歐建偉，劉增再，譚 丹，薛 爽，寧華杰

（1.湖南省寧鄉(xiāng)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南 寧鄉(xiāng) 410600；2.湖南省長(zhǎng)沙市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南 長(zhǎng)沙 410013）

試驗(yàn)研究

幾種牛羊布魯氏菌病抗體檢測(cè)方法的比較

歐建偉1，劉增再2，譚 丹2，薛 爽2，寧華杰2

（1.湖南省寧鄉(xiāng)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南 寧鄉(xiāng) 410600；2.湖南省長(zhǎng)沙市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南 長(zhǎng)沙 410013）

應(yīng)用虎紅平板凝集試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)、間接 ELISA、競(jìng)爭(zhēng) ELISA 和膠體金法對(duì)牛羊血清樣品進(jìn)行布魯氏菌病抗體檢測(cè)，對(duì)不同的檢測(cè)方法進(jìn)行比較，以建立和優(yōu)化動(dòng)物布病簡(jiǎn)便快速的檢疫診斷方法。結(jié)果顯示：針對(duì)牛血清，膠體金法結(jié)果陽性率最高，虎紅平板凝集試驗(yàn)與間接 ELISA 結(jié)果陽性率相似，試管凝集試驗(yàn)與競(jìng)爭(zhēng) ELISA 結(jié)果陽性率一致，表明膠體金法和虎紅平板凝集試驗(yàn)的敏感性較好，而試管凝集試驗(yàn)與競(jìng)爭(zhēng) ELISA 特異性較好。針對(duì)羊血清，試管凝集試驗(yàn)、競(jìng)爭(zhēng) ELISA 和膠體金法的敏感性和特異性好于虎紅平板凝集試驗(yàn)和間接 ELISA。

布魯氏菌??；檢測(cè)方法；符合率；比較

布魯氏菌?。˙rucellosis，以下簡(jiǎn)稱布?。┦怯刹剪斒暇鷮偌?xì)菌引起的一種慢性人畜共患傳染病，主要侵害生殖系統(tǒng)，以母畜流產(chǎn)和公畜睪丸炎為主要特征，其中人感染布病主要是接觸病羊、病牛及其排泄物而引起。近來來，畜間和人間布病數(shù)量逐漸增多，嚴(yán)重影響家畜的生產(chǎn)性能、動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量安全和公共衛(wèi)生安全。本試驗(yàn)通過應(yīng)用虎紅平板凝集試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)、間接 ELISA、競(jìng)爭(zhēng) ELISA 和膠體金法，對(duì)經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)的感染地區(qū)牛、羊血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，以建立和優(yōu)化動(dòng)物布病簡(jiǎn)便快速的檢疫診斷方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 血清樣品

從長(zhǎng)沙市經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)的感染地區(qū)牛血清 107 份，羊血清 45 份，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 檢測(cè)試劑

虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原、試管凝集試驗(yàn)抗原、布病陽性血清和陰性血清由青島易邦生物工程有限公司提供。動(dòng)物布病間接 ELISA 和競(jìng)爭(zhēng) ELISA抗體檢測(cè)試劑盒由哈爾濱平河生物技術(shù)有限公司提供，布魯氏菌病抗體金標(biāo)快速檢測(cè)卡（競(jìng)爭(zhēng)法）由浙江迪恩生物科技股份有限公司提供。所有檢測(cè)試劑均4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)方法和結(jié)果判定

虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)按照動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)（GB/T18646-2002）中虎紅平板凝集試驗(yàn)和試驗(yàn)?zāi)囼?yàn)方法進(jìn)行操作與判定[1]。間接 ELISA、競(jìng)爭(zhēng) ELISA 和膠體金檢測(cè)試紙條檢測(cè)方法均按照試劑盒說明進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測(cè)方法牛羊布魯氏菌病抗體檢測(cè)結(jié)果

用虎紅平板凝集試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)、間接ELISA、競(jìng)爭(zhēng) ELISA 和膠體金檢測(cè)試紙條對(duì) 107 份牛血清和 45份羊血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果詳見表1。

表1 不同檢測(cè)方法布魯氏菌病抗體檢測(cè)結(jié)果比較

2.2 不同檢測(cè)方法的符合率比較結(jié)果

以試管凝集試驗(yàn)為參照，不同檢測(cè)方法的符合率比較，詳見表 2。

表2 試驗(yàn)?zāi)囼?yàn)和其他四種方法檢測(cè)牛血清樣本的符合率比較

針對(duì)牛血清，虎紅平板凝集試驗(yàn)、間接 ELISA法、競(jìng)爭(zhēng) ELISA 法和膠體金法與試管凝集試驗(yàn)的符合率分別為 98.13%、99.07%、100%和 97.20%。

表3 試驗(yàn)?zāi)囼?yàn)和其他四種方法檢測(cè)羊血清樣本的符合率比較

針對(duì)羊血清，虎紅平板凝集試驗(yàn)、間接 ELISA法、競(jìng)爭(zhēng) ELISA 法和膠體金法與試管凝集試驗(yàn)的符合率分別為 97.78%、97.78%、100%和 100%。

3 討論與分析

根據(jù)《布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范》和《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)（GB/T18646-2002）》[1]中關(guān)于動(dòng)物布魯氏菌病的檢測(cè)和判定方法，試管凝集試驗(yàn)陽性的樣品即可判定為陽性樣品。因此，試驗(yàn)中符合率的計(jì)算均以試管凝集試驗(yàn)方法檢測(cè)結(jié)果比較的。

針對(duì)牛血清，虎紅平板凝集試驗(yàn)和膠體金法的敏感性較高，陽性率較高；虎紅平板凝集試驗(yàn)與間接 ELISA 結(jié)果陽性率相似；而試管凝集試驗(yàn)與競(jìng)爭(zhēng) ELISA 的敏感性比上述三種方法稍差，但特異性較好。在實(shí)際應(yīng)用中，虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)的檢測(cè)成本相對(duì)較低，但試管凝集試驗(yàn)操作比較復(fù)雜，檢測(cè)的工作效率不高，不適用于大批量樣品的快速檢測(cè)。膠體金試紙條、競(jìng)爭(zhēng) ELISA 和間接 ELISA 檢測(cè)成本相對(duì)較高，操作快捷，檢測(cè)的效率較高，適用于大批量樣品的檢測(cè)。

針對(duì)羊血清，試管凝集試驗(yàn)、競(jìng)爭(zhēng) ELISA 和膠體金法的敏感性和特異性好于虎紅平板凝集試驗(yàn)和間接 ELISA。在實(shí)際應(yīng)用中，試管凝集試驗(yàn)操作比較復(fù)雜，不適用于大批量樣品的快速檢測(cè)。競(jìng)爭(zhēng)ELISA 和膠體金法操作簡(jiǎn)便快速，但檢測(cè)成本較高。

因此，牛羊布魯氏菌病抗體的檢測(cè)方法具有不同的適用范圍，并且每種方法都各有利弊。在實(shí)踐操作中，因根據(jù)工作的需要來確定采用哪種方法。對(duì)牛、羊群體進(jìn)行普查的時(shí)候，可以用虎紅平板凝集試驗(yàn)和膠體金法進(jìn)行初篩，篩選出的樣品樣品在用競(jìng)爭(zhēng) ELISA 試驗(yàn)?zāi)囼?yàn)進(jìn)行確診。在開展牛羊布魯氏菌病凈化的過程中，應(yīng)將上述幾種檢測(cè)方法有效結(jié)合，及早確診樣品群體，對(duì)陽性群體進(jìn)行撲殺和無害化處理，有效防控布魯氏菌病的傳播[2-3]。

[1] 農(nóng)業(yè)部. 動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù):GB/T 18646-2002[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2002.

[2]郝璐，戴曉光，申捷，等.幾種布魯氏菌病檢測(cè)方法的比較[J].中國奶牛，2014，(15)，23-26.

[3]齊景文，依穎新，周艷紅，等.牛羊布魯氏菌病四種血清學(xué)檢測(cè)方法比對(duì)分析[J].中國動(dòng)物檢疫，2015，32(4)：57-59.

S851.34

A

1006-4907（2017）03-0035-02

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.03.016

2017-04-20

長(zhǎng)沙市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技資金專項(xiàng)重點(diǎn)項(xiàng)目（k1401005-21）。

歐建偉（1970～），男，湖南寧鄉(xiāng)人，助理獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防控工作，867403386@qq.com。

寧華杰，317660608@qq.com。