袁常珍，梅 剛

(1.瀘州市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 瀘州 646000； 2.瀘州市瀘縣中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，四川 瀘州 646000)

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高效液相色譜法測(cè)定柴芍胃炎顆粒中芍藥苷的含量

袁常珍1*，梅 剛2

(1.瀘州市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 瀘州 646000； 2.瀘州市瀘縣中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，四川 瀘州 646000)

目的：采用高效液相色譜法測(cè)定柴芍胃炎顆粒中芍藥苷含量。方法：色譜柱為ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=22 ∶78)，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫為30 ℃。結(jié)果：芍藥苷的質(zhì)量濃度在49.68～186.3 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 7，n=5)，芍藥苷質(zhì)量濃度的平均加樣回收率為96.05%，RSD為0.56%(n=6)。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、靈敏、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可用于柴芍胃炎顆粒的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法； 柴芍胃炎顆粒； 芍藥苷； 含量測(cè)定

柴芍胃炎顆粒是西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院自制制劑，由柴胡、白芍、丹參等13味藥制成，有舒肝和胃、清熱止痛的功效，用于肝胃不和、肝胃郁熱所致的胃脘脹痛、灼痛噯氣、口干口苦、情志不暢加重等癥。自2003年生產(chǎn)以來(lái)，其療效顯著，應(yīng)用廣泛。白芍為方中主藥，白芍中的芍藥苷是該藥的有效成分之一。本研究采用高效液相色譜法測(cè)定柴芍胃炎顆粒中芍藥苷的含量，為其質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Angilent 1200型高效液相色譜儀(安捷倫科技公司)；LC 3D系統(tǒng)化學(xué)工作站(版權(quán)所有：安捷倫科技2001-2007)；安捷倫G1329A型液相色譜進(jìn)樣器(安捷倫科技公司)；XS205DU型電子天平(梅特勒-托利多公司)；KH7200B型超聲清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。

1.2 藥品與試劑

芍藥苷(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110736-201539)；柴芍胃炎顆粒(瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，批準(zhǔn)文號(hào)：川藥制字Z20080300，批號(hào)：20161213、20161228、20161230，規(guī)格：1袋10 g)；乙腈為色譜純(美國(guó)Fisher Scientific公司)，水為重蒸餾水，磷酸為分析純(重慶川東化工集團(tuán)有限公司化學(xué)試劑廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫為30 ℃；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=22∶78)；流速為1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm；進(jìn)樣量為10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備溶液：精密稱取芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：20161213)12.44 mg，置于50 ml容量瓶中，加適量甲醇溶解，超聲處理(頻率：40 kHz，功率：2 kW)30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得248.4 μg/ml的對(duì)照品貯備溶液。

2.2.2 供試品溶液：取樣品(批號(hào)：20161213)5袋，研細(xì)，精密稱取約0.5 g，置于20 ml容量瓶中，加甲醇適量溶解，超聲處理(頻率：40 kHz，功率：2 kW)30 min[1-3]，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液：按處方比例計(jì)算，制成缺白芍的陰性樣品100 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：精密量取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明，對(duì)照品溶液與供試品溶液主成分峰的保留時(shí)間基本一致，供試品溶液主成分峰形對(duì)稱，基線分離，且與其余雜質(zhì)峰分離良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，見圖1。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算>5 000。

A.對(duì)照品貯備溶液；B.供試品溶液；C.陰性對(duì)照溶液A.reference solution; B.test solution; C.negative reference solution圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatography

2.3.2 線性關(guān)系考察：精密量取芍藥苷對(duì)照品貯備溶液(248.4 μg/ml)2、3、5 ml，分別置于10 ml容量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得49.68、74.52、124.2 μg/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液[4-5]；精密量取芍藥苷對(duì)照品貯備溶液(248.4 μg/ml)5、15 ml，分別置于20 ml容量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得62.10、186.3 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密量取上述5個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各10 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以芍藥苷峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程Y=11.68X-5.8(r=0.999 7，n=5)。結(jié)果表明，芍藥苷質(zhì)量濃度在49.68～186.3 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品貯備溶液(248.4 μg/ml)5 ml，置于20 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得濃度為62.10 μg/ml的對(duì)照品溶液，精密量取10 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積[6-7]。結(jié)果表明，RSD為 0.63%(n=6)，儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品(批號(hào)：20161213)適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在室溫(25 ℃)下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積[8-9]。結(jié)果表明，RSD=0.75%(n=6)，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)：20161213，含量2.581 2 mg/g)3份，每份約0.5 g，置于20 ml容量瓶中，分別精密加入對(duì)照品貯備溶液(248.4 μg/ml)2、5、10 ml[6，10-11]，加甲醇適量，超聲處理(頻率：40 kHz，功率：2 kW)30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品(批號(hào)：20161213)6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果表明，芍藥苷的平均含量為2.581 2 mg/g，RSD=0.58%(n=6)，方法重復(fù)性良好。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品(批號(hào)：20161213、20161228、20161230)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算樣品中芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 芍藥苷的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

柴芍胃炎顆粒的主藥之一柴胡中的柴胡皂苷a、d的含量測(cè)定已有研究[12]，故本研究選取芍藥苷和丹酚酸B為指標(biāo)成分。本研究同時(shí)探討了芍藥苷和丹酚酸B兩個(gè)成分的含量測(cè)定，按擬定的色譜條件，可同時(shí)準(zhǔn)確測(cè)定兩個(gè)成分含量，但因提取溶劑為甲醇，丹酚酸B提取可能不完全，導(dǎo)致丹酚酸B含量偏低，故未在結(jié)果中呈現(xiàn)，接下來(lái)的研究中應(yīng)繼續(xù)深入探討。

本研究曾采用芍藥苷和丹酚酸B混合對(duì)照溶液進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)成分各有特征吸收波長(zhǎng)，不能合并；而分別進(jìn)樣測(cè)定時(shí)發(fā)現(xiàn)，芍藥苷在230 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，峰形對(duì)稱，響應(yīng)度高，丹酚酸B在該波長(zhǎng)響應(yīng)度低；丹酚酸B在286 nm波長(zhǎng)處響應(yīng)度高，峰形對(duì)稱。故若同時(shí)測(cè)定芍藥苷和丹酚酸B，只能采用230、286 nm雙波長(zhǎng)測(cè)定。

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料[13-16]，本研究探討了流動(dòng)相分別為乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=25 ∶75)、(V∶V=15 ∶85)、(V∶V=22 ∶78)及乙腈-0.2%磷酸二氫鉀溶液(V∶V=16 ∶84)時(shí)的色譜圖，結(jié)果表明乙腈-磷酸系統(tǒng)更適合本制劑，且V∶V=22 ∶78時(shí)芍藥苷的峰形好、理論板數(shù)高、回收率好，與雜質(zhì)分離完全，故選取乙腈-0.1%磷酸溶液(V∶V=22 ∶78)作為流動(dòng)相。

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Content Determination of Paeoniflorin in Chaishao Gastritis Granules by HPLC

YUAN Changzhen1, MEI Gang2

(1.Luzhou Food and Durg Inspection Institute,Sichuan Luzhou 646000, China; 2.Dept.of Pharmacy, Luzhou Luxian County Traditional Chinese Medicine Hospital, Sichuan Luzhou 646000, China)

OBJECTIVE:To establish a method for content determination of paeoniflorin in Chaishao gastritis granules by HPLC. METHODS: The column was ZORBAX SB-C18column(250 mm×4.6 mm, 5 μm), the mobile phase consist of acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution(V∶V=22∶78), with detective wave length of 230 nm, flow rate of 1.0 ml/min and column temperature of 30 ℃. RESULTS: The calibration curve of paeoniflorin was linear over the range of 49.68 μg/ml-186.3 μg/ml (r=0.999 7，n=5). The average recovery rate was 95.05%,RSDwas 0.56% (n=6). CONCLUSIONS: This method is simple,sensitive, accurate and reliable, and can be used for the quality control of Chaishao gastritis granules.

HPLC; Chaishao gastritis granules; Paeoniflorin; Content determination

R927.2

A

1672-2124(2017)07-0938-03

2017-03-03)

*主管中藥師。研究方向：藥品檢驗(yàn)。E-mail：270414608@qq.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.07.027