芩香清解口服液的急性毒性和長(zhǎng)期毒性研究

黃娟萍，和 芳，白音夫，顧 凱，朱 明，黃夏夢(mèng)，鄧湘俊，王顯著#

(1.廣州一品紅制藥有限公司研發(fā)中心，廣東 廣州 510765； 2.北京創(chuàng)立科創(chuàng)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司研發(fā)部，北京 100029； 3.內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)研究所藥理室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

?

芩香清解口服液的急性毒性和長(zhǎng)期毒性研究

黃娟萍1*，和 芳2，白音夫3，顧 凱3，朱 明3，黃夏夢(mèng)1，鄧湘俊1，王顯著1#

(1.廣州一品紅制藥有限公司研發(fā)中心，廣東 廣州 510765； 2.北京創(chuàng)立科創(chuàng)醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司研發(fā)部，北京 100029； 3.內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)研究所藥理室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

目的：探討芩香清解口服液對(duì)小鼠的急性毒性和對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性。方法：(1)采用最大給藥劑量測(cè)定法進(jìn)行小鼠急性毒性試驗(yàn)。(2)選取大鼠80只進(jìn)行長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，隨機(jī)分為低、中、高劑量組和對(duì)照組，每組20只。于每日上午10點(diǎn)左右給藥，低、中、高劑量組大鼠分別給予芩香清解稠膏40、60、80 g/kg，對(duì)照組大鼠給予相同體積的蒸餾水，連續(xù)灌胃給藥4周，停藥2周進(jìn)行恢復(fù)性觀察。觀察大鼠體征、血液分析、臟器系數(shù)、肝腎功能及組織切片。結(jié)果：急性毒性試驗(yàn)中，小鼠給藥后活動(dòng)減少，未見其他癥狀。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中，大鼠體征、血液分析、臟器系數(shù)、肝腎功能及組織切片均未見明顯改變。結(jié)論：芩香清解口服液在本研究條件下未發(fā)現(xiàn)急性毒性和長(zhǎng)期毒性反應(yīng)，提示該藥毒性小，安全性高。

芩香清解口服液； 急性毒性試驗(yàn)； 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)

芩香清解口服液是在內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)院小兒科臨床應(yīng)用多年經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上研制的中藥復(fù)方制劑，主要由黃芩、廣藿香等12味藥材組成，具有疏散風(fēng)熱、清瀉里熱、解毒利咽的功效，主要用于小兒上呼吸道感染表里俱熱證，癥見發(fā)熱、鼻塞、流涕、咳嗽、咽紅腫痛、便秘、口渴煩躁、舌紅苔黃、脈洪數(shù)等。本研究探討了芩香清解口服液對(duì)小鼠的急性毒性和對(duì)大鼠長(zhǎng)期毒性，以便為臨床用藥提供依據(jù)，初步探討其臨床用藥安全性。

1 材料

1.1 儀器

顯微鏡(北航醫(yī)學(xué)圖象分析管理系統(tǒng))；BP211D型電子天平(德國(guó)Sartorius公司)；TGL-20M型高速冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙維爾康湘鷹離心機(jī)有限公司)；BC-5380貝克曼全血細(xì)胞分析儀(美國(guó)Bekman-Clouter公司)；42型半自動(dòng)生化分析儀(英國(guó)Bekman公司)。

1.2 藥品與試劑

芩香清解稠膏(含生藥量5 g/ml，由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)：20010901；20 kg兒童每日服用量以生藥量算為20 g)；其他相關(guān)試劑由北京生物工程高技術(shù)公司生產(chǎn)。

1.3 動(dòng)物

昆明種小鼠32只，體質(zhì)量19～21 g，雌雄各半，動(dòng)物號(hào)：京動(dòng)字8806M35；Wistar種大鼠80只，體質(zhì)量54～72 g，鼠齡4～5周，雌雄各半，動(dòng)物號(hào)：京動(dòng)字8806R011；均內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法

2.1 急性毒性試驗(yàn)

(1)毒性預(yù)測(cè)定：取12只小鼠(禁食6 h)均分為三組，分別灌胃給予芩香清解稠膏0.2、0.3、0.4 ml/10 g，1日3次，給藥1 d，給藥后觀察14 d內(nèi)小鼠死亡情況。(2)日最大給藥量測(cè)定：取20只小鼠(禁食6 h)，灌胃給予芩香清解稠膏0.4 ml/10 g、1日3次，給藥后觀察7 d，每日給藥后觀察小鼠的表現(xiàn)，主要包括自主活動(dòng)、毛發(fā)生長(zhǎng)、飲食量、有無(wú)異常分泌物、脹氣等，并在給藥后第1、3、5、7、14日測(cè)定小鼠體質(zhì)量[1-6]。

2.2 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)

選取大鼠80只，隨機(jī)分為低、中、高劑量組和對(duì)照組，每組20只。每籠飼養(yǎng)5只，給藥前觀察1周，確認(rèn)每只大鼠均無(wú)異常。于每日上午10點(diǎn)左右給藥，低、中、高劑量組大鼠分別給予芩香清解稠膏40、60、80 g/kg，對(duì)照組大鼠給予相同體積的蒸餾水，1日1次，連續(xù)給藥4周。給藥后觀察大鼠的表現(xiàn)，主要包括自主活動(dòng)、毛發(fā)生長(zhǎng)、糞便性狀、顏色、飲食量、有無(wú)異常分泌物、脹氣等。每周測(cè)定體質(zhì)量1次。研究期間保持室內(nèi)溫度18～22 ℃，相對(duì)濕度40%～75%。給藥4周后由尾尖采血，做血液分析，然后用乙醚吸入麻醉、解剖，從腹主動(dòng)脈采血，測(cè)定肝、腎功能，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢、腦等形態(tài)、顏色、大小等情況，并測(cè)定有關(guān)臟器系數(shù)，最后做不同組織的病理切片檢查[5-10]。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

(1)毒性預(yù)測(cè)定結(jié)果：14 d內(nèi)無(wú)小鼠死亡。因濃度和體積限制，半數(shù)致死量(median lethal dose，LD50)無(wú)法求出。(2)小鼠一般臨床體征：給藥后，小鼠活動(dòng)相對(duì)減少，1 h左右恢復(fù)；毛發(fā)生長(zhǎng)光滑亮澤，膚色正常，無(wú)異常分泌物；行為、飲食均正常、無(wú)脹氣；未見其他不良反應(yīng)，14 d內(nèi)無(wú)死亡。(3)小鼠體質(zhì)量：給藥期間，小鼠體質(zhì)量無(wú)明顯變化；給藥后常規(guī)飼養(yǎng)2周觀察，體質(zhì)量生理性略有增長(zhǎng)，表明芩香清解稠膏對(duì)小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)無(wú)明顯促進(jìn)和抑制作用，見表1。(4)日最大給藥量：結(jié)果表明，1日內(nèi)連續(xù)累計(jì)給藥600 g/kg時(shí)，無(wú)小鼠死亡，也未見明顯不良反應(yīng)。(5)兒童服用劑量推斷：耐受倍數(shù)=(小鼠每日累計(jì)服用量/小鼠平均體質(zhì)量)/(兒童每日用量/兒童平均體質(zhì)量)=600倍。經(jīng)計(jì)算，給予兒童(體質(zhì)量20 kg；服用劑量以生藥量計(jì)算為20 g)服用劑量的600倍，不會(huì)有明顯不良反應(yīng)。

表1 小鼠體質(zhì)量變化

3.2 大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)結(jié)果

(1)大鼠一般臨床體征：低、中、高劑量組大鼠在給藥30 min后，糞稀色黑，1 h后恢復(fù)正常；四組大鼠毛發(fā)生長(zhǎng)光滑亮澤，膚色正常，均無(wú)異常分泌物，行為、飲食均正常、無(wú)脹氣。表明，芩香清解稠膏對(duì)大鼠一般臨床體征無(wú)明顯不良影響，且停藥2周后也未見不良反應(yīng)。(2)大鼠體質(zhì)量：服藥期間及停藥2周后，四組大鼠體質(zhì)量的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明芩香清解稠膏對(duì)大鼠體質(zhì)量無(wú)明顯促進(jìn)和抑制作用，也無(wú)因停藥使大鼠體質(zhì)量增加異常或生長(zhǎng)抑制作用，見表2。(3)大鼠血液情況：治療后，四組大鼠血液分析結(jié)果基本一致，停藥2周后也未發(fā)現(xiàn)異常。表明芩香清解稠膏對(duì)大鼠血液情況無(wú)明顯不良影響，見表3。(4)大鼠肝功能：用酶法測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、膽固醇(CHO)，用比色法測(cè)定血清白蛋白(ALB)，用重氮法測(cè)定膽紅素(BIL)。結(jié)果表明，該藥對(duì)大鼠肝功能無(wú)明顯影響；停藥2周后也未見肝功能有異常變化，說(shuō)明該藥長(zhǎng)期服用是安全的，見表4。(5)大鼠腎功能：用終點(diǎn)法測(cè)定血尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)。結(jié)果表明，該藥對(duì)大鼠腎功能無(wú)明顯不良影響；停藥2周后也未見腎功能有異常變化，見表5。(6)大鼠解剖觀察：給藥4周后及停藥2周后，四組大鼠均用乙醚吸入麻醉，并立刻解剖，從腹主動(dòng)脈插管放血使其死亡。按消化、泌尿、生殖、內(nèi)分泌、呼吸、循環(huán)、中樞系統(tǒng)進(jìn)行肉眼觀察；消化系統(tǒng)重點(diǎn)察看肝、脾、胃、十二指腸、胰腺；泌尿系統(tǒng)察看腎臟；生殖系統(tǒng)察看睪丸、附睪、前列腺、精囊腺、子宮、卵巢；內(nèi)分泌察看腎上腺、甲狀腺、胸腺；呼吸循環(huán)系統(tǒng)察看肺心；中樞系統(tǒng)察看大腦、小腦、腦干。主要察看大小、顏色、形態(tài)、黏連、瘀血、潰瘍、積液、異常腫物、脹氣。結(jié)果表明，四組大鼠均未發(fā)現(xiàn)明顯病理改變。(7)大鼠臟器系數(shù)測(cè)定：對(duì)心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、甲狀腺、卵巢、子宮、睪丸、附睪指數(shù)測(cè)定。結(jié)果表明，該藥對(duì)大鼠不同臟器及腺體組織無(wú)損害作用而引起的肥大或萎縮，也無(wú)生長(zhǎng)促進(jìn)或抑制作用，停藥2周后四組大鼠均未見明顯改變，見表6。(8)大鼠組織切片檢查：取服藥4周后及停藥2周后的高劑量組、對(duì)照組大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、甲狀腺、子宮、卵巢、睪丸、附睪、前列腺、胰腺、大腦、胃、結(jié)腸，進(jìn)行病理切片檢査。結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)明顯病理改變，高劑量組大鼠與對(duì)照組基本一致，組織切片結(jié)果見圖1。由于高劑量組未做出與樣品有關(guān)的毒性反應(yīng)，故中、低劑量組免做組織病理切片檢查。

表2 大鼠體質(zhì)量變化

表3 四組大鼠血液分析情況比較

表4 四組大鼠肝功能情況比較

表5 四組大鼠腎功能比較Tab 5 Comparison of renal function of rats among

4 討論

芩香清解口服液由黃芩[11-12]、赤芍[13]、甘草、大黃[14]、蟬蛻[15]、石膏、板藍(lán)根[16-17]、桔梗[18]、山豆根、玄參等12味常用藥材組成，有效成分明確。相關(guān)文獻(xiàn)資料顯示，上述藥材及有效成分基本無(wú)明顯毒副作用。

本研究取芩香清解稠膏80、60、40 g/kg(相當(dāng)臨床芩香清解口服液用量80、60、40倍)，給予大鼠灌胃，1日1次，連續(xù)給藥4周。對(duì)大鼠進(jìn)行體質(zhì)量、飲食量、活動(dòng)、外周血象、肝腎生化功能檢查、臟器解剖檢查、相關(guān)組織病理學(xué)切片檢查，結(jié)果顯示,均未發(fā)現(xiàn)因藥物引起的中毒反應(yīng)。對(duì)停藥2周的恢復(fù)期大鼠觀察上述指標(biāo)，也未見藥物引起的遲發(fā)性毒性反應(yīng)。芩香清解口服液由芩香清解稠膏稀釋后加入適量惰性輔料蔗糖和吐溫80,定容至相應(yīng)體積滅菌后即得，芩香清解稠膏毒性研究可間接反映芩香清解口服液相關(guān)安全性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芩香清解口服液毒性低，在規(guī)定劑量下服用安全。同時(shí)在醫(yī)師指導(dǎo)下提高服用量一般不會(huì)出現(xiàn)不良反應(yīng)。

表6 四組大鼠臟器系數(shù)比較

1.對(duì)照組，心，×20；2.高劑量組，心，×40；3.對(duì)照組，肝，×20；4.高劑量組，肝，×20；5.對(duì)照組，脾，×20；6.高劑量組，脾，×20；7.對(duì)照組，肺，×20；8.高劑量組，肺，×20；9.對(duì)照組，腎，×40；10.高劑量組，腎，×40；11.對(duì)照組，腎上腺，×20；12.高劑量組，腎上腺，×20；13.對(duì)照組，甲狀腺，×40；14.高劑量組，甲狀腺，×40；15.對(duì)照組，胸腺，×20；16.高劑量組，胸腺，×20；17.對(duì)照組，子宮，×20；18.高劑量組，子宮，×20；19.對(duì)照組，卵巢，×20；20.高劑量組，卵巢，×20；21.對(duì)照組，睪丸，×20；22.高劑量組，睪丸，×20；23.對(duì)照組，附睪，×20；24.高劑量組，附睪，×20；25.對(duì)照組，結(jié)腸，×20；26.高劑量組，結(jié)腸，×40；27.對(duì)照組，胃，×20；28.高劑量組，胃，×20；29.對(duì)照組，大腦，×20；30.高劑量組，大腦，×20；31.對(duì)照組，前列腺，×20；32.高劑量組，前列腺，×20；33.對(duì)照組，胰腺，×20；34.高劑量組，胰腺，×401.control group, heart, ×20; 2.high dose group, heart, ×40; 3.control group, liver, ×20; 4.high dose group, liver, ×20; 5.control group, spleen, ×20;6.high dose group, spleen, ×20; 7.control group, lung, ×20； 8.high dose group, lung, ×20；9.control group, renal, ×40; 10.high dose group, renal, ×40; 11.control group, adrenal gland, ×20; 12.high dose group, adrenal gland, ×20; 13.control group, thyroid, ×40; 14.high dose group, thyroid, ×40; 15.control group, thymus, ×20; 16.high dose group, thymus, ×20; 17.control group, uterus, ×20; 18.high dose group, uterus, ×20; 19.control group, ovary, ×20; 20.high dose group, ovary, ×20; 21.control group, testis, ×20; 22.high dose group, testis, ×20; 23.control group, epididymis, ×20; 24.high dose group, epididymis, ×20; 25.control group, colon, ×20; 26.high dose group, colon, ×40; 27.control group, stomach, ×20; 28.high dose group, stomach, ×20; 29.control group, cerebrum, ×20; 30.high dose group, cerebrum, ×20; 31.control group, prostate, ×20; 32.high dose group, prostate, ×20; 33.control group, pancreas, ×20; 34.high dose group， pancreas, ×40圖1 不同組織蘇木精-伊紅染色切片圖Fig 1 Figure of different organizations HE staining slice

[1]趙晉寧，謝雁鳴，張文軍，等.骨碎補(bǔ)總黃酮急性毒性實(shí)驗(yàn)[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2005，24(1)：12-14.

[2]黃偉，趙燕，孫蓉.吳茱萸不同組分對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)比較研究[J].中國(guó)藥物警戒，2010，7(3)：129-134.

[3]楊洋，王敏，張祺嘉鈺，等.地麥止咳口服液小鼠連續(xù)多次給藥的急性毒性試驗(yàn)[J]，現(xiàn)代中醫(yī)藥，2014，34(2)：74-75.

[4]馬文俊，紅梅，王健，等.藏藥安兒寧顆粒毒理學(xué)研究[J]，中南藥學(xué)，2015，13(1)：24-28.

[5]阿不都熱依木·玉蘇甫，古孜力努爾·依馬木，麥合素木·艾克木，等.異黑成熟顆粒的急性毒性和長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，34(12)：1320-1325.

[6]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：752-759.

[7]高建波，劉云.大黃顆粒對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究[J]，中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20(22)：4-6.

[8]高敏，倪凱，王曙光，等.扶正抗毒膠囊長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)[J]，云南中醫(yī)中藥雜志，2013，34(4)：50-52.

[9]王江融，張紅雷，劉用國(guó).護(hù)肝片大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究[J]，海峽藥學(xué)，2016，28(4)：37-41.

[10] 王林麗，呂金勝，李卓恒，等.金嗓口服液大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究[J]，藥物研究，2013，22(2)：13-14.

[11] 王雅芳，李婷，唐正海，等.中藥黃芩的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2015，33(1)：206-211.

[12] 鄭勇鳳，王佳婧，傅超美，等.黃芩的化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].中成藥，2016，38(1)：141-147.

[13] 姚旭，于文會(huì).赤芍和川芎及其配伍對(duì)血淤模型大鼠血液流變學(xué)影響[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34(6)：120-122.

[14] 曾芳，李媛.大黃有效化學(xué)成分及其藥理作用[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2013，19(12)：149-150.

[15] 楊璐，李國(guó)玉，王金輝.蟬蛻化學(xué)成分和藥理作用的研究現(xiàn)狀[J].農(nóng)墾醫(yī)學(xué)，2011，33(2)：184-186.

[16] 黃偉，陳海燕.板藍(lán)根有效成分抗病毒研究進(jìn)展[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2015，28(1)：96.

[17] 楊建昕，李峰，李娜，等.板藍(lán)根抗病毒活性成分研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，18(7)：141-143.

[18] 李婷，徐文珊，李西文，等.中藥桔梗的現(xiàn)代藥理研究進(jìn)展[J].中藥藥理與臨床，2013，29(2)：205-208.

Study on Acute and Long-term Toxicity of Qinxiangqingjie Oral Solution

HUANG Juanping1, HE Fang2, BAI Yinfu3, GU Kai3, ZHU Ming3, HUANG Xiameng1, DENG Xiangjun1, WANG Xianzhu1

(1.Research and Development Center, Guangzhou Yipinhong Pharma-ceutical Co. Ltd., Guangdong Guangzhou 510760, China; 2.Dept.of Research and Development, Beijing Supertrack Medical Technology Develop Co. Ltd, Beijing 100029, China; 3.Dept.of Pharm-acology, Inner Mongolia Institute of Traditional Chinese-Mongolian Medicine, Inner Mongolia Hohhot 010020, China)

OBJECTIVE: To probe into the effects of Qinxiangqingjie oral solution on acute toxicity in mice and long-term toxicity in rats. METHODS: (1)Maximum dosimetry was adopted to conduct the acute toxicity test. (2)80 rats extracted for the long-term toxicity test were randomly divided into low, medium and high dose group and control group, with 20 cases in each. Drugs were given at 10:00 am everyday, low, medium and high dose group were respectively treated with Qinxiangqingjie oral solution of 40 g/kg, 60 g/kg and 80 g/kg, yet the control group

the same volume of distilled water; continuous gastric infusion were given for 4 weeks, with drug withdrawal for 2 weeks. Rats’ signs, blood analysis, organ coefficient, liver, renal function and tissue slice were observed. RESULTS: During the acute toxicity test, the mice decreased the activity after administration, yet there were no other symptoms. During the long-term toxicity test, there was no significant changes in rats’ signs, blood analysis, organ coefficient, liver, renal function and tissue slice. CONCLUSIONS: Under this experiment condition, there are no acute and long-term toxicity fund in Qinxiangqingjie oral solution, which indicates that Qinxiangqingjie oral solution is safe and reliable.

Qinxiangqingjie oral solution; Acute toxicity; Long term toxicity

R99

A

1672-2124(2017)07-0934-04

2017-03-12)

*工程師，碩士。研究方向：新藥研發(fā)。E-mail：390447099@qq.com

#通信作者：高級(jí)工程師，碩士。研究方向：新藥研發(fā)。E-mail：wxz971509@163.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.07.026