邢青斌，向雪松*，王 俊，高 超，王 竹

(1中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與健康所，北京 100050；2 深圳市慢性病防治中心，廣東深圳 518020)

生脈散對(duì)于緩解小鼠體力疲勞的作用研究

邢青斌1，向雪松1*，王 俊2*，高 超1，王 竹1

(1中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與健康所，北京 100050；2深圳市慢性病防治中心，廣東深圳 518020)

目的：研究生脈散對(duì)于緩解體力疲勞的保健效果。方法：將生脈散片劑打散后加蒸餾水配置成灌胃用的糊劑，按低、中、高劑量分組，灌胃給予小鼠生脈散30d后，按負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)的方法制備動(dòng)物模型，根據(jù)負(fù)重游泳時(shí)間、血清中尿素水平、肝糖原含量及血乳酸測(cè)定結(jié)果來(lái)評(píng)價(jià)生脈散的抗疲勞效果。結(jié)果：各劑量組間的小鼠體重?zé)o明顯差異，低劑量組小鼠的各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，在中高劑量的情況下，除血清尿素未觀(guān)察到顯著改變外，實(shí)驗(yàn)組的其他抗疲勞作用指標(biāo)均有明顯改善，且高劑量組的改善情況比中劑量組更為明顯。結(jié)論：對(duì)于接受游泳實(shí)驗(yàn)的小鼠，服用中高劑量的生脈散可延長(zhǎng)負(fù)重游泳時(shí)間、提高肝糖原儲(chǔ)備量并減少血液中乳酸積累，從而發(fā)揮緩解體力疲勞的作用。

生脈散；緩解體力疲勞；小鼠

在古代，生脈散既被用于搶救危重病人，也用作補(bǔ)藥以調(diào)理虛弱的病人[1-4]。現(xiàn)代研究表明，生脈散中的人參、五味子均有一定的緩解體力疲勞的功效[5-11]，而麥冬則有調(diào)節(jié)免疫和提高耐缺氧能力的功能[12-21]。本文對(duì)生脈散的低、中、高3個(gè)劑量對(duì)緩解小鼠運(yùn)動(dòng)后體力疲勞的影響進(jìn)行研究和評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 受試樣品

生脈散片劑，由紅參提取物、五味子提取物、麥冬提取物、微晶纖維素、硬脂酸鎂及薄膜包衣劑(羥丙甲纖維素、三乙酸甘油酯、滑石粉、檸檬黃鋁色淀、亮藍(lán)鋁色淀、二氧化鈦)構(gòu)成，其主要成分及含量為粗多糖2.0%、總皂苷2.5%、五味子醇甲0.1%。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)方法按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)中緩解體力疲勞功能檢驗(yàn)方法進(jìn)行。

選用北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供的SPF級(jí)健康雄性BalB/c小鼠144只，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證編號(hào)為SCXK(京)2014-0004。分實(shí)驗(yàn)1負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)2血清尿素氮測(cè)定、實(shí)驗(yàn)3肝糖原測(cè)定和血乳酸測(cè)定。每個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)置4組，每組12只小鼠。使用中國(guó)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生所清潔級(jí)動(dòng)物房，許可證號(hào)：SYXK(京)2014-0043。各組小鼠均給予正常基礎(chǔ)飼料，自由進(jìn)食和飲水。

1.3 劑量設(shè)置與受試物制備

按60kg體重計(jì)算，受試物推薦劑量為每人每日50mg/kg。實(shí)驗(yàn)中受試物劑量設(shè)為人體推薦量的5、10、30倍，即每日0.25、0.5、1.5g/kg·BW(低、中、高劑量組)。樣品以蒸餾水配置，經(jīng)口每日1次灌胃給予小鼠受試物。對(duì)照組以蒸餾水代替受試物。小鼠灌胃體積均為10mL/kg·BW，按標(biāo)準(zhǔn)方法灌胃30d后測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.4 儀器與試劑

儀器：天平1(1/10)、天平2(1/1 000)、離心機(jī)、沸水浴、振蕩器、50cm×50cm×40cm動(dòng)物游泳箱、721分光光度計(jì)、手持式乳酸儀、普通鉛皮、讀秒計(jì)時(shí)器、取血用毛細(xì)吸管、手動(dòng)加樣器、(2、5、10mL)吸量管、帶塞刻度試管、帶塞離心管、溫度計(jì)。

試劑：血乳酸測(cè)定液、血細(xì)胞破膜液、5%三氯醋酸溶液(用蒸餾水配置)(TCA)、5mmol/L乳酸標(biāo)準(zhǔn)液、緩沖液、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(100mg/dL)、95%乙醇、72%H2SO4溶液(用蒸餾水配置)、蒽酮試劑(含0.005%蒽酮及1%硫脲，72%H2SO4溶液配置)。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn) 末次給予小鼠受試物30min后，鼠尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮，置于動(dòng)物游泳箱中游泳(水溫25±0.5℃、水深約30cm)。用計(jì)時(shí)器記錄小鼠自游泳開(kāi)始至死亡時(shí)間，作為小鼠負(fù)重游泳時(shí)間(s)。

游泳時(shí)間為計(jì)量資料，若實(shí)驗(yàn)組游泳時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組游泳時(shí)間，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可判定該受試物有延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

1.5.2 血清尿素含量測(cè)定 末次給予小鼠受試物30min 后，在恒溫水中不負(fù)重持續(xù)游泳(水溫30±0.5℃)90min，休息60min后即刻摘眼球取血0.5mL。于4℃干燥離心管中靜置3h后5 000r/min離心3min，吸取血清，使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清尿素氮含量。記錄所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若實(shí)驗(yàn)組血清尿素氮含量顯著低于對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可判定該受試物有減少疲勞小鼠血清尿素氮生成的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

1.5.3 肝糖原測(cè)定(蒽酮法) 末次給予小鼠受試物30min 后，頸椎脫臼處死小鼠，解剖取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗干凈后，小心用濾紙吸干肝臟表面水分，精確稱(chēng)取肝組織200mg，用刻度吸管加入4mL 的TCA，上機(jī)勻漿1min，再將肝勻漿倒入離心管中，以3 000r/min 離心15min后，吸取上清液500μL，再加入4mL 95%的乙醇，充分混勻至兩種液體間無(wú)明顯分層。置于冰箱中4℃過(guò)夜，次日以3 000r/min 離心15min。小心棄去上清液，并倒置試管晾干約10min，再加入1mL蒸餾水溶解糖原，加水時(shí)注意需將管壁上附著的糖原洗下。如試管管底的糖原不立即溶解，可振蕩試管直到管底的糖原完全溶解。取100μL蒸餾水加入另一試管中作為試劑空白。各試管中加10 mL蒽酮試劑，并煮沸15min，取出并冷卻至室溫后在721分光光度計(jì)中以620nm波長(zhǎng)比色測(cè)定，按式(1)計(jì)算：

(1)

式(1)中，DU為樣品管吸光度、DS為標(biāo)準(zhǔn)管吸光度、G為肝組織樣品重量(g)、 C為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度、V1為提取液體積(mL)、V2為測(cè)定液體積(mL)、V3為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液體積(mL)。

計(jì)算所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，若實(shí)驗(yàn)組肝糖原含量明顯高于對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可判定該受試物對(duì)小鼠肝糖原儲(chǔ)備有促進(jìn)作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

1.5.4 血乳酸測(cè)定 末次給小鼠受試物30min后，經(jīng)眼眶采血20μL，加入40μL破膜液中，振蕩混勻。然后使小鼠在溫度為30±0.5℃的水中游泳10min后停止，立即采血20μL，加入40μL破膜液中，振蕩均勻。休息20min后，再采血20μL，加入40μL破膜液中，振蕩均勻。用手持式乳酸儀測(cè)定破膜后樣品中的乳酸值，所得數(shù)值乘以系數(shù)3即為血乳酸值。

血乳酸變化值用式(2)表示：

血乳酸曲線(xiàn)下面積=1/2×(安靜血乳酸值+運(yùn)動(dòng)后0min的血乳酸值)×10+1/2×(運(yùn)動(dòng)后0min的血乳酸值+運(yùn)動(dòng)后20min的血乳酸值)×20

(2)

若實(shí)驗(yàn)組血乳酸曲線(xiàn)下面積顯著低于對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可判定該受試物有減少小鼠運(yùn)動(dòng)后血乳酸生成量的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

1.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

用SPSS軟件對(duì)各實(shí)驗(yàn)所得的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿(mǎn)足“方差齊”條件的數(shù)據(jù)資料用單因素方差分析方法和多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的結(jié)果，進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿(mǎn)足“正態(tài)方差齊”要求后，用轉(zhuǎn)換所得到的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理。

1.7 結(jié)果分析

若負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，同時(shí)血乳酸生成量、血清尿素氮含量、肝糖原儲(chǔ)備量3項(xiàng)生化指標(biāo)中任2項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，即可判定該受試物具有緩解體力疲勞的功能。

2 結(jié)果與分析

2.1 生脈散對(duì)小鼠體重的影響

由表1可知，小鼠的初始體重的組間差異不明顯。各劑量組的小鼠終體重與對(duì)照組相比較，差異均無(wú)顯著性，即生脈散對(duì)小鼠的體重?zé)o顯著影響。

2.2 生脈散對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

由表2可見(jiàn)，中劑量組與高劑量組負(fù)重游泳時(shí)間高于對(duì)照組，且差異有顯著性(P<0.05)。低劑量組與對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)。

表1 生脈散對(duì)小鼠體重的影響

表2 生脈散對(duì)疲勞小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響±SD)

2.3 生脈散對(duì)疲勞小鼠血清尿素的影響

由表3可見(jiàn)，各劑量組血清尿素差異無(wú)顯著性(P>0.05)。

表3 生脈散對(duì)疲勞小鼠血清尿素的影響±SD)

2.4 生脈散對(duì)小鼠肝糖原儲(chǔ)備量的影響

由表4可見(jiàn)，中、高劑量組肝糖原儲(chǔ)備量顯著高于對(duì)照組，低劑量組肝糖原與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性。

表4 生脈散對(duì)小鼠肝糖原儲(chǔ)備量的影響±SD)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

2.5 生脈散對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠血乳酸變化的影響

由表5～6可見(jiàn)，中、高劑量組血乳酸曲線(xiàn)下面積與對(duì)照組比較，差異有顯著性，0.25、0.5、1.5g/kg·BW劑量組運(yùn)動(dòng)休息20min后血乳酸值與對(duì)照組比較，差異有顯著性。各劑量組安靜時(shí)和運(yùn)動(dòng)后立即的血乳酸值與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性。

表5 生脈散對(duì)小鼠血乳酸值的影響

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

表6 生脈散對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠血乳酸曲線(xiàn)下面積的影響±SD)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

3 結(jié)論

在本項(xiàng)試驗(yàn)中，3個(gè)劑量組中，小鼠負(fù)重游泳時(shí)間只有中劑量組及高劑量組得到陽(yáng)性結(jié)果。3個(gè)劑量組中，肝糖原儲(chǔ)備量只有中劑量組及高劑量組得到陽(yáng)性結(jié)果。3個(gè)劑量組中，血乳酸曲線(xiàn)下面積僅中劑量組及高劑量組得到陽(yáng)性結(jié)果。3個(gè)劑量組的小鼠血清尿素氮含量均有增加，但3個(gè)劑量組與對(duì)照組相比均沒(méi)有顯著差異，此項(xiàng)指標(biāo)3個(gè)劑量組均為陰性結(jié)果。

綜上，中高劑量的生脈散有緩解小鼠體力疲勞的作用，但低劑量的生脈散沒(méi)有緩解小鼠體力疲勞的作用。

4 討論

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各劑量組的劑量差異均對(duì)體重?zé)o影響。在中高劑量的情況下，生脈散可收獲較好的抗疲勞效果，同時(shí)也從側(cè)面證明低劑量的生脈散對(duì)機(jī)體的滋養(yǎng)及保護(hù)效果不理想，要達(dá)到理想效果需要較大的用量。但由于其在中高劑量時(shí)表現(xiàn)出了良好的緩解體力疲勞的作用，應(yīng)考慮更深入地發(fā)掘生脈散作為保健品或特殊膳食組分的更多功效。此外在類(lèi)似研究中[22-28]，也發(fā)現(xiàn)含有生脈散單劑成分(五味子、人參或麥冬)或生脈散全組分的補(bǔ)劑可使小鼠負(fù)重游泳時(shí)間隨劑量增長(zhǎng)而延長(zhǎng)的現(xiàn)象，其中部分研究還發(fā)現(xiàn)了這些組分可使小鼠肝糖原含量增加[23，26-28]，血乳酸曲線(xiàn)下面積減小[23，26-28]及血清尿素水平下降[23，26-27]。由此可見(jiàn)，生脈散具有一定的緩解體力疲勞功能?！?/p>

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(責(zé)任編輯 李婷婷)

Effect of Shengmaisan on Alleviating Physical Fatigue in Mice

XING Qing-bin1，XIANG Xue-song1，WANG Jun2，GAO Chao1，WANG Zhu1

(1National Institute for Nutrition and Health，Chinese Center for Disease Control and Prevention，Beijing 100050,China；2Shenzhen Center for Chronic Disease Control，Shenzhen 518020,China)

ObjectiveTo prove the effect of Shengmaisan on alleviating physical fatigue.MethodThe pill of Shengmaisan was smashed and mixed with distilled water，and it would be the paste in intragastric administration. The mice were separated in four groups and given the paste，respectively blank，low，moderate and high does. Then the subjects were made to be the fatigue models with force swimming test after 30 days intragastric administration. The results of exhaustive swimming time，serum urea nitrogen，hepatic glycogen and blood lactic acid would be considered as the index to evaluate the effect of alleviating physical fatigue of Shengmaisan.ResultThere was no significant change of body weight among different groups. A significant improvement was observed in the results of exhaustive swimming time，hepatic glycogen and blood lactic acid in moderate and high does groups，except the result of serum urea nitrogen. Moreover，the improvement in high does group was more significant than the moderate group.ConclusionTo the mice accepting exhaustive swimming test，taking Shengmaisan in moderate or high does could extend the exhaustive swimming time，increase hepatic glycogen and decrease the accumulation of blood lactic acid. Therefore，the effect of alleviating physical fatigue of Shengmaisan was proved in moderate and high does.

Shengmaisan；alleviating physical fatigue；mice

深圳市“三名工程”項(xiàng)目“國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委微量元素重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”；國(guó)家“十二五”科技攻關(guān)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2012BAD33B01)。

邢青斌(1988— )，男，碩士，研究實(shí)習(xí)員，研究方向：食物營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)。

*共同通信作者：向雪松(1981— )，男，博士，副研究員，研究方向：食物營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)技術(shù)、食物營(yíng)養(yǎng)成分分析技術(shù)、食物成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)；王俊(1978— )，男，副主任技師，研究方向：分子營(yíng)養(yǎng)學(xué)(蛋白組學(xué)、代謝組學(xué))。