朱雅萍，宋一民，張紅新，趙衛(wèi)星

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河南 新鄉(xiāng) 453100；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，河南 鄭州 450052)

食管鱗癌組織中鋅α2糖蛋白的表達(dá)及其臨床意義

朱雅萍1，宋一民2，張紅新2，趙衛(wèi)星1

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河南 新鄉(xiāng) 453100；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，河南 鄭州 450052)

目的 探討食管鱗癌組織中ZAG蛋白的表達(dá)及其臨床意義。方法 采用免疫組化法檢測85例食管鱗癌組織和對應(yīng)的正常食管黏膜組織中ZAG蛋白的表達(dá)，并分析ZAG蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者預(yù)后之間的關(guān)系。結(jié)果 ZAG蛋白表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，其在食管鱗癌組織中表達(dá)的陽性率為38.8%(33/85)，顯著低于正常食管黏膜組織的90.6%(77/85)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=49.867，P<0.001)。ZAG蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者的組織學(xué)分級、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切(P<0.05)，但與患者的性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。ZAG蛋白高表達(dá)的食管鱗癌患者生存時間顯著長于ZAG低表達(dá)的食管鱗癌患者(P<0.05)。結(jié)論 ZAG在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮極其重要的作用，并可能與食管鱗癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，因而可能成為食管鱗癌預(yù)后的分子標(biāo)記。

鋅α2糖蛋白；食管鱗癌；預(yù)后

鋅α2糖蛋白(zinc α2-glycoprotein，ZAG)基因定位于人類染色體的7q22.1，由4個外顯子和3個內(nèi)含子構(gòu)成，ZAG的基因序列包含18個氨基酸的疏水信號肽和278個氨基酸的成熟蛋白序列[1]。ZAG通過結(jié)合至β3腎上腺素受體，以GTP依賴的方式激活腺苷酸環(huán)化酶從而刺激小鼠附睪脂肪細(xì)胞脂質(zhì)的分解，由于ZAG優(yōu)先調(diào)控脂肪組織中脂肪酸的降解，因而被稱為脂質(zhì)動員因子[2]。ZAG與多種不同的腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，如在乳腺癌組織中發(fā)現(xiàn)ZAG mRNA和蛋白的表達(dá)與乳腺癌患者的組織學(xué)分級密切相關(guān)[3]。此外，部分研究表明ZAG是一種前列腺癌潛在的血清學(xué)標(biāo)志，在腫瘤增殖的早期階段表達(dá)上升[4]。這些研究提示ZAG在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。

目前，ZAG在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其分子機制尚不清楚，為了闡明ZAG在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，本研究采用免疫組化技術(shù)檢測食管鱗癌組織和正常食管黏膜組織中ZAG蛋白的表達(dá)，分析其表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)和預(yù)后之間的關(guān)系，初步闡明ZAG在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。為以ZAG為靶點的食管鱗癌的分子靶向治療奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料 85例食管鱗癌標(biāo)本和其對應(yīng)的距癌組織邊緣4 cm以外的正常食管黏膜組織均來自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科。所有患者術(shù)前均未接受過化療、放療及其他相關(guān)治療，臨床資料完整，選取標(biāo)本也獲得了患者本人同意，并由2名以上經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)生診斷證實其組織學(xué)類型為食管鱗癌。所有標(biāo)本均經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%中性多聚甲醛固定，常規(guī)脫水透明，采用石蠟包埋，連續(xù)切片備用。85例食管鱗癌標(biāo)本中，男49例，女36例；年齡34歲～79歲，中位年齡62歲，年齡≥60歲者53例，年齡<60歲者32例；臨床分期根據(jù)2009年第7版國際抗癌聯(lián)盟食管癌的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進行評定，Ⅰ～Ⅱ期38例，Ⅲ～Ⅳ期47例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者59例。

1.2 主要試劑 鼠抗人單克隆ZAG抗體購自美國Santa Cruz公司；S-P免疫組化通用試劑盒、SA-AP顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化步驟 染色步驟按照免疫組化S-P法試劑盒說明進行，高壓抗原修復(fù)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。采用已知陽性表達(dá)的組織切片作陽性對照，用0.01 mol·L-1PBS代替一抗作陰性對照。ZAG的一抗采用1100的稀釋。

1.4 免疫組化結(jié)果判斷 ZAG的染色的陽性信號呈棕黃色，主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，通過高倍鏡觀察隨機選取的5個視野，對每個視野中染色的細(xì)胞數(shù)進行計數(shù)，并且不少于200個，同時根據(jù)染色深淺聯(lián)合判定，最終染色結(jié)果的判定方式采用如下標(biāo)準(zhǔn)進行：染色深淺的判定標(biāo)準(zhǔn)如下：無顯色(0分)，呈淺黃色(1分)，呈現(xiàn)棕黃色(2分)，呈現(xiàn)棕褐色(3分)。陽性細(xì)胞數(shù)的判定標(biāo)準(zhǔn)如下：陽性細(xì)胞數(shù)的比率<5%(0分)，5%～<25%(1分)，25%～<50%(2分)，50%～<75%(3分)，≥75%(4分)。最后將染色深淺和陽性細(xì)胞數(shù)的百分比相乘，這一結(jié)果即是每張切片染色的最終分值，具體的判定標(biāo)準(zhǔn)為：0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，≥4分為陽性(++)，后兩者均記為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0處理實驗數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示，比較采用χ2檢驗；生存情況采用Kaplan-Meier法及l(fā)og rank檢驗分析，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 ZAG蛋白在食管鱗癌組織和正常食管黏膜組織中的表達(dá) ZAG蛋白表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，ZAG蛋白表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，其在食管鱗癌組織中表達(dá)的陽性率為38.8%(33/85)，顯著低于正常食管黏膜組織的90.6%(77/85)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=49.867，P<0.001)。提示ZAG可能在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮抑癌基因的作用。見圖1、表1。

圖1 ZAG蛋白在食管鱗癌(A)和正常食管黏膜(B)組織中的表達(dá)(S-P，×200)

組織類型n陽性陰性χ2P食管鱗癌85335249.867<0.001正常食管黏膜85778

2.2 ZAG蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系 ZAG蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者的組織學(xué)分級、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切(P<0.05)，但與患者的性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。提示ZAG蛋白表達(dá)可能在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展和進展中發(fā)揮極其重要的作用。見表2。

表2 ZAG蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

2.3 ZAG蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者預(yù)后之間的關(guān)系 ZAG蛋白高表達(dá)的食管鱗癌患者生存時間顯著長于ZAG低表達(dá)的食管鱗癌患者(P<0.05)。見圖2。

圖2 ZAG蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者預(yù)后之間的關(guān)系

3 討論

癌基因和抑癌基因可能在不同腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮不同的作用，因而一種腫瘤的癌基因可能是另外一種腫瘤的抑癌基因[5]，但其真正的作用機制尚不太明確。ZAG在多種不同的腫瘤中表達(dá)模式存在差異，因而在不同的腫瘤中發(fā)揮的作用不盡相同，一些發(fā)揮癌基因的作用，一些扮演著抑癌基因的作用。研究[6]發(fā)現(xiàn)，ZAG在宮頸鱗癌和腺癌組織中的表達(dá)水平顯著高于正常組織。在分析口腔鱗癌樣本中發(fā)現(xiàn)，ZAG在正常組織中表達(dá)水平顯著高于腫瘤組織，且在高分化腫瘤中顯著高于低分化腫瘤[7]。免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化后，前列腺組織中ZAG的表達(dá)顯著下降[8]。Huang等[9]通過實時熒光定量PCR檢測20例成對的新鮮肝癌組織中ZAG mRNA的表達(dá)水平，并分析246例肝癌患者的臨床資料，并采用免疫組化法檢測這些組織中ZAG蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果表明，ZAG在80%(16/20)的肝癌組織中的表達(dá)水平顯著低于相應(yīng)的正常組織(P<0.001)，并發(fā)現(xiàn)ZAG的表達(dá)水平與血清中甲胎蛋白的水平、肝壞死和腫瘤分化密切相關(guān)，高表達(dá)ZAG的肝癌患者存活時間更長，提示其與肝癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。Delort 等采用2株人類乳腺癌細(xì)胞系(MCF-7和MDA-MB-231)和1株纖維囊性的乳腺細(xì)胞系(MCF-10a)分析ZAG在乳腺癌組織中的功能，結(jié)果表明，重組的ZAG促進乳腺癌細(xì)胞的增殖，但顯著抑制MCF-10a細(xì)胞的增殖，并發(fā)現(xiàn)ZAG能調(diào)控與凋亡相關(guān)的基因和蛋白的表達(dá)[10]。因此ZAG可能在不同的腫瘤中發(fā)揮不同的作用，具體的功能還有待進一步探討。本研究發(fā)現(xiàn)，85例食管鱗癌組織中有33例ZAG蛋白呈現(xiàn)陽性表達(dá)，其陽性表達(dá)率為38.8%，而85例正常食管黏膜組織中有77例呈現(xiàn)陽性表達(dá)，其陽性表達(dá)率高達(dá)90.6%，這些結(jié)果提示ZAG可能與食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系極其密切，可能在食管鱗癌中發(fā)揮抑癌基因的功能。

研究表明，大量的臨床病理學(xué)參數(shù)，如臨床分期、組織學(xué)分級以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能成為臨床上食管鱗癌患者的極為重要的預(yù)后因子。本研究也發(fā)現(xiàn)，ZAG蛋白的表達(dá)與食管鱗癌患者的性別和年齡無關(guān)，但與組織學(xué)分級、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示這些臨床病理學(xué)參數(shù)可能對于ZAG功能的判定發(fā)揮重要的作用。ZAG高表達(dá)的食管鱗癌患者比低表達(dá)或無表達(dá)的食管鱗癌患者預(yù)后更好，存活時間更長，這與在肝癌中的研究結(jié)果一致[9]。這些研究表明，ZAG可能成為食管鱗癌患者極其有用的預(yù)后分子標(biāo)記，但確切的功能有待進一步研究。

總之，我們的研究結(jié)果表明，食管鱗癌組織中ZAG蛋白呈現(xiàn)低表達(dá)，其表達(dá)水平與食管鱗癌患者的組織學(xué)分級、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并且可能成為食管鱗癌患者有用的預(yù)后因子，結(jié)果提示ZAG可能在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮極其重要的作用，為深入研究其在食管鱗癌中的功能奠定基礎(chǔ)，為食管癌的基因治療的臨床研究提供基礎(chǔ)。

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Expression of Zinc α2-glycoprotein in the Esophageal Squamous Cell Carcinoma

ZHU Yaping1,SONG Yimin2,ZHANG Hongxin2,ZHAO Weixing1

(1.DepartmentofPathology,XinxiangMedicalCollege,Xinxiang453003,China; 2.DepartmentofPathology,theFirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)

Objective To study the expression and clinical significant of zinc α2-glycoprotein (ZAG) in human esophageal squamous cell carcinoma tissue.Methods Immunohistochemistry method was to detect the protein of ZAG in the 85 cases of esophageal squamous cell carcinoma and adjacent normal esophageal epithelial tissues.The relation of ZAG expression with survival time was analyzed.Results ZAG protein expression was localized in cytoplasm,and its expression in the esophageal squamous cell carcinoma tissues [38.8% (33/85)] was significantly lower than that in the normal esophageal epithelial tissues [90.6%(77/85)],and there was statistical difference (χ2=49.867,P<0.001).The expression of ZAG protein was correlated with histological differentiation,TNM staging and lymph node metastasis (P<0.05),but was not associated with gender and age of the patients with esophageal squamous cell carcinoma.The patients with high ZAG level had longer survival time than those with low ZAG level (P<0.05).Conclusion ZAG plays a pivotal role in the occurrence and development of esophageal squamous cell carcinoma,and may be related to the prognosis of patients with esophageal squamous cell carcinoma closely.ZAG may be molecular marker for the prognosis of the patients with esophageal squamous cell carcinoma.

zinc α2-glycoprotein; esophageal squamous cell carcinoma; prognosis

河南省基礎(chǔ)研究計劃項目(編號：142300413203)

朱雅萍(1980-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤的病理研究。E-mail：1226330153@qq.com

趙衛(wèi)星(1958-)，男，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事消化道腫瘤的病理研究與臨床診斷工作。E-mail：zwx9@xxmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1673-5412.2017.03.005

R735.1；R730.23

A

1673-5412(2017)03-0198-04

2016-01-23)