實時熒光PCR檢測非洲豬瘟病毒

（四川省動物疫病預防控制中心，四川 成都 610041）

實時熒光PCR檢測非洲豬瘟病毒

張 睿,裴超信,張 毅,李 春,邢 坤,李 麗,周莉媛,邵 靚

（四川省動物疫病預防控制中心，四川 成都 610041）

非洲豬瘟（ASF）目前已對全球多個發(fā)病國家的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，是我國明確規(guī)定須重點防范的外來動物疫病之一，其對我國的威脅也與日俱增。本實驗采用北京世紀元亨非洲豬瘟實時熒光PCR試劑盒，重點對來源于四川省阿壩、廣元、巴中、達州、廣安等邊境高危地區(qū)的規(guī)模場及散養(yǎng)戶的豬組織病料進行了檢測，結果表明97份組織樣本均為ASFV抗原陰性，四川境內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)ASFV感染。

非洲豬瘟；實時熒光PCR；病毒監(jiān)測

非洲豬瘟（African swine fever，ASF）又稱非洲豬瘟疫、疣豬病，是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染豬引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。臨床癥狀以高熱、高死亡率、內(nèi)臟器官廣泛性出血以及呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)功能改變?yōu)橹饕卣鱗1]。該病是世界動物衛(wèi)生組織的法定報告動物疫?。∣IE，2004），我國農(nóng)業(yè)部將其列為一類動物疫病，是《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》中明確規(guī)定須重點防范的外來動物疫病之一[2]，全世界尚缺乏有效疫苗進行免疫預防，目前對于該病面臨著巨大的防控壓力。

近年來，ASF疫情從非洲、歐洲逐步擴散至亞洲地區(qū)，并在俄羅斯等鄰國地區(qū)扎根蔓延，對疫情國家的養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重危害，同時對東歐、中亞以及中國等國家和地區(qū)也構成了直接威脅[3]。中國豬飼養(yǎng)量幾乎占世界50%，豬產(chǎn)品消費呈現(xiàn)快速增長之勢，中國與非洲國家日益頻繁的貿(mào)易往來、中國對非援助等使中國與ASF流行國家接觸日益頻繁，特別是近期俄羅斯ASF疫情的持續(xù)散播和流行，這些因素使國外ASF疫情跨境傳入我國的風險在不斷加大[4]。一旦侵入我國，將會給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來極大的危害，并對養(yǎng)豬相關產(chǎn)業(yè)造成巨大沖擊。須采用多種檢測方法持續(xù)進行ASFV監(jiān)測，嚴防該病傳入我國。

表1 豬組織病料采集情況

1 材料與方法

1.1 材料

材料來源于四川省阿壩、廣元、巴中、達州、廣安的規(guī)模場及散養(yǎng)戶的豬組織病料，共計97份見表1。

檢測試劑：北京世紀元亨非洲豬瘟病毒實時熒光檢測試劑盒，批號20160310。

1.2 檢測方法

參照北京世紀元亨非洲豬瘟病毒實時熒光檢測試劑盒說明書進行。采用吸附柱法提取RNA進行實驗。

2 結果判定

2.1 結果有效性

陽性對照Ct值≤30，陰性對照Ct值≥37，實驗成立。

2.2 結果

結果見表2，表明實驗中所有被試樣品均為ASFV抗原陰性。

3 討論

對于非洲豬瘟，世界范圍尚未研制出有效疫苗，在非免疫狀態(tài)下，使用實時熒光PCR進行非洲豬瘟病毒檢測，是目前靈敏度及準確度最高的方法。本研究選取97份臨床及病理特征與非洲豬瘟相似的病料進行檢測，首次在四川省境內(nèi)對非洲豬瘟病毒病原進行本底調(diào)查，未發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟陽性的病例。

非洲豬瘟屬于外來病，邊境地區(qū)、生豬養(yǎng)殖貿(mào)易活躍區(qū)是重點防范地區(qū)。本研究針對高危的5個邊境市（州）開展調(diào)查，與鄧飛等[5]于2015年開展的非洲豬瘟抗體監(jiān)測選取地區(qū)一致，進一步印證了四川省尚未發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟感染的現(xiàn)狀。下一步研究中，取樣地區(qū)將進一步擴大，增加邊境市（州）數(shù)量，并加入四川省內(nèi)地的貿(mào)易活躍區(qū)，提高調(diào)查的合理性。

目前，尚無非洲豬瘟我國境內(nèi)發(fā)生的報道，但國際及周邊國家疫情形勢嚴峻，本研究在四川省開展非洲豬瘟的流行病學調(diào)查，探索了實時熒光PCR病原檢測與ELISA抗體檢測相結合、高危邊境地區(qū)抽樣的監(jiān)測模式，為嚴防非洲豬瘟入省提供了重要的技術儲備，也希望能為該病的國境防疫提供一些參考。

表2 陰陽性對照及樣品

[1] 王華,王君瑋,徐天剛,等.非洲豬瘟流行病學和診斷方法的研究進展[J].中國獸醫(yī)科學,2008,06﹕544-548.

[2] 李洪利,曹金山,王君瑋,等.非洲豬瘟病毒實時熒光定量PCR檢測方法的建立及應用[J].中國畜牧獸醫(yī),2012年第39卷第6期﹕37-40.

[3] 朱迪國,宋建德.全球重大動物疫情綜述(2013年1-12月)[R].青島﹕中國動物衛(wèi)生與流行病學中心,2014.

[4] 翁善鋼.非洲豬瘟在世界各地流行的風險分析[J].肉類工業(yè),2012,375(7)﹕40-42.

[5] 鄧飛.阻斷ELISA法檢測非洲豬瘟抗體[B].四川畜牧獸醫(yī)，2016,06﹕22-23.

2016-12-29）

定點監(jiān)測與流調(diào)子項目；國家動物疫病防治與監(jiān)測項目

張睿，男，出生年月1990.03，籍貫：四川成都，本科，助理獸醫(yī)師，主要從事動物疫病監(jiān)測及實驗室管理工作。E-mail：258745943@qq.com。