恩施黑豬，RBC和PLT高于長白豬和恩施黑豬，提示桂科育成豬群呈輕微的缺鐵癥狀。此外，雖然桂科育成豬的MID較長白豬有所偏高，但由于WBC未呈明顯的升高趨勢，故不能確定其存在病毒或細(xì)菌感染。

本研究對桂科育成豬的血常規(guī)指標(biāo)進(jìn)行檢測，其結(jié)果可為桂科豬的免疫健康評估及抗病育種體系評價提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。但下一步還需對桂科豬細(xì)胞因子IFN-y、IL-2、IL-4和TL-10等進(jìn)行檢測，或?qū)Xl基因第14外顯子和第8內(nèi)含子的多態(tài)性進(jìn)行分析，綜合免疫指標(biāo)、抗體效價及分子遺傳標(biāo)記，為桂科豬的商品化生產(chǎn)及疫病防控提供科學(xué)依據(jù)。

4結(jié)論

桂科育成豬在血常規(guī)指標(biāo)方面有一定的獨(dú)特性，發(fā)育至49～91日齡時已具備較穩(wěn)定的免疫系統(tǒng)。