西藏尼木山羊自然感染東畢吸蟲(chóng)沉積蟲(chóng)卵分布與病理情況調(diào)查

石 斌，劉建枝*，朱傳剛，劉金明，夏晨陽(yáng)，李 浩，陸 珂，唐文強(qiáng)，邊 吉，索朗曲珍，白瑪珠莎，次 珍

(1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏 拉薩 850009；2.中國(guó)農(nóng)科院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241；3.西藏拉薩市尼木縣農(nóng)牧局獸醫(yī)站，西藏 拉薩 851300；4.西藏拉薩市當(dāng)雄縣當(dāng)曲卡鎮(zhèn)獸防所，西藏 拉薩 851500；5.西藏拉薩市當(dāng)雄縣公塘鄉(xiāng)獸防所，西藏 拉薩 851500)

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西藏尼木山羊自然感染東畢吸蟲(chóng)沉積蟲(chóng)卵分布與病理情況調(diào)查

石 斌1，劉建枝1*，朱傳剛2*，劉金明2，夏晨陽(yáng)1，李 浩2，陸 珂2，唐文強(qiáng)1，邊 吉3，索朗曲珍4，白瑪珠莎5，次 珍5

(1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏 拉薩 850009；2.中國(guó)農(nóng)科院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241；3.西藏拉薩市尼木縣農(nóng)牧局獸醫(yī)站，西藏 拉薩 851300；4.西藏拉薩市當(dāng)雄縣當(dāng)曲卡鎮(zhèn)獸防所，西藏 拉薩 851500；5.西藏拉薩市當(dāng)雄縣公塘鄉(xiāng)獸防所，西藏 拉薩 851500)

【目的】研究西藏尼木縣自然感染東畢吸蟲(chóng)山羊，蟲(chóng)卵在臟器中的分布與病理變化情況?！痉椒ā拷馄首匀环拍恋臇|畢吸蟲(chóng)陽(yáng)性山羊，采集臟器(十二指腸、小腸上段、小腸中段、小腸下段、盲腸、結(jié)腸、直腸)顯微鏡下蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)并觀察病理變化?！窘Y(jié)果】山羊自然感染東畢吸蟲(chóng)數(shù)量為1435±231.5，在臟器中，小腸中段的EPG最高，其次為盲腸和十二指腸，東畢吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵在各臟器中的分布百分比是：十二指腸(3.50 %)、小腸上段(12.57 %)、小腸中段(56.41 %)、小腸下段(0.52 %)、盲腸(18.83 %)、結(jié)腸(0.00 %)、直腸(0.01 %)、肝臟(8.16 %)、脾臟(0.00 %)，小腸中段沉積的蟲(chóng)卵數(shù)與其他各組織相比差異極顯著(P<0.01)。小腸部分沉積蟲(chóng)卵數(shù)(73.00 %)明顯高于大腸部分的蟲(chóng)卵沉積數(shù)(18.84 %)，差異極顯著(P<0.01)。病理組織切片觀察，發(fā)現(xiàn)小腸中段有大量蟲(chóng)卵肉芽結(jié)節(jié)，小腸粘膜發(fā)生炎癥和輕度壞死?！窘Y(jié)論】山羊感染東畢吸蟲(chóng)后不同的臟器沉積蟲(chóng)卵的密度和數(shù)量不同，蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)與病理切片觀察結(jié)果相關(guān)。

西藏；山羊；東畢吸蟲(chóng)；蟲(chóng)卵分布；病理切片

【研究意義】東畢吸蟲(chóng)病是由東畢屬(Orientobilharzia)的幾種吸蟲(chóng)寄生于牛羊等哺乳動(dòng)物的門(mén)靜脈系統(tǒng)和腸系膜靜脈內(nèi)引起的一種寄生蟲(chóng)病。成蟲(chóng)、幼蟲(chóng)以及蟲(chóng)卵都可以對(duì)宿主產(chǎn)生一系列的損傷，嚴(yán)重時(shí)還可引起牛羊的大批死亡，嚴(yán)重威脅畜牧業(yè)的健康發(fā)展，同時(shí)，東畢吸蟲(chóng)尾蚴還能引起人的尾蚴性皮炎，對(duì)疫區(qū)周?chē)畹娜巳荷眢w健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅，是一種嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲(chóng)病[1]。該病呈世界性分布，印度、哈薩克斯坦、俄羅斯和法國(guó)等國(guó)都有發(fā)生[2]，在我國(guó)，東畢吸蟲(chóng)分布十分廣泛，全國(guó)20多個(gè)省、市、自治區(qū)有此病發(fā)生，東北、內(nèi)蒙、西北、西南等地尤為嚴(yán)重[3]。【前人研究進(jìn)展】目前，對(duì)東畢吸蟲(chóng)的研究主要集中于病原形態(tài)及分子生物學(xué)和流行病學(xué)研究，崔海，譚詩(shī)文[4-5]等就東畢吸蟲(chóng)蟲(chóng)體造成的大體病理變化做過(guò)研究，區(qū)內(nèi)劉建枝等[6]報(bào)導(dǎo)尼木縣發(fā)現(xiàn)有東畢吸蟲(chóng)，但尚未有對(duì)蟲(chóng)卵危害的病理報(bào)導(dǎo)。【本研究的切入點(diǎn)】東畢吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵是東畢吸蟲(chóng)病傳播的首要條件，也是造成宿主機(jī)能損害的重要因素。東畢吸蟲(chóng)與日本血吸蟲(chóng)同屬分體科，在日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵引起的病變最嚴(yán)重，對(duì)宿主產(chǎn)生的危害最大[7]?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本文通過(guò)研究蟲(chóng)卵在山羊臟器中的分布情況和組織病變，有助于明確東畢吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵對(duì)宿主主要臟器危害和病理變化情況。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:對(duì)西藏尼木縣自然放牧的山羊進(jìn)行糞孵檢測(cè)，購(gòu)買(mǎi)東畢吸蟲(chóng)陽(yáng)性山羊3只，約14月齡，體重在8～10 kg左右。

1.2 方法

1.2.1 蟲(chóng)體收集 解剖山羊，腹主動(dòng)脈灌注沖蟲(chóng)，在肝門(mén)處用200目篩網(wǎng)收集蟲(chóng)體，計(jì)數(shù)。

1.2.2 臟器采集和處理 剝離臟器表面的筋膜和網(wǎng)膜以及脂肪血管等，用生理鹽水沖出腸內(nèi)容物后將肝臟、小腸、大腸和脾臟各臟器分開(kāi)；小腸部分將十二指腸分離，空腸和回腸從前到后均勻分作3段；盲腸、結(jié)腸、直腸分別分離，各段分別稱(chēng)重后分別于對(duì)應(yīng)的平皿中用載玻片刮取全部腸粘膜；肝臟和脾臟分別稱(chēng)重后從背緣、中間、腹緣3個(gè)位置取樣，取樣后分別合并稱(chēng)重。

1.2.3 蟲(chóng)卵計(jì)數(shù) 將腸粘膜裝進(jìn)50 mL離心管中，加蒸餾水定容至20 mL，再加入10 %NaOH 20 mL,于恒溫水浴鍋內(nèi)45 ℃水浴30 min，期間多次震蕩搖勻，3500 r/min離心10 min，棄上清，沉淀加蒸餾水定容，搖勻后取100 μl鏡檢，計(jì)算蟲(chóng)卵數(shù)量，每樣計(jì)數(shù)3次。肝臟和脾臟樣品加入定量蒸餾水后勻漿機(jī)攪碎，取20 mL加入10 %NaOH 20 mL,處理和取樣鏡檢計(jì)數(shù)蟲(chóng)卵步驟同前。根據(jù)鏡檢蟲(chóng)卵數(shù)，計(jì)算各器官組織含蟲(chóng)卵總量、克組織蟲(chóng)卵量(EPG)和蟲(chóng)卵數(shù)量百分比。

1.2.4 組織切片制備和鏡檢 十二指腸、小腸上段、中段、下段，盲腸、結(jié)腸、直腸、肝臟和脾臟分別取樣，修整，10 %甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)HE染色和Masson染色，鏡檢、拍照，于顯微鏡下觀察并拍照，記錄組織病理形態(tài)學(xué)變化及膠原的分布。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.5軟件One-Way ANOVA進(jìn)行方差分析和LSD法多重比較，結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，檢驗(yàn)誤差為5 %和1 %。

2 結(jié)果與分析

2.1 蟲(chóng)體計(jì)數(shù)

腹主動(dòng)脈灌注沖蟲(chóng)法檢測(cè)自然感染東畢吸蟲(chóng)的尼木山羊載蟲(chóng)量，腸系膜靜脈和肝門(mén)靜脈共沖出1435±231.46條東畢吸蟲(chóng)，其中載蟲(chóng)量最多的有1680條蟲(chóng)。

2.2 蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)

蟲(chóng)卵在臟器中的分布以小腸部位最多(表1)，其中小腸中段蟲(chóng)卵數(shù)量占總蟲(chóng)卵數(shù)的比重最大，達(dá)到56.41 %；其次是盲腸(18.83 %)和小腸上段(12.57 %)，十二指腸蟲(chóng)卵數(shù)量較少(3.50 %)，小腸下段、結(jié)腸及直腸蟲(chóng)卵很少，分別為0.52 %、0和0.01 %；肝臟蟲(chóng)卵數(shù)量較少，占比(8.16 %)；脾臟未發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)卵(0 %)。小腸部分沉積蟲(chóng)卵數(shù)(73.00 %)明顯高于大腸部分的蟲(chóng)卵沉積數(shù)(18.84 %)。臟器中小腸中段沉積蟲(chóng)卵最多，每克組織的蟲(chóng)卵量也最高，其次是盲腸和小腸上段及肝臟，十二指腸雖然蟲(chóng)卵總數(shù)占比不高，但EPG值卻是盲腸的2.24倍，低于小腸中段的EPG值。

2.3 病理切片觀察

蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)與病理切片觀察結(jié)果相關(guān)，組織沉積蟲(chóng)卵數(shù)越多病理?yè)p害越嚴(yán)重。組織切片HE染色，結(jié)果顯示，細(xì)胞核清楚，藍(lán)紫色，蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)中心呈紅色，結(jié)節(jié)邊緣明顯的紅色環(huán)狀圈。Masson染色顯示蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)中心呈藍(lán)色，蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)周?chē)拭黠@的藍(lán)色環(huán)狀圈。蟲(chóng)卵沉積導(dǎo)致蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)周?chē)M織增生，膠原纖維化明顯(圖版I，封三)。

表1 各組織東畢吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵沉積數(shù)及差異性比較

注：同一列中右上角標(biāo)有不同大寫(xiě)字母的數(shù)據(jù)之間差異極其顯著，同一列中右上角標(biāo)有相同大寫(xiě)字母的數(shù)據(jù)之間差異不顯著(P>0.05)。 Note：The difference between data with the different capital letters is very significant(P<0.01), with the same capital letters show not significant (P>0.05).

小腸中部發(fā)現(xiàn)的蟲(chóng)卵肉芽結(jié)節(jié)最多，主要分布于黏膜和黏膜下層，對(duì)該段組織損害最為嚴(yán)重，蟲(chóng)卵周?chē)仔约?xì)胞聚集，局灶性壞死，黏膜層蟲(chóng)卵沉積處柱狀細(xì)胞脫落，黏膜形態(tài)與無(wú)蟲(chóng)卵部位比較變化明顯，腸絨毛較無(wú)蟲(chóng)卵沉積處減少。十二指腸發(fā)現(xiàn)大量的蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)，肉芽組織增生明顯，蟲(chóng)卵沉積處組織纖維化明顯，部分腸粘膜上皮細(xì)胞壞死脫落。小腸上段發(fā)現(xiàn)的蟲(chóng)卵較十二指腸少，病理?yè)p害也次之。小腸下段發(fā)現(xiàn)少量沉積蟲(chóng)卵，管壁結(jié)構(gòu)基本正常，壞死不明顯，黏膜未發(fā)現(xiàn)明顯變化。盲腸沉積蟲(chóng)卵較多，腸粘膜損害嚴(yán)重。結(jié)腸和直腸結(jié)構(gòu)正常，未發(fā)現(xiàn)沉積蟲(chóng)卵；肝臟發(fā)現(xiàn)少量蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)，形似結(jié)核性肉芽腫，結(jié)節(jié)周?chē)醒仔约?xì)胞聚集，但未產(chǎn)生明顯壞死，肝小葉輪廓較完整，肝板清晰，肝竇內(nèi)無(wú)明顯淤血，門(mén)管區(qū)正常。脾臟切片顯示基本構(gòu)造正常，未發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)卵沉積。

3 討 論

東畢吸蟲(chóng)的成蟲(chóng)主要寄生于動(dòng)物的門(mén)靜脈系統(tǒng)和腸系膜靜脈，并于血管內(nèi)產(chǎn)卵，蟲(chóng)卵隨血液循環(huán)沉積于動(dòng)物各組織器官。本次實(shí)驗(yàn)首先對(duì)自然感染東畢吸蟲(chóng)山羊的感染強(qiáng)度進(jìn)行了調(diào)查，采用解剖后腹主動(dòng)脈灌注沖蟲(chóng)法將山羊體內(nèi)東畢吸蟲(chóng)全部沖出，蟲(chóng)體完整，無(wú)破損。檢查腸系膜等處血管，無(wú)蟲(chóng)體殘留，是東畢吸蟲(chóng)最佳收集方法。大量的蟲(chóng)體寄生，也顯示當(dāng)?shù)氐母腥緲O其嚴(yán)重，這和當(dāng)?shù)氐淖匀画h(huán)境一致。

山羊體內(nèi)東畢吸蟲(chóng)的蟲(chóng)卵分布具有該蟲(chóng)種的特點(diǎn)。山羊臟器蟲(chóng)卵調(diào)查發(fā)現(xiàn)，以小腸中段沉積蟲(chóng)卵最多，每克組織的蟲(chóng)卵量也最高，其次是盲腸和小腸上段及肝臟，十二指腸雖然蟲(chóng)卵總數(shù)占比不高，但EPG值卻是盲腸的2.24倍，只低于小腸中段的EPG值。許瑞[8]等報(bào)道日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵在BLBA/c鼠各組織中的分布中肝臟中的沉積蟲(chóng)卵最多(59.64 %)，其次是盲結(jié)腸(17.48 %)，而小腸部位沉積蟲(chóng)卵相對(duì)較少。趙登云[9]等對(duì)感染日本血吸蟲(chóng)的實(shí)驗(yàn)兔的調(diào)查發(fā)現(xiàn)感染42 d時(shí)，沉積蟲(chóng)卵主要在肝臟；感染60 d時(shí)，肝臟的蟲(chóng)卵量依然最高，直腸的蟲(chóng)卵數(shù)有所上升，但無(wú)論是42 d還是60 d的實(shí)驗(yàn)兔小腸的蟲(chóng)卵總是最少的。由此看來(lái)，雖然東畢吸蟲(chóng)與日本血吸蟲(chóng)同屬分體科，生活史基本相似，感染方式也一致[10]，但蟲(chóng)卵在動(dòng)物體內(nèi)的分布差異卻較大，產(chǎn)生這一差異的主要原因可能在蟲(chóng)種的不同，包括蟲(chóng)種的寄生部位和蟲(chóng)卵的特征；其次，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物類(lèi)型及感染時(shí)間等可能對(duì)蟲(chóng)卵的分布有一定關(guān)系，這需要進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

東畢吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵也是引起宿主病理反應(yīng)的主要致病因子。調(diào)查發(fā)現(xiàn)山羊各部位蟲(chóng)卵EPG值和病理切片觀察的病理變化結(jié)果一致，EPG越高，病理?yè)p壞也越嚴(yán)重。東畢吸蟲(chóng)感染損害嚴(yán)重的部位主要集中于十二指腸至小腸下段上部及盲腸，這些部位也是蟲(chóng)卵集中的部位；東畢吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵引起腸壁病變的組織結(jié)構(gòu)也基本一致，即圍繞蟲(chóng)卵出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和膠原增多。而日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵引起的腸壁損傷部位主要是在盲腸、結(jié)腸和直腸，兩者都和各自的蟲(chóng)卵分布相關(guān)[8-9]，兩者差異顯著。此外，東畢吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵在肝臟的EPG并不高，病理切片也顯示肝臟肝小葉結(jié)構(gòu)基本清晰、完整，肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，肝細(xì)胞大小正常，無(wú)變性和壞死，僅在蟲(chóng)卵部位有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，這和日本血吸蟲(chóng)感染引起的病理?yè)p壞明顯不同。無(wú)論是小鼠還是實(shí)驗(yàn)兔[8-9]，日本血吸蟲(chóng)感染都表現(xiàn)出肝竇充血，急性蟲(chóng)卵肉芽腫形成，蟲(chóng)卵肉芽腫周?chē)鞣N炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，尤其在肝小葉間靜脈內(nèi)有大量蟲(chóng)卵充斥而引起血管明顯充血擴(kuò)大，部分肝細(xì)胞變性、壞死[11]。病理?yè)p害的不同在于2個(gè)蟲(chóng)種的蟲(chóng)卵具有各自不同的分布特征。

Ito[12]關(guān)于日本血吸蟲(chóng)感染的實(shí)驗(yàn)兔和實(shí)驗(yàn)鼠的研究中，發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)卵引起的損害主要位于十二指腸下段至空腸上部，其他部位少見(jiàn)。本次實(shí)驗(yàn)揭示自然感染東畢吸蟲(chóng)山羊，蟲(chóng)卵主要沉積于小腸部位，產(chǎn)生的病理?yè)p害也主要集中于小腸部分，這與Ito報(bào)道一致。

4 結(jié) 論

本次試驗(yàn)首次揭示了西藏尼木自然感染東畢吸蟲(chóng)山羊，蟲(chóng)卵體內(nèi)分布與病理?yè)p害情況，豐富了東畢吸蟲(chóng)的研究，明確東畢吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵在山羊體內(nèi)的分布規(guī)律、主要寄生部位等，為下一步研究提供參考。

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(責(zé)任編輯 陳 虹)

Survey of Distribution of Deposited Eggs and Pathological Conditions of Goat Naturally Infected withOrientobilharziain Nimu County of Tibets

SHI Bin1,LIU Jian-zhi1*, ZHU Chuan-gang2*,LIU Jin-ming2,XIA Chen-yang1,LI Hao2,LU Ke2,TANG Wen-qiang1, BIAN Ji3, Suolangquzhen4,Baimazhusha5,Cizhen5

(1.Institute of Animal Science,Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences,Tibet Lhasa 850009, China;2.Shanghai Veterinary Research Institute,CAAS,Shanghai 200241,China;3.Veterinary Station of Nimu County Agriculture and Animal Husbandry Bureau,Tibet Lhasa 851300,China;4.Dangquka Animal Prevention Institute located in Damxung County,Tibet Lhasa 851500,China;5.Gongtang Animal Prevention Institute located in Damxung County,Tibet Lhasa 851500,China)

【Objective】 The study aims to study the distribution characteristics of deposited eggs and pathological changes in the viscera of goat naturally infected withOrientobilharzia. 【Methods】Goat naturally infected withOrientobilharziain Nimu county of Tibet were sacri?ced and the number of worms were counted. Meanwhile, the goat’s livers, spleens and intestines (duodenum, the upper, middle and lower section of the small intestine, cecum, colon, and rectums) were separated to observe the egg and pathological change under microscope. 【Results】There were 1435±231.5 adult worms found in the naturally infected goat. Among all the viscera observed，the middle small intestine had the largest number of eggs per gram, followed by those in duodenum and in cecum. The percentage of eggs deposited were: duodenum (3.50 %), the upper small intestine (12.57 %), the middle small intestine (56.41 %), the lower small intestine (0.52 %), cecum (18.83 %), colon (0.00 %), rectum (0.01 %), liver(8.16 %) and spleen (0.00 %). There was significant difference of egg number between the middle section of small intestine and the others viscera(P<0.01), and the totally egg number in small intestine (73.00 %) was obviously the largest in all observed viscera. Tissue pathological observation showed that there were lots of egg granuloma nodule in the middle small intestine, which accompanied by mucosal inflamed and mild necrosis. 【Conclusion】The amount and the density of deposited eggs ofOrientobilharziain the viscera of infected goat are different, and the pathogenesis was correlated with the deposition of eggs.

Tibet; Goat;Orientobilharzia; Distribution of eggs; Pathological section

1001-4829(2017)6-1458-05

10.16213/j.cnki.scjas.2017.6.037

2016-06-07

公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專(zhuān)項(xiàng)(201303037)；2016年度西藏自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2016ZR-NK-06)

石 斌(1991-)，男，研究實(shí)習(xí)員，主要從事家畜寄生蟲(chóng)病研究，E-mail：18989902737@163.com，*為通訊作者：劉建枝(1964-)，女，副研究員，研究方向?yàn)槲鞑丶倚蠹纳x(chóng)病防控，E-mail：13659526886@163.com，朱傳剛(1966-)，男，博士，副研究員，主要從事血吸蟲(chóng)的分子生物學(xué)、轉(zhuǎn)基因血吸蟲(chóng)以及免疫預(yù)防等方面研究。

S826

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