盧少芬+梁潔貞+仇嚴(yán)妹

[摘要] 目的 探討不同制備時(shí)間新鮮冰凍血漿對冷沉淀凝血因子（簡稱冷沉淀）中Ⅷ因子含量（FⅧ）和纖維蛋白原（Fg）含量的影響，以期找到制備冷沉淀凝血因子原料血漿的最佳及最長的制備允許間隔時(shí)間。 方法 以200份的血液樣本作為研究對象，分別于全血采集后6、8、13、18h內(nèi)制備成新鮮冰凍血漿，并標(biāo)識，將四組不同制備時(shí)間段的新鮮冰凍血漿分別制備成冷沉淀凝血因子，檢測其FⅧ活性和Fg含量。 結(jié)果 四組不同制備時(shí)間段的新鮮冰凍血漿制備成冷沉淀凝血因子FⅧ含量活性隨制備時(shí)間延長明顯下降，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），F(xiàn)g含量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；其中6h合格率為96%，8h合格率為94%，13h合格率為86%，均滿足質(zhì)控要求的75%受控要求，而18h內(nèi)制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率只有54%，達(dá)不到冷沉淀凝血因子的質(zhì)量要求，6、8、13h合格率與18h比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 為了保證冷沉淀凝血因子的質(zhì)量及滿足臨床用血需求量，用于制備冷沉淀凝血因子的新鮮冰凍血漿最佳選擇在采集后6～8h內(nèi)，最長不宜超過13h分離并速凍的新鮮冰凍血漿作為原料漿。

[關(guān)鍵詞] 新鮮冰凍血漿；制備時(shí)間；冷沉淀；質(zhì)量影響

[中圖分類號] R943 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）08-247-04

[Abstract] Objective To explore the effect of fresh frozen plasma of different preparation time on the content of factor VⅢ（FⅧ） and fibrinogen （Fg） content in cold coagulation factor.In order to find the best and the longest time interval for the preparation of the raw material of cold coagulation blood coagulation factor. Methods 200 blood samples were selected as the study objects.Fresh frozen plasma after whole blood collection 6h，8h，13h，18h was identified.Fresh frozen plasma prepared in different time periods of the four groups were respectively prepared into cold coagulation factors.FⅧ activity and Fg content were detected. Results The content of activeFⅧ in fresh frozen plasma prepared in different time periods of the four groups decreased significantly with the increase of preparation time，there was significant difference（P<0.05）.There was no statistical significance on Fg content（P>0.05）.The qualified rate of 6h was 96%，the qualified rate of 8h was 94 %，and the qualified rate of 13h was 86%，which could meet the requirement of quality control of 75%.However，the qualified rate of cold coagulation factor isolated from fresh frozen plasma prepared in 18h was only 54%，which could not meet the quality requirement of cold coagulation factor.There were significant differences in 6h，8h，13h and 18h，there was the statistical significance（P<0.05）. Conclusion In order to ensure the quality of blood coagulation factors and meet the demand of clinical blood，the best choice for the preparation of fresh frozen plasma was within 6-8h，the longest should not exceed 13h to separate and froze the fresh frozen plasma as raw material.

[Key words] Fresh frozen plasma；Preparation time；Cold precipitation；Quality influence

冷沉淀凝血因子是用新鮮冰凍血漿（FFP）制備的成分血，主要用于治療先天性缺乏Ⅷ因子（FⅧ）的血友病A，另外還可對因大失血、肝功能障礙等凝血因子減少而導(dǎo)致的出血性疾病進(jìn)行輔助治療[1-2]。由于肇慶市地處山區(qū)，在四會、廣寧、懷集、德慶、封開分別設(shè)立了5個(gè)固定獻(xiàn)血點(diǎn)，路途最遠(yuǎn)的往返需要五、六個(gè)小時(shí)，這在一定程度上影響了血液的制備，另外在采血數(shù)量方面也存在一些難以預(yù)估的影響因素，所以更加不利于新鮮冰凍血漿的制備。本研究通過收集血液采集后6、8、13、18h共4個(gè)時(shí)間段內(nèi)制備新鮮冰凍血漿加工而成的冷沉淀凝血因子樣本各50份，檢測其FⅧ和Fg含量，并進(jìn)行對比分析，以期找到制備冷沉淀凝血因子原料血漿的最佳及最長的制備允許間隔時(shí)間，既可保證冷沉淀凝血因子質(zhì)量符合《全血及成分血質(zhì)量要求GB18469-2012》[3]中的相關(guān)要求，又滿足其在臨床輸注應(yīng)用中的安全性和有效性，還能最大限度開發(fā)利用血液資源，同時(shí)對成分制備工作產(chǎn)生積極的推動(dòng)作用，意義深遠(yuǎn)，其產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益和社會價(jià)值也是可觀的?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

采集2014年7月～2016年9月期間我站符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》的全血（保存液為CPDA-1），并按照不同的采集時(shí)間段對其進(jìn)行分組，分別為6、8、13及18h四個(gè)時(shí)間段，每段制成50份的新鮮冰凍血漿，并制定出相應(yīng)的標(biāo)識，對其進(jìn)行加工，使其成為冷沉淀凝血因子，一共200份樣本。

1.2 試劑與儀器

大容量離心機(jī)（CR7、KR4i）、全自動(dòng)血液成分分離機(jī)（德國LMB）、血凍速凍機(jī)（多美達(dá)MBF-21、天商冰源）、三洋低溫冰箱、血漿解凍箱、恒溫水浴箱、全自動(dòng)血凝分析儀等；FⅧ試劑盒（德國西門子，546585A）、APTT試劑（北京普利生儀器有限公司，143209012）、CaCl2試劑（北京普利生儀器有限公司，20140821C）、纖維蛋白原含量測定試劑盒（北京普利生儀器有限公司，142812011）等，均在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法

1.3.1 新鮮冰凍血漿的制備 采用一次性離心（3800轉(zhuǎn)/min，15min，4±2℃）分離出新鮮冰凍血漿，并按采集后6、8、13、18h內(nèi)制備分別標(biāo)識，放于平板速凍機(jī)，速凍40min，再置于入-18℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 冷沉淀凝血因子的制備 對于冷沉淀凝血因子的制備，采用虹吸法完成，按照《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2015版）[4]中相關(guān)方法進(jìn)行操作，嚴(yán)格控制其容量，使其保持在（40±5）mL左右即可，熱合后需立即將其轉(zhuǎn)移到-50℃的速凍機(jī)中，速凍30min，再將其放置在-18℃低溫冰箱進(jìn)行保存，以備使用。

1.3.3 FⅧ和Fg檢測 將冷沉淀凝血因子置入37℃恒溫水浴箱中，待其融化后，按照質(zhì)管科的SOP《凝血因子Ⅷ促凝活性檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》、《血漿纖維蛋白原檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》《C2000-A全自動(dòng)血凝儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》使用凝固法對FⅧ和Fg進(jìn)行檢測。

1.3.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)[2] 依據(jù)《全血及成分血質(zhì)量要求GB18469-2012》中冷沉淀凝血因子質(zhì)量控制項(xiàng)目和要求：來源于200mL全血：FⅧ≥40IU，F(xiàn)g≥75mg。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組采用不同制備時(shí)間冷沉淀FⅧ、Fg含量比較

四組不同制備時(shí)間段的新鮮冰凍血漿制備成冷沉淀凝血因子FⅧ含量活性隨制備時(shí)間延長明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），F(xiàn)g含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2 各組采后不同制備時(shí)間冷沉淀凝血因子質(zhì)量檢測結(jié)果

采后6h內(nèi)制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率為96%，8h內(nèi)制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率為94%，13h內(nèi)制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率為86%，均滿足質(zhì)控要求的75%受控要求，而18h內(nèi)制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率只有54%，達(dá)不到冷沉淀凝血因子的質(zhì)量要求，6、8、13h合格率與18h比較均存在明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

冷沉淀凝血因子是用新鮮冰凍血漿（FFP）制備的成分血，對于8～18h分離出來的新鮮冰凍血漿所制備的冷沉淀凝血因子是否能達(dá)到質(zhì)量控制項(xiàng)目和要求，尚未有詳細(xì)資料報(bào)道，因此研究新鮮冰凍血漿的制備時(shí)間對冷沉淀凝血因子的質(zhì)量影響有著重要的指導(dǎo)意義[5]。但由于冷沉淀凝血因子中的Ⅷ因子是一種不穩(wěn)定的凝血因子，因其半衰期短，僅8～12h，其活性受獻(xiàn)血者自身凝血因子水平、血液采集過程、制備時(shí)間、制備溫度、制備方法、運(yùn)輸溫度等影響[6]。研究結(jié)果顯示4組不同制備時(shí)間段的新鮮冰凍血冰鎮(zhèn)制備成冷沉淀凝血因子FⅧ含量活性隨制備時(shí)間延長明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），F(xiàn)g含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；四組不同制備時(shí)間段的新鮮冰凍血漿加工而成的冷沉淀凝血因子中6h合格率為96%，8h合格率為94%，13h合格率為86%，均滿足《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2012版）質(zhì)量控制中“75%的抽檢結(jié)果落在質(zhì)量控制指標(biāo)范圍內(nèi)可以為血液采集和制備過程受控”的規(guī)定[7]，而18h內(nèi)制備的新鮮冰凍血漿分離出來的冷沉淀凝血因子合格率只有54%，達(dá)不到冷沉淀凝血因子的質(zhì)量要求，這說明選擇合適的制備時(shí)間段制備新鮮冰凍血漿對冷沉淀凝血因子中Ⅷ因子含量（FⅧ）含量的有較大影響。眾所周知冷沉淀凝血因子的制備經(jīng)歷了全血、新鮮冰漿血漿、冷沉淀凝血因子三個(gè)階段，有些環(huán)節(jié)可控，有些不可控，任何一個(gè)環(huán)節(jié)的誤差都會影響質(zhì)量。我站制備冷沉淀凝血因子主要是采用虹吸法，在虹吸過程中，一部分凝血因子及纖維蛋白容易隨血漿流入空袋，冰渣量很少或基本無冰渣，都會造成冷沉淀凝血因子的Ⅷ因子含量降低，這要求加強(qiáng)工作人員的培訓(xùn)，提高質(zhì)量意識，合理控制好每次放入血漿解凍箱的原料新鮮冰凍血漿袋數(shù)，制備完成后，及時(shí)放入速凍機(jī)迅速凍結(jié)，盡量縮短從新鮮冰凍血漿到冷沉淀在室溫停留的時(shí)間，減少Ⅷ因子損失[8]。

隨著成分輸血理念的推廣和血站成分制備能力的提高，冷沉淀凝血因子的應(yīng)用被越來越多的臨床醫(yī)生掌握，冷沉淀凝血因子在改善凝血方面具有其它血液成分無法替代的重要意義，肇慶地區(qū)冷沉淀凝血因子的臨床使用數(shù)量逐年上升，將來北大醫(yī)療肇慶康復(fù)醫(yī)院以及中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院肇慶醫(yī)院等政府項(xiàng)目的建設(shè)完成，也會加大冷沉淀凝血因子的使用[9]。我站血液全部來源于無償獻(xiàn)血，范圍多為縣、市、區(qū)及街頭等，血液采集后到站時(shí)間往往較長，受原來時(shí)間條件限制不能及時(shí)分離制備新鮮冰凍血漿，大多數(shù)血液只能分離制備冰凍血漿，未能做到一血多用[10]。自2012年頒布新版《全血及成分血質(zhì)量要求GB18469-2012》[11]及第3版《臨床輸血》[12]中，對新鮮冰凍血漿進(jìn)行了重新定義，對之前全血采集后6h（全血保養(yǎng)液為ACD）或8 h（全血保養(yǎng)液為CPD、CPD-1）內(nèi)進(jìn)行了更改，使其變更為6～8h內(nèi)但不超過18h，血漿分離后對其進(jìn)行速凍，使其成為固態(tài)成分血。國外在該方面規(guī)定，對于新鮮冰凍血漿，其制備時(shí)間不可高于18h[13-15]。本研究于2014年向市科技局申報(bào)《新鮮冰凍血漿制備時(shí)間對冷沉淀凝血因子質(zhì)量影響的研究》科研項(xiàng)目，通過兩年的時(shí)間收集血液采集后6、8、13、18h共四個(gè)時(shí)間段內(nèi)制備新鮮冰凍血漿加工而成的冷沉淀凝血因子樣本共200份，檢測其FⅧ和Fg含量，并進(jìn)行對比分析，認(rèn)為用于制備冷沉淀凝血因子的新鮮冰凍血漿最佳選擇在采集后6～8h內(nèi)，最長不宜超過13h分離并速凍的新鮮冰凍血漿作為原料漿，并將研究結(jié)果應(yīng)用于血液成分制備工作當(dāng)中，使轄區(qū)內(nèi)制備冷沉淀凝血因子的原料新鮮冰凍血漿制備量平均每年增加了8175500mL，既滿足臨床輸注的安全性和有效性，又能滿足臨床日益增長的冷沉淀凝血因子需求量。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 鄭望春，葉有玩，王艷春，等.血漿制備時(shí)間和速凍方法對冷沉淀凝血因子質(zhì)量的影響[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，12（10）：734-736.

[2] 楊孝順，安梅，阮光萍，等. 冷沉淀在臨床外科手術(shù)中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志，2005，18（3）：255-257.

[3] 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).全血及成分血質(zhì)量要求GB18469-2012[M].

[4] 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會.血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）[M].

[5] 何紅.延長制備時(shí)間對新鮮冰凍血漿和冷沉淀質(zhì)量的影響[J].血栓與止血學(xué)，2016，23（1）：79-81.

[6] 章懌，邱穎婕，金魏名，等.冷沉淀制備時(shí)間對凝血因子的影響[J].中國輸血雜志，2012，15（s1）：169-170.

[7] 王曉峰，張美萍，劉自安，等.不同溫度、時(shí)間制備新鮮冰凍血漿中各種凝血因子含量研究[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2015，17（2）：128-131.

[8] 李建偉，蒲維薇.冷沉淀制備技術(shù)和時(shí)間對凝血因子的影響探究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2013，14（z1）：326-327.

[9] 劉川橋.不同時(shí)間制備的新鮮冰凍血漿的質(zhì)量觀察[J].中國輸血雜志，2014，27（11）：1172-1173.

[10] 陳皞，李曉榮，林玉蓓，等.病毒滅活冰凍血漿 與新鮮冰凍血漿臨床應(yīng)用價(jià)值的比較[J].海南醫(yī)學(xué)，2012，23（23）：105-106.

11] 李詩敏，黃彥，張穎，等.新鮮冰凍血漿制備時(shí)間對冷沉淀質(zhì)量的影響[J].深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，25（16）：36-37.

[12] 李建華，周忠英，張瑜.2種速凍方式對新鮮冰凍血漿和冷沉淀質(zhì)量的影響比較[J].中國輸血雜志，2015，28（8）：979-980.

[13] 王淑嬋.白細(xì)胞濾過器對新鮮冰凍血漿主要成份及活性的影響[J].河北醫(yī)藥，2015，44（1）：96-98.

[14] 宋春明，顏峰，王巖，等.病毒滅活新鮮冰凍血漿制備前后凝血因子變化研究[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2015，26（5）：25-26.

[15] 陳盛旺，羅慶宗，古全英，等.采后不同時(shí)間分離的血漿所制備的冷沉淀質(zhì)量分析[J].中國輸血雜志，2015，28（6）：708-709.

（收稿日期：2017-02-08）