潘開(kāi)瑞，崔 琳，張振巍，劉衛(wèi)紅

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000；2.解放軍第一五五醫(yī)院，河南 開(kāi)封 475000)

·實(shí)驗(yàn)研究·

遠(yuǎn)志酊對(duì)小鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)及氧化應(yīng)激作用的研究*

潘開(kāi)瑞1，崔 琳1，張振巍2，劉衛(wèi)紅1

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000；2.解放軍第一五五醫(yī)院，河南 開(kāi)封 475000)

目的：通過(guò)觀察遠(yuǎn)志酊對(duì)小鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)及氧化應(yīng)激作用，探討其抗抑郁作用機(jī)制。方法：取小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，鹽酸氟西汀組，遠(yuǎn)志酊低、中、高劑量組5組，每組10只。遠(yuǎn)志酊低、中、高劑量組依次10，20，40 μL/g，鹽酸氟西汀組給藥劑量15 mg/g，正常對(duì)照組給予等容積生理鹽水(20 μL/g)。連續(xù)灌胃給藥7 d，在末次給藥30 min后進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫懸尾實(shí)驗(yàn)；采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定小鼠5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。結(jié)果：①與鹽酸氟西汀組對(duì)比，遠(yuǎn)志酊高劑量組小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，遠(yuǎn)志酊中、低劑量組則差別明顯(P<0.05)。②與正常對(duì)照組對(duì)比，鹽酸氟西汀組和遠(yuǎn)志酊高、中劑量組SOD活性升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；遠(yuǎn)志酊低劑量組SOD含量低于正常對(duì)照組，說(shuō)明該劑量對(duì)抑郁小鼠腦組織SOD活性作用稍弱。與正常對(duì)照組對(duì)比，各藥物組MDA含量下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③與正常對(duì)照組對(duì)比，除遠(yuǎn)志酊低劑量組外，鹽酸氟西汀組、高劑量組和中劑量組小鼠腦組織中NE、5-HT、DA含量均有顯著性差別(P<0.05)；與鹽酸氟西汀組對(duì)比，高劑量組小鼠腦組織NE、5-HT含量差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，DA則明顯偏低(P<0.05)；中、低劑量組小鼠腦組織NE、5-HT、DA 3個(gè)指標(biāo)含量與鹽酸氟西汀組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：遠(yuǎn)志酊有抗抑郁作用，且與劑量呈依賴關(guān)系；其抗抑郁作用機(jī)制可能與增加腦組織內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量有關(guān)，可校正腦組織自由基系統(tǒng)失衡。

遠(yuǎn)志酊/藥效學(xué)；抗抑郁；單胺類神經(jīng)遞質(zhì)；抗氧化

遠(yuǎn)志為臨床常用中藥，為遠(yuǎn)志科(Polygalaceae)遠(yuǎn)志屬(Polygala)植物遠(yuǎn)志(Polygalatenuifolia)或卵葉遠(yuǎn)志(PolygalasibiricaL.)的干燥根。遠(yuǎn)志酊為遠(yuǎn)志流浸膏經(jīng)加工制成的酊劑，而遠(yuǎn)志流浸膏為600 mL/L乙醇滲濾提取濃縮而得，流浸膏和酊劑兩個(gè)品種均被2010版《中國(guó)藥典》一部中成藥目錄所收載，其臨床適應(yīng)證為祛痰藥。筆者在臨床使用中發(fā)現(xiàn)，含有遠(yuǎn)志酊的復(fù)方制劑有抗抑郁作用。經(jīng)文獻(xiàn)查閱，有關(guān)遠(yuǎn)志醇提物的抗抑郁作用確有報(bào)道[1,2]，并有研究顯示遠(yuǎn)志蔗糖酯類、寡糖酯類、皂苷類等組分50%醇提物有明顯的抗抑郁作用[3]?！吨袊?guó)藥典》中遠(yuǎn)志酊采用600 mL/L乙醇提取、濃縮制成流浸膏，再用600 mL/L乙醇稀釋而成。為進(jìn)一步考察遠(yuǎn)志酊劑的抗抑郁作用。本研究采用抑郁模型對(duì)其抗抑郁藥效進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期為進(jìn)一步考察其抗抑郁活性成分提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

昆明種小鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量17～22 g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(豫)2013-0001。

1.2 藥品、試劑與儀器

遠(yuǎn)志酊，廣州白云山星群(藥業(yè))股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào)KS40017；鹽酸氟西汀，上海中西制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)140826。試劑均為分析純。多巴胺(DA)檢測(cè)試劑盒(批號(hào)20140721)、5-羥色胺(5-HT)檢測(cè)試劑盒(批號(hào)20140205)、去甲腎上腺素(NE)檢測(cè)試劑盒(批號(hào)20140205)、超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)試劑盒(批號(hào)20131216)、丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒(批號(hào)20140217)，均為美國(guó)R&D公司產(chǎn)品。梅特勒-托利多AB135-S雙量程電子天平，產(chǎn)地瑞典；AB10200ADT超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；HH恒溫水浴鍋，江蘇金壇市中大儀器廠產(chǎn)品。

1.3 動(dòng)物分組與給藥

參照文獻(xiàn)方法[4]。將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，鹽酸氟西汀組，遠(yuǎn)志酊低、中、高劑量組5組，每組10只。給藥劑量由人臨床常規(guī)用量換算成小鼠用量：遠(yuǎn)志酊低、中、高劑量組依次10，20，40 μL/g，鹽酸氟西汀組15 mg/g，正常對(duì)照組給予等容積生理鹽水(20 μL/g)。連續(xù)灌胃7 d，1 d 1次。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

末次給藥30 min后，將小鼠放入水深10 cm的水桶(直徑30 cm、高50 cm)中，水溫(25±0.5) ℃。小鼠在其中游泳6 min。記錄后4 min小鼠不動(dòng)的時(shí)間。小鼠在水中停止掙扎、漂浮狀態(tài)或僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)時(shí)的時(shí)長(zhǎng)為小鼠的不動(dòng)時(shí)間。

1.4.2 強(qiáng)迫懸尾實(shí)驗(yàn)

強(qiáng)迫游泳結(jié)束后，小鼠適應(yīng)性間歇30 min，進(jìn)行強(qiáng)迫懸尾實(shí)驗(yàn)。將小鼠尾尖部約1 cm用膠布貼于懸尾箱(30 cm×30 cm×25 cm)支架上，使小鼠呈倒掛狀態(tài)，頭部離箱底約5 cm，懸掛時(shí)間為6 min。記錄后4 min內(nèi)懸尾累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。小鼠停止掙扎或無(wú)任何活動(dòng)時(shí)的時(shí)長(zhǎng)為小鼠的不動(dòng)時(shí)間。

1.4.3 腦組織中5-HT、DA、NE、MDA、SOD含量

強(qiáng)迫懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即處死小鼠，在冰臺(tái)上迅速剝離全腦，以生理鹽水洗去表面血漬，精密稱定質(zhì)量，按3 mL/g加入生理鹽水，勻漿制成腦組織勻漿液，高速離心后，取上清液進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，分別測(cè)定腦組織中的5-HT、DA、NE、MDA、SOD的含量，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)對(duì)比

與正常對(duì)照組對(duì)比，各藥物組強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間均縮短，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與鹽酸氟西汀組對(duì)比，遠(yuǎn)志酊高劑量組小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而中、低劑量組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

組 別動(dòng)物數(shù)強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間/s懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間/s正常對(duì)照組10108.06±6.58118.78±7.59鹽酸氟西汀組1063.15±5.73*47.75±3.87*遠(yuǎn)志酊低劑量組1087.70±5.67#99.78±2.54*#遠(yuǎn)志酊中劑量組1078.62±4.01*#71.63±5.36*#遠(yuǎn)志酊高劑量組1066.86±4.82*52.17±5.24*

注：與正常對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05；與鹽酸氟西汀組對(duì)比，#P<0.05。

2.2 各組小鼠MDA、SOD對(duì)比

與正常對(duì)照組對(duì)比，鹽酸氟西汀組和遠(yuǎn)志酊高、中劑量組SOD活性升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而遠(yuǎn)志酊低劑量組SOD含量低于正常對(duì)照組，說(shuō)明該劑量對(duì)抑郁小鼠腦組織SOD活性作用稍弱。與正常對(duì)照組對(duì)比，各藥物組MDA含量下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。遠(yuǎn)志酊3個(gè)劑量組呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，中、高劑量能改善腦組織SOD活性，糾正體內(nèi)清除自由基損害的系統(tǒng)平衡。見(jiàn)表2。

組 別動(dòng)物數(shù)SOD/(U·mg-1)MDA/(μmol·g-1)正常對(duì)照組1049.87±5.9060.17±5.84鹽酸氟西汀組1074.50±4.25*25.87±2.26*遠(yuǎn)志酊低劑量組1045.54±4.18#48.95±3.34*#遠(yuǎn)志酊中劑量組1058.64±4.24*#36.91±1.94*#遠(yuǎn)志酊高劑量組1069.21±0.72*#31.73±3.33*#

注：與正常對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05；與鹽酸氟西汀組對(duì)比，#P<0.05。

2.3 各組小鼠NE、5-HT、DA對(duì)比

與正常對(duì)照組對(duì)比，除遠(yuǎn)志酊低劑量組外，鹽酸氟西汀組、高劑量組和中劑量組小鼠腦組織中NE、5-HT、DA含量差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與鹽酸氟西汀組對(duì)比，遠(yuǎn)志酊高劑量組小鼠腦組織NE、5-HT含量差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，DA則明顯降低(P<0.05)；中劑量組、低劑量組小鼠腦組織NE、5-HT、DA含量較之差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

組 別動(dòng)物數(shù)NE/(μg·L-1)5-HT/(μg·L-1)DA/(μg·L-1)正常對(duì)照組1060.57±1.7975.67±3.9290.49±5.39鹽酸氟西汀組1089.72±4.63*113.89±6.00*121.75±4.30*遠(yuǎn)志酊低劑量組1064.69±2.62#82.46±6.94#97.83±2.52*#遠(yuǎn)志酊中劑量組1071.62±2.30*#91.59±1.47*#109.28±0.99*#遠(yuǎn)志酊高劑量組1084.19±6.12*102.08±1.89*114.38±3.95*#

注：與正常對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05；與鹽酸氟西汀組對(duì)比，#P<0.05。

3 討 論

遠(yuǎn)志的主要化學(xué)成分為三萜皂苷類，此外還含有少量的糖酯類、生物堿類、黃酮類、香豆素、木脂素類等。遠(yuǎn)志酊為遠(yuǎn)志藥材的醇提物，主要組分為皂苷類，其次有糖酯類、黃酮類等，其中糖酯類成分可影響抑郁大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基因表達(dá)。如孫艷等[5]發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志醇提物在給予2.8～5.6 g/kg劑量范圍內(nèi)可通過(guò)提高慢性應(yīng)激大鼠海馬各區(qū)BDNF和TrkBmRNA的表達(dá)并誘導(dǎo)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，以促進(jìn)慢性應(yīng)激、HPA軸亢進(jìn)等所造成損失神經(jīng)元的修復(fù)，改善應(yīng)激抑郁大鼠的狀態(tài)，發(fā)揮抗抑郁作用。近幾年遠(yuǎn)志的藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)：遠(yuǎn)志醇提物的藥理學(xué)活性強(qiáng)度與皂苷類成分相當(dāng)，而且糖酯類成分在遠(yuǎn)志藥材中也占有較大比例；推測(cè)該類成分可能是抗抑郁作用的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[6]。張璐等[7]采用PK-PD-DI驗(yàn)證方法對(duì)遠(yuǎn)志3種提取物(水提物、醇提物、醇提富集物)進(jìn)行抗抑郁作用對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志的水提物的抗抑郁作用最強(qiáng)，分析可能是水提物中化學(xué)成分種類最多，指標(biāo)成分的含量比醇提及其富集物高，所產(chǎn)生的藥效活性強(qiáng)度最大。

抑郁癥的病因可能與腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如5-HT、DA、NE等不足有關(guān)，但作用機(jī)制目前尚未明了。臨床常用的抗抑郁藥物主要是通過(guò)抑制5-HT的再攝取，從而增加突觸后膜部位的神經(jīng)遞質(zhì)濃度而發(fā)揮作用。鹽酸氟西汀為選擇性5-HT再攝取抑制劑，能抑制突觸前膜對(duì)5-HT釋放后的再攝取，提高突觸間隙的濃度而發(fā)揮抗抑郁效果。

強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)從不同角度為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抗抑郁作用研究提供了行為學(xué)指標(biāo)[8]。小鼠在強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間長(zhǎng)短表現(xiàn)為藥物對(duì)抗抑郁的強(qiáng)度大小。兩種實(shí)驗(yàn)條件中小鼠表現(xiàn)出來(lái)的不同狀態(tài)，反映了一種被稱之為“行為絕望和扭曲”或“對(duì)強(qiáng)壓環(huán)境適應(yīng)的失敗”狀態(tài)，這兩種行為絕望模型被廣泛應(yīng)用于篩選和觀察抗抑郁藥物。自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)動(dòng)活性和焦慮情緒的經(jīng)典方法，水平運(yùn)動(dòng)反應(yīng)了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)活性，垂直運(yùn)動(dòng)反應(yīng)了動(dòng)物的探索活性[9]。

實(shí)驗(yàn)中小鼠受外界環(huán)境刺激而應(yīng)激性使機(jī)體產(chǎn)生大量自由基，而過(guò)量的自由基會(huì)造成體內(nèi)抗氧化體系的失衡，產(chǎn)生神經(jīng)毒素。SOD是機(jī)體阻止自由基產(chǎn)生的重要防御酶，其活性的降低是體內(nèi)自由基防御系統(tǒng)失衡的關(guān)鍵因素。MDA作為脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，為自由基損傷的標(biāo)志。因此本研究選擇SOD、MDA作為檢測(cè)指標(biāo)。抑郁癥患者的異常情緒均與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如5-HT、DA、NE有關(guān)，故本研究選擇5-HT、DA、NE作為檢測(cè)指標(biāo)。

本研究結(jié)果顯示：從行為學(xué)實(shí)驗(yàn)角度來(lái)看，遠(yuǎn)志酊3個(gè)劑量組均可不同程度地縮短小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間，高劑量組與鹽酸氟西汀組作用強(qiáng)度相當(dāng)，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而中、低劑量組較之差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從腦組織MDA、SOD表達(dá)水平角度來(lái)看，遠(yuǎn)志酊高、中劑量組可明顯升高小鼠腦組織SOD表達(dá)、降低MDA表達(dá)，提示遠(yuǎn)志酊可調(diào)整腦組織中MDA、SOD表達(dá)水平，以維持MDA-SOD系統(tǒng)動(dòng)態(tài)平衡。從腦組織神經(jīng)遞質(zhì)NE、5-HT、DA的表達(dá)水平來(lái)看，遠(yuǎn)志酊可不同程度地回升小鼠腦組織NE、5-HT、DA的表達(dá)水平，提示遠(yuǎn)志酊抗抑郁作用可能與調(diào)整腦神經(jīng)遞質(zhì)含量有關(guān)，并且該作用強(qiáng)度與遠(yuǎn)志酊劑量呈現(xiàn)正相關(guān)趨勢(shì)。

綜上所述，遠(yuǎn)志酊可通過(guò)調(diào)節(jié)腦組織MDA-SOD氧化平衡系統(tǒng)和腦神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)水平等多種作用途徑提高5-HT神經(jīng)元的興奮性從而達(dá)到抗抑郁效果[10]。

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2017)05-0069-04

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.05.30

全軍后勤科研計(jì)劃(CJN12J005)

2017-01-16；

2017-04-11